反相高效液相色譜法測(cè)定柑橘中磺胺二甲基嘧啶

摘要：建立了用反相高效液相色譜測(cè)定柑橘中磺胺二甲基嘧啶的方法。結(jié)果表明，磺胺二甲基嘧啶能得到較好地分離，用外標(biāo)法定量，在０．８～１５．０ μｇ／ｍＬ范圍內(nèi)與峰面積成良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為０．９９９ ０，檢測(cè)限為１２．６ ｎｇ／ｍＬ，方法可用于柑橘中磺胺二甲基嘧啶的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：反相高效液相色譜；柑橘；磺胺二甲基嘧啶

中圖分類號(hào)：Ｏ６５７．１７＋２ 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ 文章編號(hào)：0439－８114（２０12）07－1456-02

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe ｉｎ Ｃｉｔｒｕｓ ｂｙ Ｒｅｖｅｒｓｅｄ Ｐｈａｓｅ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ

Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ

ＪＩＡＮＧ Ｚｈｏｎｇ－ｙｕａｎ，ＺＨＡＮＧ Ｙｕ－ｌｅ，ＺＥＮＧ Ｑｉ－ｈｕａ

（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ， Ｚｕｎｙｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｚｕｎｙｉ ５６３００２， Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａ ｒｅｖｅｒｓｅｄ ｐｈａｓｅ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＲＰ－ＨＰＬＣ） ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ． Ｅｘｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ method ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ ｏｖｅｒ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．８～１５．０ μｇ／ｍＬ（r＝０．９９９ ０） ｆｏｒ ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe． Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｗas １２．６ ｎｇ／ｍＬ ｆｏｒ ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe． Ｆｉｎａｌｌｙ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｆｏｒ ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎｎｕｍ ｉｎ ｃｉｔｒｕｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｒｅｖｅｒｓｅｄ ｐｈａｓｅ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＲＰ－ＨＰＬＣ）； ｃｉｔｒｕｓ； ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe

隨著現(xiàn)代醫(yī)藥科學(xué)的不斷發(fā)展，在畜、禽、牧、水產(chǎn)及農(nóng)產(chǎn)品等領(lǐng)域應(yīng)用藥物對(duì)動(dòng)物進(jìn)行預(yù)防疾病和治療，以及促動(dòng)物生長(zhǎng)、提高飼料轉(zhuǎn)化率等方面日益普遍?；前范谆奏ぃ⊿ｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎe，ＳＭ２）是抗感染藥劑，它是畜牧生產(chǎn)中應(yīng)用最廣泛的磺胺類藥物之一?；前范谆奏ぞ哂锌咕?qiáng)、毒性小、吸收迅速完全，在畜禽及農(nóng)產(chǎn)品體內(nèi)藥效持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)等特點(diǎn)。但過量的藥物殘留會(huì)損害人體健康，已發(fā)現(xiàn)磺胺二甲基嘧啶可誘發(fā)嚙齒動(dòng)物甲狀腺增生或腫瘤［１］。近年來也有將此藥物用于蔬菜、水果中進(jìn)行殺菌的報(bào)道。

目前，磺胺類藥物常用的檢測(cè)方法為ＨＰＬＣ法［２－１１］，主要用于動(dòng)物性食品中的檢測(cè)，但果蔬中磺胺二甲基嘧啶的檢測(cè)尚未見報(bào)道。本研究采用超聲提取，反相高效液相色譜法測(cè)定了柑橘中磺胺二甲基嘧啶的殘留量。該方法簡(jiǎn)便、快速、前處理過程簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好、方法的準(zhǔn)確度和靈敏度均符合農(nóng)藥殘留檢測(cè)要求，且費(fèi)用較低，適合作為一種常規(guī)的殘留檢測(cè)方法。

１ 材料與方法

１．１ 儀器

ＬＣ－２０ＡＴ高效液相色譜儀（日本島津公司）， 配備ＳＰＤＭ－２０Ａ檢測(cè)器、ＳＩＬ－２０Ａ自動(dòng)進(jìn)樣器、ＣＢＭ－２０Ａ系統(tǒng)控制器；電子天平（上海越平科學(xué)儀器有限公司）；微孔過濾裝置（北京萊伯泰科學(xué)儀器有限公司）；ＳＹ３２００超聲波清洗器（上海聲源超聲波儀器設(shè)備有限公司）；ＤＨＧ－９０７０Ａ型新型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（寧波江南儀器廠）；０４１２－１離心機(jī)（上海分析機(jī)械廠）。

１．２ 試劑

磺胺二甲基嘧啶（１００ μｇ／ｍＬ，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測(cè)所）；無水硫酸鈉；甲醇（分析純）；乙腈（色譜純）；去離子水。所有溶液使用前均由０．４５ μｍ孔徑的濾膜過濾。

１．３ 色譜條件

檢測(cè)波長(zhǎng)：２７０ ｎｍ；色譜柱：Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＶＰ－ＯＤＳ（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ， 日本島津公司）；流動(dòng)相：甲醇∶乙腈∶水（含２％乙酸）＝１５∶１５∶７０；流速：０．６ ｍＬ／ｍｉｎ；柱溫：２５ ℃；進(jìn)樣量：２０ μＬ。

１．４ 樣品溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制：?。?ｍＬ磺胺二甲基嘧啶（１００ μｇ／ｍＬ）的標(biāo)準(zhǔn)溶液置于２５ ｍＬ的容量瓶中，用２５％甲醇定容至刻度，制成濃度為４ μｇ／ｍＬ的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

標(biāo)準(zhǔn)使用液的配制：用４ μｇ／ｍＬ的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制標(biāo)準(zhǔn)使用液系列，用流動(dòng)相定容至刻度，使其成為一系列的標(biāo)準(zhǔn)使用液。

１．５ 提取和凈化

準(zhǔn)確稱取經(jīng)搗碎柑橘汁液１０．０００ ０ ｇ，置于５０ ｍＬ棕色容量瓶中，加入３０ ｍＬ提取液（０．１ ｍｏｌ／Ｌ的鹽酸溶液∶甲醇＝３∶７），將容量瓶置于超聲波儀器中超聲提?。常?ｍｉｎ，搖勻，用提取液定容至刻度。再加入２ ｇ無水硫酸鈉，２ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心２ ｍｉｎ，取上清液過０．４５ μｍ有機(jī)濾膜待測(cè)。

２ 結(jié)果與分析

２．１ 吸收波長(zhǎng)的選擇

利用二極管陣列檢測(cè)器掃描磺胺二甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到磺胺二甲基嘧啶的最大吸光度出現(xiàn)在２７０ ｎｍ處，且樣品中雜質(zhì)在該波長(zhǎng)時(shí)對(duì)測(cè)定無影響，且色譜峰形較好。因此，選擇２７０ ｎｍ作為最適檢測(cè)波長(zhǎng)。

２．２ 流速的影響

隨著流速增加，各峰的保留時(shí)間均減少，在０．４～０．８ ｍＬ／ｍｉｎ均能很好分離，但流速在０．５ ｍＬ／ｍｉｎ以下時(shí)，色譜峰逐漸擴(kuò)展，檢測(cè)靈敏度下降。流速在０．６ ｍＬ／ｍｉｎ以上時(shí)，磺胺二甲基嘧啶峰與相鄰峰重疊，分離度下降。因此選擇流速為０．６ ｍＬ／ｍｉｎ。

２．３ 線性方程和檢出限

用配制的系列磺胺二甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)溶液在０．８～１５．０ μｇ/ｍＬ濃度范圍內(nèi)在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，得到線性方程為ｙ＝１．３３０×１０４ｘ－４．０２４，Ｒ２＝０．９９９ ０。以７份樣品分析結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差的３倍計(jì)算，方法的檢出限為１２．６ ｎｇ／ｍＬ。磺胺二甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見圖１。

２．４ 方法的精密度和回收率

在選定的色譜條件下進(jìn)行樣品添加回收試驗(yàn)，取柑橘樣品３份，按０．１０、０．５０和１．００ ｍｇ／ｋｇ ３個(gè)添加水平進(jìn)行回收試驗(yàn)，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（表１）。

２．５ 實(shí)際樣品測(cè)定

應(yīng)用本方法對(duì)市場(chǎng)上購買的１８?jìng)€(gè)柑橘樣品進(jìn)行分析，結(jié)果表明， ６個(gè)樣品中檢出磺胺二甲基嘧啶， 含量在１．２５～３．７８ μｇ／ｋｇ之間。柑橘樣品色譜圖見圖２。

３ 結(jié)論

建立了符合農(nóng)藥殘留分析要求的柑橘中的磺胺二甲基嘧啶殘留的分析方法，本方法簡(jiǎn)單、快速，具有很高的靈敏度與精密度，重現(xiàn)性好，回收率穩(wěn)定。

參考文獻(xiàn)：

［１］ ＬＩＴＴＥＦＩＥＬＤ Ｎ Ａ， ＧＡＹＬＯＲ Ｄ Ｗ， ＢＬＡＣＫＷＥＬＬ Ｂ Ｎ， ｅｔ ａｌ． Ｃｈｒｏｎｉｃ ｔｏｘｉｃｉｔｙ／ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｉｎｅ ｉｎ Ｂ６Ｃ３Ｆ１ ｍｉｃｅ［Ｊ］． Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ Ｔｉｘｉｃｏｌ，１９８９，２７（７）：４５－５４．

［２］ 邵俊杰，袁智能，聶洪勇，等． 肉中十種磺胺獸藥殘留量的同時(shí)測(cè)定方法［Ｊ］．色譜，１９９３１（６）：３７３－３７５．

［３］ 李俊鎖，李西旺，魏廣智． 雞肝組織中磺胺類藥物多殘留分析法［Ｊ］． 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，２００２，３３（５）：４６８－４７２．

［４］ 熊 芳，戴 華，袁智能． 固相萃取高效液相色譜法測(cè)定動(dòng)物肝中４種磺胺殘留量［Ｊ］．分析科學(xué)學(xué)報(bào)，２００２，１８（５）：４１５－４１７．

［５］ ＡＭＯＬＤ Ｄ，聶洪勇． 豬肉中４種磺胺類藥物殘留的快速ＨＰＬＣ測(cè)定法［Ｊ］． 分析測(cè)試通報(bào)，１９９２，１１（３）：５６－５９．

［６］ ＫＲＩＳＴＯＦ Ｅ Ｍ． Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｗｅｌｖｅ ｓｕｌｆｏｎｍｉｄｅｓ ｉｎ ｈｏｎｅｙ ａｆｔｅｒ ａｃｉｄｉｃ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｂｙ ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ ｐｏｓｔ－ｃｏｌｕｍｎ ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ，２００４，１０４７（１）： ８５－９２．

［７］ 張素霞，李俊鎖，錢傳范． 豬肌肉組織中磺胺類藥物的ＭＳＰＤ凈化和ＨＰＬＣ測(cè)定［Ｊ］． 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，１９９９，３０（６）：５３１－５３５．

［８］ ＪＥＮ Ｊ Ｆ， ＬＥＥ Ｈ Ｌ， ＬＥＥ Ｂ Ｎ． Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｖｅｎ ｓｕｌｆｏｎｍｉｄｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ ｓｗｉｎｅ ｗａｓｔｅ ｗａｔｅｒ ｂｙ ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ａ， １９９８， ７９３（２）：３７８－３８２．

［９］ 張利環(huán)，張春善，韓河平． 高效液相色譜法測(cè)定肉鴨組織中磺胺二甲基嘧啶的殘留量［Ｊ］． 中國(guó)抗生素雜志，２００６，３１（５）：３０９－３１０．

［１０］ 郭根和，蘇德森． 高效液相色譜法測(cè)定對(duì)蝦中五種磺胺類藥物殘留［Ｊ］． 現(xiàn)代科學(xué)儀器，２００５（１）：７０－７２

［１１］ 吳翠琴，陳迪云，黃燕屏，等． 高效液相色譜法測(cè)定雞蛋清和蛋黃中磺胺類藥物殘留［Ｊ］． 環(huán)境監(jiān)測(cè)管理與技術(shù)，２０１０，２２（３）：４３－４５，６４．