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    長(zhǎng)白山野生藜蘆提取液對(duì)水稻稻瘟病抑菌效應(yīng)的研究*

    2013-01-10 05:55:48楊麗娟顧地周王曉偉郭志欣欒志慧
    關(guān)鍵詞:藜蘆稻瘟病提取液

    楊麗娟,顧地周,王曉偉,郭志欣,欒志慧,馮 穎

    (通化師范學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院,吉林 通化 134002)

    藜蘆(VeratrumnigrumL)為百合科(Lihaceae)藜蘆屬(evartmuLin)植物,又名黑藜蘆,山蔥.藜蘆是一種有毒植物,也是一種藥用植物,有祛痰催吐,殺蟲(chóng)的功效,合理利用藜蘆的毒性,又有很多益處[1].水稻稻瘟病是水稻生產(chǎn)上的重要病害之一,是一種世界性稻作病害, 全球每年因稻瘟病造成的水稻產(chǎn)量損失達(dá)11%~30%,我國(guó)稻瘟病的年發(fā)生面積均在380萬(wàn) hm2以上,所造成的稻谷損失達(dá)數(shù)億公斤,給糧食安全帶來(lái)隱患.因此,以高效、低毒、低殘留的環(huán)境友好型生物農(nóng)藥逐漸替代傳統(tǒng)的高毒化學(xué)農(nóng)藥是農(nóng)藥發(fā)展的必然趨勢(shì),而且從植物中尋找殺菌、抑菌、殺蟲(chóng)活性物質(zhì)是當(dāng)今開(kāi)發(fā)研制無(wú)公害新型藥劑的熱點(diǎn)之一[2-3].

    本文以分布于長(zhǎng)白山的藜蘆為材料,用不同溶劑進(jìn)行了梯度提取,并用提取物做了對(duì)水稻稻瘟病菌的生物活性測(cè)定,為今后在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的實(shí)際應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ).

    1 材料與方法

    1.1 材料

    藜蘆采于哈泥河自然保護(hù)區(qū)并經(jīng)鑒定,培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基,水稻稻瘟病菌由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)友情提供.

    1.2 方法

    (1)藜蘆提取液的制備[4].將采集的藜蘆自然晾干或烘干后用粉碎機(jī)制成粉末,各取50g.分別用70%乙醇、60%丙酮、沸水,用索氏提取器提取8h,再濃縮到50ml,即為藜蘆提取液的母液.提取液經(jīng)0.22μm濾膜除菌,4℃冰箱貯存?zhèn)溆?

    (2)無(wú)菌操作[5-6].無(wú)菌條件下,將滅菌培養(yǎng)皿分成9組,每組18個(gè),將滅菌的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中約1/3量,冷卻,制成固體培養(yǎng)基.將滅菌試管分成9組,每組6支,每組試管分別加入相應(yīng)提取液.各組試管提取液濃度依次為無(wú)菌水,6.25%,12.5%,25%,50%,100%不同方法提取的藜蘆根、莖、葉提取液.每皿加入1ml提取液,每個(gè)濃度重復(fù)3次,涂布,用打孔器取菌塊0.5cm,放入培養(yǎng)皿中間,然后在25oC培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng).

    (3)供試植物提取液離體抗菌活性的測(cè)定.以菌絲生長(zhǎng)速度法[7]測(cè)定提取液對(duì)病菌菌落生長(zhǎng)的抑制作用,于培養(yǎng)48h ,72h, 96h測(cè)定菌落直徑,根據(jù)公式抑菌率=(對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑)/對(duì)照菌落直徑×100%計(jì)算抑菌效果.

    2 結(jié)果

    2.1 不同溶劑提取物的抑菌效果

    表1~3說(shuō)明用3種不同提取方法制備的藜蘆提取液,對(duì)水稻稻瘟病菌均有明顯的抑菌作用,抑菌作用與提取液濃度呈正相關(guān).但抑菌效果有一定的差異.3種不同的提取溶劑的提取物中,70%乙醇提取物具有最強(qiáng)的抑菌作用.其次是60%丙酮提取物,沸水提取物抑菌效果較差.

    2.2 植物不同部位提取物的抑菌效果

    為了確定藜蘆的不同藥用部位的抑菌效果,以70%的乙醇提取藜蘆的根、莖、葉的活性成分進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)(表4).結(jié)果說(shuō)明,對(duì)供試菌的抑制作用最強(qiáng)的為葉,莖次之,根最弱.由于70%乙醇葉提取液的抑菌效果最好,故用此來(lái)確定最低抑菌濃度,最低抑菌濃度(MIC)為0.50g/mL[8].

    表1 藜蘆葉提取液的抑菌效果

    表2 藜蘆莖提取液的抑菌效果

    表3 藜蘆根提取液的抑菌效果

    表4 70%乙醇提取液的抑菌效果

    3 討論

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藜蘆各部位的沸水提取液、乙醇提取液、丙酮提取液對(duì)水稻稻瘟病菌均存在不同程度的抑菌效果,說(shuō)明藜蘆是一種具有一定抑菌作用的植物.根據(jù)不同提取溶劑和不同提取部位抑菌效果比較,藜蘆的藥用成分提取最好使用藜蘆葉70%乙醇提取液.比較藜蘆對(duì)水稻稻瘟病菌的抑菌效果,發(fā)現(xiàn)藜蘆葉提取物對(duì)水稻稻瘟病菌的抑菌效果好于莖、根提取物.目前對(duì)中草藥提取物抑菌效果的檢測(cè)一般采用試管法或?yàn)V紙片法,但中草藥提取的藥液一般為顏色較深的制劑,用試管法常常會(huì)因?yàn)橹苿╊伾疃鴮?dǎo)致觀察不準(zhǔn)確,用濾紙片法則會(huì)因?yàn)橹胁菟帞U(kuò)散慢、抑菌弱,較難得到準(zhǔn)確的抑菌濃度[9-10].本實(shí)驗(yàn)將藥液涂于平板后,將菌塊置于培養(yǎng)皿中央培養(yǎng),通過(guò)測(cè)量菌塊直徑的生長(zhǎng)研究藜蘆的抑菌效果,避免了試管法或?yàn)V紙片法的不足,具有穩(wěn)定可靠且定量性好的優(yōu)點(diǎn),比較適合用于有色中草藥制劑抑菌濃度的測(cè)定.由于本實(shí)驗(yàn)采用此法判斷抑菌效果且以無(wú)菌落生長(zhǎng)為最低抑菌濃度,故所測(cè)定的數(shù)據(jù)實(shí)際上是最低殺菌濃度.其結(jié)果為水稻稻瘟病菌的抑制提供了科學(xué)依據(jù).

    參考文獻(xiàn):

    [1]劉新波,孔令武.藜蘆的開(kāi)發(fā)與利用[J].中國(guó)林副特產(chǎn),1997,2(41):57.

    [2]周其書(shū),但守軍.山區(qū)水稻稻瘟病的發(fā)生與防治[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2010(16):179-181.

    [3]曲慶華,馬學(xué)禮,劉春暉,等.水稻稻瘟病發(fā)病因素與防治對(duì)策現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)[J].現(xiàn)代化農(nóng)業(yè),2010(5):29-30.

    [4]金忠民,沙 偉,胡修茵,等.藍(lán)萼香茶菜提取液抑菌作用研究[J].廣西科學(xué),2007,14(2):160-162.

    [5]林清洪,章寧,劉福平,等.銀杏外種皮提取液對(duì)幾種蔬菜和花卉病原菌的抑制效應(yīng)研究[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2005(20):87-89.

    [6]陳笑笑,于海寧,應(yīng)優(yōu)敏,等.仙鶴草內(nèi)生真菌的分離鑒定與抗菌活性[J].浙江工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2011(2):39-43.

    [7]黃彰欣.植物化學(xué)實(shí)驗(yàn)保護(hù)指導(dǎo)[M].北京:農(nóng)業(yè)出版社,2000.

    [8]王興華.多種藥用植物抑菌效果研究[J].山西大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2005,28(3):322-324.

    [9]伍賢進(jìn),毛倩,劉勝貴,等.翻白草提取物的抑菌作用研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2007,34(9):1295-1296.

    [10]王錦文,邊才苗.五味子提取物的抑菌和殺菌活性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,36(16):6799-6800.

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