家兔膽汁的光譜特性及降壓效應(yīng)觀察

羅紅梅 萬(wàn) 潔 白森文

廣東醫(yī)學(xué)院生理科學(xué)實(shí)驗(yàn)室，廣東東莞 523808

動(dòng)物膽汁是我國(guó)的傳統(tǒng)用藥，其藥用價(jià)值一直受到關(guān)注，臨床上有來(lái)源熊膽、蛇膽、雞膽、牛膽和豬膽等的制劑，具有消炎、止咳、解痙和降壓等方面的功效。家兔的飼養(yǎng)在中國(guó)逐漸走向產(chǎn)業(yè)化，但其膽汁目前大多被當(dāng)作廢料丟棄。家兔膽汁有獨(dú)特的理化特性和藥理作用，具有開(kāi)發(fā)為臨床用藥的前景。家兔膽汁含去氧膽酸最多，去氧膽酸有消炎、鎮(zhèn)痙、降壓、降血脂等方面的功效。本實(shí)驗(yàn)觀察了家兔膽汁的紫外、紅外光譜，作為鑒別家兔膽汁的可靠指標(biāo)，同時(shí)還觀察了其降壓效應(yīng)，為將其開(kāi)發(fā)為降壓藥做前期研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

3月齡SD大鼠（廣東醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：2009029），Med Lab生物信號(hào)采集系統(tǒng)（南京美易公司），島津紫外光譜儀（UV-3101PC，日本），紅外光譜-紅外顯微鏡聯(lián)用系統(tǒng)（FTS175C-UMA500，美國(guó)BIO-RAD）。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

家兔膽汁（廣東醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)用兔采集），青霉素鈉（悅康藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)：090219）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 膽汁紫外光譜測(cè)定 家兔新鮮膽汁蒸餾水稀釋200倍后紫外光譜掃描，掃描波長(zhǎng)范圍是200～600 nm。

1.3.2 膽汁紅外光譜測(cè)定 將新鮮家兔膽汁置于培養(yǎng)皿中，于60℃水浴箱中加熱烘干后，密閉保存，取少許干燥膽汁與溴化銀一起壓片，在紅外光譜儀中進(jìn)行紅外光譜掃描。

1.3.3 降壓作用觀察 21只3月齡Sprague-Dawley大鼠，體重范圍250～300 g，隨機(jī)分成三組：假手術(shù)組、模型組和膽汁組，每組各7只。模型組和膽汁組大鼠通過(guò)結(jié)扎左腎動(dòng)脈建立高血壓模型，具體方法是：大鼠在全麻下做腹部正中切口，找到并暴露左腎，小心分離腎動(dòng)脈和腎靜脈，然后平行腎動(dòng)脈放置一去尖5號(hào)針頭，一并結(jié)扎動(dòng)脈和針頭，抽出針頭，逐層關(guān)腹，關(guān)腹后腹腔注射20萬(wàn)單位青霉素防止感染[1]。假手術(shù)組大鼠在分離腎動(dòng)脈后，不做動(dòng)脈結(jié)扎，直接關(guān)腹。術(shù)后1個(gè)月大鼠基本康復(fù)，開(kāi)始給藥。模型組、假手術(shù)組用生理鹽水灌胃，膽汁組用新鮮的家兔膽汁灌胃，用量為0.3 mL/100 g。1個(gè)月后，全麻下進(jìn)行頸總動(dòng)脈插管，插管與Med Lab生物信號(hào)采集系統(tǒng)連接，測(cè)定大鼠血壓，連續(xù)測(cè)定5 min。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 新鮮家兔膽汁紫外光譜、紅外光譜圖

紫外光譜顯示，276 nm和386 nm波長(zhǎng)處各有一吸收峰，強(qiáng)度分別是0.419和0.314（圖1），不同于雞、牛、豬、魚(yú)羊的紫外光譜（圖2）。紅外光譜中，指紋區(qū)1 015.39～1 090.64 cm-1處有一組特征峰（3個(gè)），在918.26～968.4 cm-1處也有一組特征峰（3個(gè)）（圖3）。

圖1 新鮮家兔膽汁的紫外光譜

圖2 其他動(dòng)物膽汁的紫外光譜

圖3 新鮮家兔膽汁紅外光譜

2.2 家兔膽汁對(duì)大鼠動(dòng)脈體重、血壓的影響

模型組大鼠的血壓值高于假手術(shù)組，兩組平均動(dòng)脈壓分別為15.8 kPa和12.8 kPa，說(shuō)明高血壓模型建立成功。而膽汁組大鼠的血壓明顯較模型組低，平均動(dòng)脈壓從15.8 kPa降到12.3 kPa，說(shuō)明膽汁降壓有效果。同時(shí)膽汁組大鼠體重較假手術(shù)組及模型組低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 家兔膽汁對(duì)大鼠體重和血壓的影響（±s）

表1 家兔膽汁對(duì)大鼠體重和血壓的影響（±s）

注：與模型組比較，*P＜0.05

組別 只數(shù) 體重（g） 平均動(dòng)脈壓（kPa）假手術(shù)組模型組膽汁組777 302±10 308±8 290±11 12.8±0.8*15.8±1.2 12.3±1.8*

3 討論

家兔飼養(yǎng)在中國(guó)具有較大的規(guī)模，家兔膽汁是其副產(chǎn)品之一，具有獨(dú)特的理化特性和藥理作用，它的開(kāi)發(fā)利用逐漸受到關(guān)注，研究清楚其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、藥理作用有利于其開(kāi)發(fā)利用。動(dòng)物膽汁成分和各成分的比例相對(duì)固定，其紫外、紅外光譜應(yīng)該是固定不變的，可作為鑒別膽汁的一種可靠方法。劉養(yǎng)清等[2]觀察了牛、羊、魚(yú)、雞、豬等的紫外光譜，結(jié)果顯示各種動(dòng)物的紫外光譜形狀各異，具有特征性。本實(shí)驗(yàn)首次檢測(cè)了家兔膽汁的紫外光譜，與雞、牛、豬、魚(yú)、羊等動(dòng)物膽汁的紫外光譜有明顯的區(qū)別，家兔膽汁在波長(zhǎng)276 nm和386 nm處有吸收，吸收強(qiáng)度分別是0.419和0.314。對(duì)于單一化合物，紅外光譜可提供化合物的官能團(tuán)、結(jié)構(gòu)異構(gòu)、氫鍵等信息，是研究分子結(jié)構(gòu)的主要手段之一，紅外光譜分特征區(qū)和指紋區(qū)，4 000～1 250 cm-1范圍為特征區(qū)，主要來(lái)源于含氫原子的單鍵、各種三鍵和雙鍵的伸縮振動(dòng)；4 00～1 250 cm-1范圍為指紋區(qū)，主要來(lái)源于各單鍵的伸縮振動(dòng)和多數(shù)基團(tuán)的彎曲振動(dòng)，彎曲振動(dòng)的能級(jí)差別小，因此指紋區(qū)的譜帶較密集，指紋區(qū)圖譜猶如人的指紋，能敏感反應(yīng)化學(xué)結(jié)構(gòu)上的細(xì)小差別。動(dòng)物膽汁雖然不是單一化合物且化學(xué)成分復(fù)雜，但是其成分固定且各組分比例固定，因此在相同條件下測(cè)定其紅外光譜應(yīng)該是一致的。劉養(yǎng)清等[3]證明各種動(dòng)物膽汁的紅外光譜是確定的，可作為鑒別指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)所測(cè)得的家兔膽汁紅外光譜，在特征區(qū)與其他動(dòng)物膽汁無(wú)明顯區(qū)別[4]，在指紋區(qū)則有特征性變化，1 015.39～1 090.64 cm-1處有一組3個(gè)小峰組成的吸收峰，其中，在1 043.77 cm-1處有一強(qiáng)吸收峰，在918.26～968.4 cm-1處也有一組小吸收峰，可作為鑒別家兔膽汁的可靠指標(biāo)。

膽汁性寒、味苦，具有多種功效，是我國(guó)中藥的傳統(tǒng)用藥，近年膽制劑的研究開(kāi)發(fā)和臨床運(yùn)用取得一定成績(jī)，例如蛇膽川貝液，用于治療感冒咳嗽、氣管炎，受患者青睞；雞膽汁加糖調(diào)勻，治療小兒百日咳療效顯著；牛黃降壓片，降壓效果確切，其主要成分是牛黃、冰片等，牛黃中的磺酸去氧膽酸是主要的降壓成分。家兔膽汁的膽汁酸提取物制劑也有少量運(yùn)用于臨床，例如利咽靈片，用于治療小兒急性咽喉炎，也有制成利膽片，用于利膽、促消化。家兔膽汁含去氧膽酸和膽酸兩種膽汁酸，比例為9∶1，是提取去氧膽酸的理想材料。吳克霞等[4]證明從家兔膽汁中提取的去氧膽酸有降壓作用。楊履艷等[5]報(bào)道兔膽粉濾過(guò)液能降低垂體后葉素引起的ST段、T波抬高，提示家兔膽汁有擴(kuò)張血管作用，具有開(kāi)發(fā)為降壓藥的前景。但在膽汁提取過(guò)程中存在提取率低（只有3%）、破壞膽綠素、?；撬岬冉祲撼煞忠约耙胗卸净瘜W(xué)物質(zhì)等問(wèn)題。膽汁是體內(nèi)的正常成分，毒性較低，臨床上有直接利用豬膽汁綠豆浸膏治療高血壓[6]的做法，因此，本實(shí)驗(yàn)直接觀察了家兔新鮮膽汁的降壓作用，結(jié)果顯示，膽汁能降低腎性高血壓大鼠的血壓，同時(shí)還能降低大鼠的體重，這可能與家兔膽汁中去氧膽酸舒張血管和降低血脂的功效有關(guān)。

[1]鄭惠珍，陳小源，梁洪英，等.川芎嗪對(duì)壓力超負(fù)荷大鼠血液流變學(xué)的影響[J].中國(guó)流變學(xué)雜志，2006，16（1）：9-11.

[2]劉養(yǎng)清，苑戎，趙慧輝.雞膽汁的紅外吸收光譜特性[J].光譜學(xué)與光譜分析，2002，22（5）：779-782.

[3]劉養(yǎng)清，劉二保.動(dòng)物膽汁理化特性及藥用[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：50-55.

[4]吳克霞，李方才，張憲黨，等.兔膽酸類物質(zhì)的制備及降壓活性的研究[J].山東醫(yī)藥工業(yè)，1999，18（6）：28.

[5]楊履艷，馮芹喜.兔膽對(duì)垂體后葉素所致家兔心肌缺血保護(hù)作用[J].牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1997，18（2）：7-9.

[6]李建平，楊正華.綠豆豬膽降壓片的制備及臨床應(yīng)用[J].中華醫(yī)藥雜志，2005，5（12）：36-37.