糙葉五加根皮化學(xué)成分研究

劉恒言，金鐘煥，劉向前*，陸昌洙

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長沙 410208；2.韓國食品醫(yī)藥品安全廳生藥研究部，韓國 忠清北道 363-700；3.韓國慶熙大學(xué)藥學(xué)院，韓國 首爾 130-701）

糙葉五加根皮化學(xué)成分研究

劉恒言1，金鐘煥2，劉向前1*，陸昌洙3

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長沙 410208；2.韓國食品醫(yī)藥品安全廳生藥研究部，韓國 忠清北道 363-700；3.韓國慶熙大學(xué)藥學(xué)院，韓國 首爾 130-701）

目的 基于抗炎活性研究糙葉五加根皮的化學(xué)成分。方法 采用XAD-4、正相硅膠、ODS、Sephadex LH-20等常規(guī)柱色譜技術(shù)結(jié)合實(shí)時(shí)直接分析質(zhì)譜技術(shù)（DART-MS）進(jìn)行分離純化，并根據(jù)其理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定結(jié)構(gòu)。結(jié)果 通過常規(guī)柱色譜從糙葉五加根皮中分離鑒定了7個化合物，分別為：豆甾醇(1)、β-谷甾醇(2)、海松酸(3)、(+)-芝麻素(4)、灑維寧(5)、丁香苷(6)和刺五加苷E(7)；另外，通過實(shí)時(shí)直接分析質(zhì)譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比較推測糙葉五加根皮中可能存在 taiwanin C、10-羥基-2，8-癸二烯-4，6-二炔酸、3，7，11-trimethyl-2，6，10-dodecatrienoic acid、咖啡酸和 stigmast-7-ene-3，6-diol。結(jié)論 化合物3，4，5，7為首次從該種植物中分離得到。

糙葉五加根皮；化學(xué)成分；結(jié)構(gòu)鑒定；實(shí)時(shí)直接分析質(zhì)譜

糙葉五加(Acanthopanax henryi(Oliv.)Harms)為五加科五加屬植物，廣泛分布于湖南、甘肅、四川等地。湖南省中藥材地方標(biāo)準(zhǔn)收載的“五加皮”，就是以該植物的根皮入藥，具有祛風(fēng)濕、活血化瘀、壯筋骨等功效，主要用于治療風(fēng)濕痹痛、拘攣麻木、筋骨痞軟、水腫、跌打損傷、疝氣腹痛等癥［1-2]。國內(nèi)外學(xué)者對五加屬植物的研究多集中在細(xì)柱五加、刺五加，并從中分離得到了許多具有良好抗炎、抗腫瘤、抗氧化活性的三萜類、黃酮類、木脂素類化合物［3-6]。而對糙葉五加中化學(xué)成分及活性研究報(bào)道較少，僅1994年張會昌等[7]在糙葉五加根皮中分離得到了紫丁香苷、紫丁香酚苷、紫丁香樹脂醇、β-谷甾醇等成分。近年來陳勇等[8]建立了同時(shí)測定糙葉五加不同藥用部位中槲皮素和山柰酚的方法；馮勝等[9]建立了同時(shí)測定糙葉五加不同部位中的刺五加苷B和刺五加苷E的方法。我們首次對糙葉五加根皮的甲醇提取物及其不同濃度甲醇洗脫部分進(jìn)行了細(xì)胞毒試驗(yàn)和NO、PGE2、IL-1β、IL-6等抗炎因子的抗炎活性篩選試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其具有良好的抗炎活性，活性研究結(jié)果將作另文報(bào)道。本論文報(bào)道基于抗炎活性導(dǎo)向下分離得到的化學(xué)成分。

1 儀器與材料

1.1 儀器

SGW X-4顯微熔點(diǎn)儀（未校正，上海精密科學(xué)儀器有限公司）；Autopol III自動偏振計(jì) （美國魯?shù)婪蚬荆?；日?70-30紅外分光光度計(jì)（日本日立公司）；Bruker AMX-400超導(dǎo)核磁共振儀(TMS為內(nèi)標(biāo)，德國Bruker公司)；Bruker AMX-500超導(dǎo)核磁共振儀(TMS為內(nèi)標(biāo)，德國Bruker公司)；DART實(shí)時(shí)直接分析離子源 （日本東京）；JMS-T100TD飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(日本電子株式會社)。

1.2 %材料

藥材2008年采自于湖南省新化大熊山，經(jīng)韓國慶熙大學(xué)藥學(xué)院陸昌洙教授鑒定為五加科糙葉五加Acanthopanax henryi(Oliv.)Harm的根皮，標(biāo)本存放于韓國慶熙大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室，標(biāo)本號為KHUP-0714/A.henryi root barks/2008。 XAD-4(美國Sigma公司)，正相柱層析硅膠 (230～400目，美國Merck公司)；ODS(30～50μm，日本Fuji Silysia Chem.Ind.公司)；Sephadex LH-20(美國Sigma公司)。氯仿、甲醇等試劑均為分析純。

2 提取分離

糙葉五加根皮3 kg，陰干，粉碎過40目篩，甲醇回流提取3次，每次4 h，減壓回收甲醇，濃縮得浸膏129 g。經(jīng)XAD-4型樹脂，依次用水、30%甲醇、50%甲醇、80%甲醇、100%甲醇、丙酮洗脫。收集50%甲醇洗脫部分，濃縮，經(jīng)正相硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇-水（7∶3∶0.1）洗脫，純化，得到化合物1（15mg）、化合物2 （19mg）、 化合物3 （25mg）、 化合物4（56mg）、化合物5（35mg）。收集100%甲醇和丙酮兩個洗脫部分，濃縮，經(jīng)正相硅膠柱色譜分離，正己烷-丙酮（100∶1→1∶5）梯度洗脫，得到Fr.A（6.7g）、Fr.B（1.2 g）、Fr.C（2.1 g）、Fr.D（0.5g）、Fr.E（2.5g），合 并 Fr.C、Fr.D 兩個部分，經(jīng)ODS、Sephadex LH-20反復(fù)分離純化，得到化合物6（24mg）、化合物7（233mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：C29H48O，白色粉末，mp 170～172 ℃，Liebermann-Burchard反應(yīng)和Salkowski反應(yīng)呈陽性，1H-NMR(400 MHz,CD3OD) δ:5.40(1H,m,H-6),5.14(1H,dd,J=14.6,8.0 Hz,H-22),4.98(1H,dd,J=14.5,7.8 Hz,H-23),3.30(1H,m,H-3a),0.97(3H,s,H-19),0.9(3H,d,J=6.5 Hz,H-21),0.82(3H,d,J=6.2 Hz,H-26),0.82(3H,t,J=7.5 Hz,H-29),0.77(3H,d,J=6.0 Hz,H-27),0.65(3H,s,H-18)。13C-NMR(100 MHz,CD3OD)δ:142.2(C-5),140.0(C-22),130.6(C-23),122.4(C-6),72.4(C-3),58.2(C-14),57.4(C-17),52.2(C-24),49.4(C-9),43.0(C-4),41.9(C-13),41.1(C-20),41.0(C-12),38.5(C-1),37.4(C-10),35.1(C-25),33.2(C-2),33.2(C-7),32.3(C-8),29.3(C-16),27.1(C-28),23.1(C-15),21.7(C-21),21.6(C-26),21.1(C-11),19.8(C-19),19.3(C-27),12.6(C-29),12.3(C-18)。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)一致［10]，故鑒定為豆甾醇。

化合物2：C29H50O，白色粉末，mp139～141 ℃，Liebermann-Burchard反應(yīng)和Salkowski反應(yīng)呈陽性，EI-MS m/z:414[M]+,1H-NMR(400 MHz,CD3OD)δ:5.37(1H,d,J=4.97 Hz,H-6),3.51(1H,m,H-3),1.00(3H,s,H-19),0.92(3H,d,J=6.5 Hz,H-21),0.88(3H,d,J=1.86 Hz,H-29),0.85(3H,d,J=3.71 Hz,H-26),0.82(3H,s,H-27),0.70(3H,s,H-18)。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)一致[10]，故鑒定為β-谷甾醇。

化合物3：C20H30O2，白色針晶，mp 217～219 ℃，EI-MS m/z:302[M]+,257,234,167,135,123,121,68.IR(KBr)cm-1:3430,3040,2930,2850,1710,1460,1220,910,780.1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:12.30(1H,s,H-18),5.65(1H,dd,J=17.5,10.5 Hz,H-15),5.15(1H,d,J=1.0 Hz,H-14),4.90(1H,dd,J=10.5,1.5 Hz,Ha-16),4.85(1H,dd,J=17.5,1.5 Hz,Hb-16),1.20(3H,s,H-17),1.00(3H,s,H-20),0.65(3H,s,H-19).13CNMR(125 MHz,CDCl3)δ:183.6(C-18),147.2(C-15),137.9(C-8),127.9(C-14),112.8(C-16),56.1(C-9),50.4(C-5),43.9(C-4),39.2(C-13),38.5(C-1),37.9(C-10),36.4(C-3),35.7(C-7),34.1(C-12),29.7(C-17),24.0(C-6),19.5(C-11),19.1(C-2),14.1(C-19),29.3(C-16),13.7(C-20)。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)一致[11]，故鑒定為海松酸。

化合物4：C20H18O6，白色粉末，mp 122～123 ℃，[a]D=12.2(c 0.11,MeOH)，EI-MS m/z:354[M]+。1HNMR(400 MHz,CD3OD)δ:6.90(2H,d,J=1.4 Hz,H-2',H-2''),6.86(2H,dd,J=8.2,1.5 Hz,H-6',H-6''),6.81(2H,d,J=7.9 Hz,H-5',H-5''),5.97(4H,s,2×-OCH2O-),4.75(2H,d,J=4.3 Hz,H-2β,H-6β),4.27(2H,dd,J=9.1,2.1 Hz,H-4α,H-8α),3.89(2H,dd,J=9.2,3.5 Hz,H-4β,H-8β),3.13～3.15(2H,m,H-1α,H-5α)。13C-NMR(100 MHz,CD3OD)δ:149.2(C-3',C-3''),148.4(C-4',C-4''),136.1(C-1',C-1''),120.5(C-6',C-6''),108.9(C-5',C-5''),107.4(C-2',C-2''),102.2(-OCH2O-),87.1(C-2,C-6),72.5(C-4,C-8),55.3(C-1,C-5)。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)一致[12]，故鑒定為(+)-芝麻素。

化合物5：C20H16O6，白色粉末，mp 140～141 ℃，EI-MS m/z:353[M+1]+.IR(KBr)cm-1:3012,2913,2852,1735,1645,1500,1444,1182,919。1HNMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.50(1H,d,J=2.0 Hz,H-7),7.08(1H,m,H-2’),7.04(1H,s,H-6’),6.88(1H,d,J=7.9 Hz,H-3’),6.73(1H,d,J=7.9 Hz,H-3’’),6.66(1H,s,H-6’’),6.63(1H,d,J=7.3 Hz,H-2’’),6.04(2H,s,3-OCH2O-),5.93(2H,d,J=4.3 Hz,3’-OCH2O-),4.25(2H,m,H-5),3.74(1H,m,H-3),2.99(1H,m,Hb-4),2.59(1H,m,Ha-4)。13CNMR(100 MHz,CDCl3) δ:173.0(C-6),149.6(C-5’),148.5(C-4’),148.0(C-5’’),146.5(C-4’’),137.5(C-1),131.7(C-1’’),128.4(C-1’),126.3(C-2’),126.3(C-2),122.0(C-2”),109.3(C-6”),109.0(C-3’),108.8(C-3”),102(3-OCH2O),101.8(3’-OCH2O),69.8(C-5),40.0(C-3),38.0(C-4)。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)一致［13]，故鑒定為灑維寧。

化合物6：C17H24O9，白色針晶，mp 189～190 ℃，α-萘酚-濃硫酸試驗(yàn)呈陽性，1H-NMR(400 MHz,CD3OD)δ:6.74(2H,s,H-3,H-5),6.55(1H,d,J=15 Hz,H-7),6.35(1H,dd,J=15,5 Hz,H-8),4.85(1H,d,J=9.0 Hz,H-1’),3.84(6H,s,2×OCH3),3.78(1H,m,H-6’),3.76(1H,m,H-2’),3.55(1H,m,H-3’),3.48(1H,m,H-4’),3.20(1H,m,H-5’)。13C-NMR(100 MHz,CD3OD) δ:154.3(C-2),154.3(C-6),135.8(C-1),135.2(C-4),131.2(C-7),130.0(C-8),105.4(C-3),105.4(C-5),105.3(C-1’),78.3(C-9),77.8(C-5’),75.7(C-3’),71.3(C-2’),63.4(C-4’),62.5(C-6’),57.0(OCH3)。 以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)一致［14]，故鑒定為丁香苷。

化合物7：C34H46O18，白色針晶，mp 257～259 ℃，IR(KBr)cm-1:3400,3030,2960,1600,1530,1150,1020,600。1H-NMR(400 MHz,CD3OD) δ:6.80(4H,s,H-2,6,2’,6’),4.86(2H,d,J=5.0 Hz,glc-H-1,glc-H-1’),4.60(2H,d,J=4.0 Hz,H-7,7’),3.70(12H,s,4×-OCH3),3.10(2H,m,H-8,8’),13C-NMR(100 MHz,CD3OD) δ:152.9(C-3,3’,5,5’),137.1(C-4,4’),134.3(C-1,1’),104.5(C-2,2’),104.5(C-6,6’),103.3(glc-1,1’),85.4(C-7,7’),79.3(glc-3,3’),77.5(glc-5,5’),76.8(glc-2,2’),74.6(C-9,9’),71.8 (glc-4,4’),70.3(glc-6,6’),56.9(-OCH3),56.8(-OCH3),54.1(C-8,8’)。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)一致［15]，故鑒定為刺五加苷E。

另外，通過DART-MS圖譜數(shù)據(jù)結(jié)合Dictionary of Natural Product數(shù)據(jù)庫［16]圖譜分析推測在100%甲醇洗脫流份中檢測到的化合物(8)和化合物(9)，可能為taiwanin C(C20H12O6,m/z:348.06490,intensity 16971.45)和10-羥基-2,8-癸二烯-4,6-二炔酸(C13H13O4,m/z:233.08252,intensity 46196.00)；在80%甲醇洗脫流份中檢測到的化合物(10)，可能為3,7,11-trimethyl-2,6,10-dodecatrienoic acid (C15H24O2,m/z:237.18348,intensity 9086.78)；在50%甲醇洗脫流份中檢測到的化合物(11)，可能為咖啡酸(C11H13O4，m/z:209.08184,intensity 22645.86)；在30%甲醇洗脫流份中檢測到的化合物(12)，可能為stigmast-7-ene-3,6-diol(C29H50O2,m/z：430.37843,intensity 9051.51)，如圖1～4所示。

4 結(jié)論

本文報(bào)道抗炎導(dǎo)向下糙葉五加根皮的化學(xué)成分研究，通過常規(guī)柱色譜共分離鑒定出7個化合物，分別為：豆甾醇、β-谷甾醇、海松酸、(+)-芝麻素、灑維寧、丁香苷和刺五加苷E；通過實(shí)時(shí)直接分析質(zhì)譜技術(shù)分析推測糙葉五加根皮中可能存在taiwanin C、10-羥基-2，8-癸二烯-4，6-二炔酸、3，7，11-trimethyl-2，6，10-dodecatrienoic acid、咖啡酸和stigmast-7-ene-3，6-diol。其中，調(diào)控炎癥因子PGE2的木脂素類化合物taiwanin C對COX-1和COX-2呈現(xiàn)出很強(qiáng)的劑量依賴性抑制作用[17-18]；另外，在對糙葉五加根皮的活性研究中發(fā)現(xiàn)，80%甲醇流份中的化學(xué)成分也對NO、PGE2等炎癥前因子表現(xiàn)出明顯的抑制作用，提示該部分中可能存在具有良好抗炎作用物質(zhì)，可進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。本研究結(jié)果將為系統(tǒng)研究五加屬植物和開發(fā)具有抗炎活性藥物提供一定的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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Study on chemical constituents from root barks of Acanthopanax henryi

LIU Heng-yan1， KIM Jongh-wan2， LIU Xiang-qian1，YOOK Chang-soo3
(1.Pharmaceutical college， TCM University of Hunan,Changsha， Hunan 410208 China；2.Herbal Medicine Research Division，Korea Food&Drug Administration，Seoul 363-700，Korea;3.Pharmaceutical college，Kyung-Hee University， Seoul 130-701， Korea)

root barks of Acanthopanax henryi(A.henryi);chemical constituents;structure identification;DART-MS

R284.1

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2012.11.009.034.04

〔Absrract〕Objective To study the chemical constituents of root barks of Acanthopanax henryi(A.henryi)based on anti-inflammatory activities.Methods The compounds were isolated and obtained by column chromatography including XAD-4， silica gel， ODS and Sephadex LH-20，combined with DART-MS technology.The structures of these compounds were elucidated by means of physiochemical properties and spectroscopic analysis.Results Seven compounds were separated and identified as stigmasterol(1)， β-sitosterol(2)， pimaric acid(3)， (+)-sesamin(4)， savinin(5)， syringing(6)and eleutheroside E (7)by column chromatography.In addition， taiwanin C，10-hydroxy-2，8-decadiene-4，6-diynoic acid， 3，7，11-trimethyl-2，6，10-dodecatrienoic acid， caffeic acid together with stigmast-7-ene-3，6-diol could be existed in root barks of Acanthopanax henryi by DART-MS compared with their standard spectrums.Conclusion Compounds 3， 4， 5， 7 were obtained from the genus for the first time.

2012－07－21

湖南省自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(11JJ2042)；湖南省研究生科研創(chuàng)新項(xiàng)目(CX2011B348)；湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥物分析學(xué)“十二五”校級重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目。

劉恒言(1987-)，男，安徽宿州人，在讀碩士研究生，主要從事中藥及天然產(chǎn)物活性成分研究。

* 劉向前，男，教授，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：lxq0001cn@163.com。

（本文編輯 楊 瑛）