應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)肝炎病毒血清標(biāo)志物臨界結(jié)果的報(bào)告分析

鄭 赫

（遼寧省大連市金州區(qū)第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 大連 116000）

應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)肝炎病毒血清標(biāo)志物臨界結(jié)果的報(bào)告分析

鄭 赫

（遼寧省大連市金州區(qū)第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 大連 116000）

目的 分析酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定肝炎病毒血清標(biāo)志物假陽(yáng)性的臨界值、產(chǎn)生原因及處理方法。方法 收集2010年1月至2013年8月期間，我院接受肝炎病毒篩查的患者370例，取血液標(biāo)本采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行肝炎病毒血清標(biāo)志物檢測(cè)，對(duì)于報(bào)告結(jié)果為假陰性或者假陽(yáng)性者進(jìn)行臨界值分析。結(jié)果 本組370份標(biāo)本中，檢出HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb弱陽(yáng)性依次為8例（14.0%）、65例（34.8%）、2例（13.3%）、14例（17.1%）、16例（14.3%）；15例HBeAb陰性和12例HBcAb陰性。結(jié)論 弱陽(yáng)性標(biāo)本往往存在臨界值問(wèn)題，檢測(cè)中存在時(shí)陰時(shí)陽(yáng)的情況。在臨床檢驗(yàn)中，在報(bào)告陰性、陽(yáng)性結(jié)果的同時(shí)應(yīng)報(bào)告臨界值以及標(biāo)本OD值。臨界值直接影響著檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)盡量避免，應(yīng)用統(tǒng)一臨界值質(zhì)控血清對(duì)于提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性具有重要意義。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；肝炎病毒；血清標(biāo)志物；臨界值

肝炎病毒血清免疫學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)是臨床診斷肝炎患病情況及判斷病情、傳染性等的重要手段。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA法）因具有簡(jiǎn)便快速、特異性好、靈敏度高以及特異性強(qiáng)等特點(diǎn)而在臨床中廣泛應(yīng)用。其診斷方法主要是根據(jù)配套試劑所設(shè)定的判斷值進(jìn)行判斷，因該法在檢測(cè)中受到的影響因素較多，檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性不好，極易導(dǎo)致處于判斷值周圍的標(biāo)本產(chǎn)生假陰性或者假陽(yáng)性[1]。目前，如何正確處理和報(bào)告肝炎病毒血清標(biāo)志物檢查臨界結(jié)果是臨床檢驗(yàn)人員關(guān)注的重點(diǎn)問(wèn)題。本文就臨床實(shí)踐過(guò)程中出現(xiàn)的臨界值情況進(jìn)行探討，旨在為臨床報(bào)告和處理臨界結(jié)果提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

選取2010年1月至2013年8月期間，我院門診以及住院患者370例的血清標(biāo)本，均接受乙肝病毒血清標(biāo)志物檢測(cè)。

1.2 儀器和試劑

TECAN SUNRISE酶標(biāo)儀，TECAN HydroFlex 洗板機(jī)，移液器由賽默飛世爾科技公司提供。乙肝五項(xiàng)標(biāo)志物試劑盒由上海科華公司生產(chǎn)，質(zhì)控品均選自衛(wèi)生部檢驗(yàn)中心。

1.3 方法

所有操作均嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。HBcAb按照1∶30的比例進(jìn)行稀釋，將標(biāo)本與質(zhì)控品同時(shí)進(jìn)行檢驗(yàn)；質(zhì)控品HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的含量依次為2ng/mL、2mIu/mL、30mIu/mL，4NCU/mL，2NCU/mL。臨界值計(jì)算嚴(yán)格按照說(shuō)明書提供計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算，其中，HbsAg、HBeAg及HBsAb的計(jì)算公式相同，對(duì)于平均陰性值＜0.05者，均按照0.05×2.1=0.105報(bào)告。即標(biāo)本OD＞0.105表示陽(yáng)性，反之則為陰性。HBeAb的臨界值計(jì)算為（平均陽(yáng)性值+平均陰性值）/2。如標(biāo)本的OD值＜臨界值則為陽(yáng)性，反之則為陰性。HBcAb的臨界值計(jì)算為0.5×平均陰性O(shè)D值。臨界值判斷與HBeAb相同。

2 結(jié) 果

本組370份受檢標(biāo)本中，57份為HBsAg陽(yáng)性，其中，8份為弱陽(yáng)性（標(biāo)本OD≤2ng/mL質(zhì)控品的OD），占總陽(yáng)性數(shù)的14.0%。187份為HBsAb陽(yáng)性，其中65份為弱陽(yáng)性（標(biāo)本OD≤2ng/mL質(zhì)控品的OD），占總陽(yáng)性數(shù)的34.8%；15份為HBeAg陽(yáng)性，其中，2份為弱陽(yáng)性（標(biāo)本OD為0.157、0.114），占總陽(yáng)性數(shù)的13.3%；82份為HBeAb陽(yáng)性其中，14份為弱陽(yáng)性（標(biāo)本OD＜臨界值0.2），占17.1%；15份為弱陰性標(biāo)本（標(biāo)本OD＞臨界值0.2）；112例為HBcAb陽(yáng)性，其中16例（14.3%）為弱陽(yáng)性，12例為弱陰性（標(biāo)本OD＞臨界值0.2）。

3 討 論

3.1 臨界結(jié)果的干擾因素

臨床研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于肝炎病毒標(biāo)志物測(cè)定為強(qiáng)陽(yáng)性患者而言，多次復(fù)查仍為陽(yáng)性，而對(duì)于弱陽(yáng)性或者弱陰性患者而言，其OD值越接近臨界值，重復(fù)性就會(huì)越差，在復(fù)查中極易出現(xiàn)時(shí)陰時(shí)陽(yáng)的情況，導(dǎo)致患者或者臨床難以接受[2]。ELISA法的影響因素較多，例如試劑盒質(zhì)量、儀器未校準(zhǔn)、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本溶血、標(biāo)本凝固不全、劇烈震蕩樣本以及檢測(cè)時(shí)操作誤差等，均可導(dǎo)致測(cè)量值誤差而出現(xiàn)臨界結(jié)果[3]。本研究中，340例經(jīng)ELISA檢查后，共有105例顯示為弱陽(yáng)性，28例顯示為弱陰性。

3.2 臨界值范圍的界定

對(duì)于ELISA法臨界值的判定，目前尚無(wú)統(tǒng)一的臨界范圍界定標(biāo)準(zhǔn)，國(guó)內(nèi)主要是根據(jù)試劑盒上提供的判斷值作為依據(jù)進(jìn)行判斷，對(duì)測(cè)定結(jié)果未要求進(jìn)行復(fù)檢，而進(jìn)口試劑盒多要求進(jìn)行復(fù)檢，但對(duì)于陰性結(jié)果小于判定值者亦未要求復(fù)檢。此外，進(jìn)口檢驗(yàn)試劑盒中，對(duì)于陽(yáng)性結(jié)果均要求進(jìn)行雙份復(fù)檢，對(duì)于陰性結(jié)果報(bào)告均要求以雙孔測(cè)定呈陰性時(shí)方可報(bào)告為陰性，對(duì)于復(fù)檢雙孔中一陰一陽(yáng)者要求進(jìn)行確認(rèn)實(shí)驗(yàn)[3]。因此，臨床實(shí)踐中應(yīng)根據(jù)具體情況而定，可選擇低濃度定值室內(nèi)質(zhì)控品進(jìn)行陽(yáng)性臨界復(fù)檢范圍的設(shè)定，并對(duì)弱陽(yáng)性以及較為接近判定值的陰性標(biāo)本進(jìn)行多次復(fù)檢，以初檢和復(fù)檢結(jié)果不相符較多的范圍作為臨界復(fù)檢范圍。

3.3 臨界結(jié)果的確認(rèn)

對(duì)于篩查呈陽(yáng)性的標(biāo)本，應(yīng)采用2種不同原理的試劑或者不同廠家的試劑進(jìn)行復(fù)檢。根據(jù)國(guó)外檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，所有的陽(yáng)性標(biāo)本均應(yīng)作雙孔復(fù)檢，對(duì)于復(fù)檢結(jié)果不統(tǒng)一時(shí)再進(jìn)行確認(rèn)性試驗(yàn)，以排除內(nèi)源性干擾因素[4]。

3.4 臨界結(jié)果的處理與報(bào)告

在臨床檢驗(yàn)中，對(duì)于獻(xiàn)血肝炎病毒的篩查應(yīng)高度重視對(duì)于臨界陰性樣本的復(fù)檢，對(duì)于經(jīng)復(fù)檢顯示仍呈臨界陰性者，則應(yīng)避免采集此類血源。對(duì)于體檢人員的肝炎病毒篩查，則重視臨界陽(yáng)性標(biāo)本的復(fù)檢，對(duì)于經(jīng)復(fù)檢仍呈臨界陽(yáng)性者，應(yīng)報(bào)告為“可疑”，并建議其進(jìn)行進(jìn)一步檢查。可改為定量基因擴(kuò)增法或者具有較高靈敏度的免疫測(cè)定法進(jìn)行復(fù)檢，切勿輕易報(bào)告陽(yáng)性。對(duì)于經(jīng)多次復(fù)檢仍為臨界陰性或者臨界陽(yáng)性者，應(yīng)結(jié)合其他標(biāo)志物進(jìn)行綜合分析，對(duì)于非初診患者，可查閱其以往檢測(cè)結(jié)果，分析其臨床用藥情況作出可疑、弱陽(yáng)性或者陰性報(bào)告；也可向臨床醫(yī)生提供S/CO值，以指導(dǎo)臨床診斷治療。

[1] 司志霖,蔡曉寧.化學(xué)發(fā)光免疫分析與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)乙型肝炎病毒標(biāo)志物比較分析[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2013,29(2):196-198.

[2] 陳慧英,肖艷群,張健,等.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原臨界樣本復(fù)檢范圍的探討[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2010,25(6):447-450.

[3] 盧振,汪海華.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)乙型肝炎病毒標(biāo)志物的影響因素及存在問(wèn)題[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2011,8(2):255-256.

[4] 林耀堂,陳海熒.乙型肝炎病毒前S1蛋白檢測(cè)在乙型肝炎病毒感染臨床診斷的應(yīng)用[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2013,29(12):1870-1871.

R373.2

B

1671-8194（2013）34-0081-02