高效液相色譜法測(cè)定腎茶膠囊中總黃酮的含量

路更 李芳 王立強(qiáng) 侯志勇 宋偉杰

[摘要] 目的 研究高效液相色譜法測(cè)定腎茶膠囊中總黃酮的含量。 方法 通過(guò)高效液相色譜法，對(duì)線性關(guān)系、重復(fù)行、精密度、回收率等考察進(jìn)行考察，并進(jìn)行多次驗(yàn)證。 結(jié)果 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品在8.03～48.18μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系（r²=0.9995）；該方法精密度良好，RSD<2%；重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果良好，RSD=0.98；平均回收率在97.0%～103.0%之間，RSD<2%，準(zhǔn)確性良好。 結(jié)論 高效液相色譜法測(cè)定腎茶膠囊中總黃酮的含量精確科學(xué)，能很好地檢測(cè)和控制腎總黃酮的質(zhì)量。

[關(guān)鍵詞] 腎茶膠囊；總黃酮；含量測(cè)定

[中圖分類號(hào)] R917???[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B???[文章編號(hào)] 2095-0616（2012）21-93-03

Content determinantion of total flavonoids in orthosiphon capsules by HPLC

LU?Geng1??LI?Fang1??WANG?Liqiang2??HOU?Zhiyong1??SONG?Weijie1

1.No.211 Hospital of PLA.HeiLongjiang Harbin 150080；2.Huaqiao University of Molecular Medicine Research Institute，Quanzhou 362021，China

[Abstract] Objective To research content determination of total flavonoids in orthosiphon capsules by HPLC. Methods A HPLC method is used for observing the linear relationship，repeat line，precision and recovery， and the method is verified. Results The standard rutin is in good linearity in range of 8.03-48.18 mg/mL（r2=0.9995）；This method has good precision（RSD<2%），and also has good repetitive experimental results （RSD=0.98）；The average recoveries are between 97.0% and 103.0%，RSD<2%，which has good accuracy. Conclusion Content determination of total flavonoids in orthosiphon capsules by HPLC is scientific and feasible，which can be in good control and test the flavonoids in orthosiphon capsules.

[Key words] Orthosiphon capsules；Flavonoid；Content determination

腎茶味苦、涼，為唇形科腎茶屬植物，主要分布于福建、臺(tái)灣、海南、廣西、廣東和云南各省。民間用于治療急、慢性腎炎、膀胱炎、尿路結(jié)石、膽結(jié)石、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等[1-2]。本品為腎茶的干燥莖葉。主要含有黃酮類化合物、甾體皂甙類、蒽醌類甙類、氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、糖類、多糖類、多酚類化合物等。我院對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行了系統(tǒng)研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1?材料與方法

1.1?樣品和材料

腎茶膠囊：?jiǎn)挝蛔灾?，批?hào)：20040510，規(guī)格：0.3 g/粒。標(biāo)準(zhǔn)品：蘆?。ㄙ?gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：10080-200705）。

1.2?實(shí)驗(yàn)儀器

天平：北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司，型號(hào)BP211D；高效液相色譜儀：日本島津，型號(hào)2010；紫外-可見分光光度儀：日本島津，型號(hào)uv-2100。

1.3?測(cè)定方法

1.3.1?對(duì)照品溶液的制備?蘆丁對(duì)照品120℃減壓干燥至恒重后，精密稱定50 mg，置于25 mL量瓶中，加適量甲醇置水浴上微熱使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻備用。精密量取溶液10 mL，置于100 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得（每毫升中含無(wú)水蘆丁0.2 mg）。

1.3.2?標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備?精密量取對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置于25 mL量瓶中，各加水至6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)的溶液為空白，照分光光度法，在500 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.3?測(cè)定法?取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物適量，研細(xì)，從中稱取約0.25 g，精密稱定后，置25 mL錐形瓶中，精密稱定，加甲醇25 mL超聲處理（功率250 W，頻率20 kHz）30 min，放冷，精密稱定，補(bǔ)足重量，搖勻。精密量取10 mL，置100 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取3 mL，置25 mL量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加水至6 mL”起依法測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的濃度（μg/mL），計(jì)算，即得[3-4]。

本品每粒含總黃酮以蘆?。–₂₇H₃₀O₁₆）計(jì)，不得少于45.0 mg。

1.3.4?吸收光譜的測(cè)定、光譜一致性檢測(cè)?精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液、供試品溶液各3 mL，分別置于25 mL量瓶中，照分光光度法，在200～750 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定吸收光譜。結(jié)果蘆丁對(duì)照品與供試品光譜可見光區(qū)吸收?qǐng)D譜基本一致，并且在500 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。

2?結(jié)果

2.1?線性關(guān)系的考察

精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液1、2、3、4、5、6 mL（相當(dāng)于蘆丁8.03、16.06、24.09、32.12、40.15、48.18μg/mL），按上述測(cè)定法測(cè)定吸收度。以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程?；貧w方程為： y=0.0111x+0.0181，r²=0.999 5。表明蘆丁在8.03～48.18μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。見表1。

2.2?精密度試驗(yàn)

按“3.3”項(xiàng)下測(cè)定法對(duì)對(duì)照品溶液重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算RSD，結(jié)果見表2。試驗(yàn)結(jié)果表明，RSD<2%，方法精密度良好，符合測(cè)定要求。

2.3?重復(fù)性試驗(yàn)

按供試品測(cè)定方法測(cè)定，對(duì)同一批樣品（090816）重復(fù)測(cè)定5次。見表3。

2.4?加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的同一批號(hào)（批號(hào)為090816，含量為250.51 mg/g）的樣品125 mg，分別精密加入蘆丁對(duì)照品各27.5 mg，按正文供試品溶液的制備方法制備及上述光譜條件測(cè)定，測(cè)定并計(jì)算回收率，平均回收率在97.0%～103.0%之間，RSD<2%（n=6），方法準(zhǔn)確性良好。見表4。

2.5?含量測(cè)定

按上述方法測(cè)定各批樣品的含量。根據(jù)3樣品測(cè)定結(jié)果，暫定本品含總黃酮不得少于45.0 mg/粒。見表5。

3?結(jié)論

腎茶為唇形科腎茶屬植物，又稱貓須草，其主要活性成分有迷迭香酸、熊果酸和肌醇等。傣族醫(yī)書記載腎茶用以治療小便熱、澀、疼痛、腰痛等泌尿系統(tǒng)疾病，療效確切。為使腎茶這一民族傳統(tǒng)藥物更好地用于臨床，本課題開發(fā)了腎茶有效部位制劑“腎茶膠囊”，并對(duì)其藥效學(xué)、藥理學(xué)和毒理學(xué)進(jìn)行了系統(tǒng)研究。

通過(guò)針對(duì)腎茶膠囊中總黃酮的系統(tǒng)研究，包括線性關(guān)系考察、精密度考察、回收率考察、重復(fù)性考察等，證實(shí)本測(cè)定方法科學(xué)可行，完全能控制和檢測(cè)腎茶膠囊中總黃酮的質(zhì)量。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Hsu CL，Hong BH，Yu YS.Antioxidant and anti-inflammatory effects of orthosiphon aristatus and its bioactive compounds[J].J Agric Food Chem，2010，58（4）：2150-2156.

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[3] Awale S，Tezuka Y，BanskotaAH，et al.Inhibitionof NO production by highly-oxygenated diterpenes oforthosiphon stamineus and their structure-activity relationship[J].Biol Pharm Bull，2003，26（4）：468-473.

[4] Awale S，Tezuka Y，Banskota AH，et al.Highly-oxygenated isopimarane-type diterpenes from orthosiphonstamineus of Indonesia and their nitric oxide inhibitory activity[J].Chem Pharm Bull（Tokyo），2003，51（3）： 268-275.

（收稿日期：2012-06-21）