p38MAPK介導(dǎo)的Fas/FasL凋亡信號(hào)通路在大鼠抗GBM腎炎中的作用①

王曉天 李向陽 秦蘇萍 李小翠 尤紅娟 湯仁仙

(徐州醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室，徐州221002)

大鼠抗腎小球基底膜(GBM)腎炎是利用異體抗大鼠GBM抗體誘導(dǎo)后產(chǎn)生的具有典型的人類新月體性腎炎病理變化的動(dòng)物模型[1]。此腎炎模型病程的早、中期，腎小球內(nèi)大量的T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞浸潤，腎小球內(nèi)皮細(xì)胞明顯增多;病程晚期，腎小球細(xì)胞明顯減少、纖維化、硬化，最終喪失正常腎功能[1-3]。研究發(fā)現(xiàn)，腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)減少與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)[4]。

大量研究表明，絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族成員p38MAPK在人類新月體性腎小球腎炎發(fā)病過程中起到了很重要的作用。目前，研究的熱點(diǎn)主要集中在參與炎癥反應(yīng)方面，而對(duì)于其是否參與了腎小球細(xì)胞凋亡研究很少。p38MAPK調(diào)控細(xì)胞凋亡的機(jī)制非常復(fù)雜[5-9]，其中p38 MAPK可通過增強(qiáng)Fas/FasL表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞的凋亡[7]。為此，本實(shí)驗(yàn)利用大鼠抗GBM腎炎模型，運(yùn)用工具藥p38MAPK特異性阻斷劑SB203580處理該模型，通過觀察腎組織中 p-p38MAPK、p38MAPK、FasL、Fas、Caspase-3蛋白表達(dá)，腎小球細(xì)胞凋亡以及腎組織病理學(xué)變化的情況，探討p38MAPK介導(dǎo)的Fas/FasL通路在大鼠抗GBM腎炎發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用，為臨床防治人類新月體性腎炎提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 正常健康SD大鼠25只，體重180～220克，由徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.2 主要試劑 兔抗大鼠GBM血清(本實(shí)驗(yàn)室制備并保存);尿蛋白定量測(cè)試盒、血肌酐測(cè)試盒及血尿素氮測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所);兔抗大鼠p-p38MAPK多克隆抗體(Santa Cruz公司);羊抗大鼠p38MAPK多克隆抗體(Santa Cruz公司);兔抗大鼠 Fas多克隆抗體(Santa Cruz公司);兔抗大鼠FasL多克隆抗體(Santa Cruz公司);兔抗大鼠active-Caspase-3多克隆抗體(Sigma公司)，SB203580(Promega公司);大鼠免疫組化檢測(cè)試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司);TUNEL試劑盒(美國Roche公司)。

1.2 方法

1.2.1 復(fù)制大鼠抗GBM腎炎模型及動(dòng)物分組[10]正常SD大鼠10只，實(shí)驗(yàn)前在本實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)4天，以適應(yīng)環(huán)境。在此期間單籠收集大鼠24小時(shí)尿，測(cè)24小時(shí)尿蛋白含量，采血收集血清測(cè)血肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)含量，所有大鼠的上述指標(biāo)均無異常。大鼠隨機(jī)分為兩組，腎炎模型組和正常對(duì)照組各5只。腎炎模型組大鼠一次性尾靜脈注射兔抗大鼠GBM血清;正常對(duì)照組大鼠尾靜脈注射等量正常兔血清，劑量均為1 ml/100 g[10]。腎炎模型組于實(shí)驗(yàn)前1周足墊皮內(nèi)注射正常兔血清進(jìn)行預(yù)免疫。分別于實(shí)驗(yàn)的第2、7、14、21和28天，收集24小時(shí)尿液檢測(cè)24小時(shí)尿蛋白含量，心臟采血收集血清檢測(cè)血肌酐和血尿素氮含量，取腎皮質(zhì)用于免疫印跡檢測(cè)。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中腎炎模型組和正常對(duì)照組大鼠均未見死亡。

1.2.2 腹腔注射阻斷劑SB203580及動(dòng)物分組 正常SD大鼠15只，實(shí)驗(yàn)前在本實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)4天，以適應(yīng)環(huán)境，并檢測(cè)24小時(shí)尿蛋白含量、血肌酐和血尿素氮含量均無異常。復(fù)制大鼠抗GBM腎炎模型。隨機(jī)將大鼠分為三組，每組5只，阻斷劑SB203580組于注射兔抗GBM血清后3小時(shí)腹腔注射阻斷劑SB203580，1 mg/1 kg，隔天注射一次(SB203580 先溶于DMSO配成10 mmol/L的溶液，注射時(shí)用無菌生理鹽水將其配制成DMSO體積分?jǐn)?shù)為10%的溶液)[11，12];溶媒組大鼠注射等體積的 DMSO 及無菌生理鹽水混合物;腎炎模型組不做任何處理。分別于實(shí)驗(yàn)第2、7、14天收集24小時(shí)尿液檢測(cè)24小時(shí)尿蛋白含量，心臟采血收集血清檢測(cè)血肌酐和血尿素氮含量。于第14天處死大鼠，取腎皮質(zhì)，一部分用于HE染色觀察腎組織病理改變，一部分用于免疫印跡、免疫組化及TUNEL凋亡檢測(cè)。

1.2.3 生化指標(biāo)檢測(cè) 分別于不同時(shí)間點(diǎn)，收集大鼠24小時(shí)尿和血清樣本，采用考馬斯亮藍(lán)法(CBB法)測(cè)24小時(shí)尿蛋白含量;采用苦味酸除蛋白法測(cè)血肌酐含量，二乙酰一肟法測(cè)血尿素氮含量。

1.2.4 腎組織病理學(xué)檢查 SD大鼠經(jīng)2%戊巴比妥鈉麻醉后，取小塊腎皮質(zhì)用多聚甲醛固定后，石蠟包埋，制成切片后行HE染色，光鏡觀察腎小球體積大小、腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)、新月體形成及腎小管內(nèi)蛋白管型等情況。

1.2.5 TUNEL法檢測(cè)腎小球凋亡細(xì)胞 按照TUNEL試劑盒說明書進(jìn)行腎組織切片常規(guī)脫蠟水化，蛋白酶K孵育，3%過氧化氫阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，封閉滴加TUNEL反應(yīng)液，37℃孵育60分鐘，以標(biāo)記溶液代替TUNEL反應(yīng)液作為陰性對(duì)照，熒光顯微鏡觀察結(jié)果。熒光顯微鏡下，點(diǎn)狀綠色熒光即為陽性細(xì)胞。

1.2.6 蛋白免疫印跡檢測(cè) 取腎皮質(zhì)組織勻漿、離心，BCA法測(cè)定蛋白濃度，進(jìn)行蛋白定量。SDSPAGE分離后，轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜，封閉。加1∶1 000一抗4℃過夜，再加1∶1 000二抗室溫孵育，顯色。用ImageJ軟件分析，以待檢測(cè)指標(biāo)與GAPDH灰度值的比值來表示其相對(duì)含量。

1.2.7 免疫組織化學(xué)檢測(cè) SD大鼠經(jīng)2%戊巴比妥鈉麻醉后，取小塊腎皮質(zhì)用多聚甲醛固定后，梯度酒精脫水，石蠟包埋，切片，貼片。切片脫蠟，梯度酒精脫水，消除內(nèi)源性辣根過氧化物酶活性。PBS洗后用血清封閉，一抗4℃過夜，PBS洗3遍，辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗，37℃孵育30分鐘，PBS洗3遍，DAB顯色，鏡檢控制顯色時(shí)間。然后蘇木素復(fù)染、梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹脂封片，光鏡下觀察。

2 結(jié)果

2.1 動(dòng)物分組生化指標(biāo)變化情況 復(fù)制大鼠抗GBM腎炎模型，將大鼠分為兩組:腎炎模型組和正常對(duì)照組。分別于實(shí)驗(yàn)的第2、7、14、21和28天采集尿液和血液做生化指標(biāo)檢測(cè)。結(jié)果可示(表1):腎炎模型組大鼠24小時(shí)尿蛋白量于第2天開始升高，14天達(dá)高峰，后逐漸下降，但仍高于正常對(duì)照組(P＜0.05);血肌酐和血尿素氮于第2天開始升高，并隨著病程進(jìn)展持續(xù)上升，各時(shí)間點(diǎn)均明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05)，這些皆與我們以前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致，表明大鼠抗GBM腎炎模型復(fù)制成功[1，4]。

繼之，應(yīng)用p38MAPK阻斷劑SB203580處理大鼠腎炎模型，并將大鼠分為三組:腎炎模型組、溶媒組和SB203580組，分別于第2、7、14天做生化指標(biāo)檢測(cè)。結(jié)果顯示(表2)，SB203580組第7、14天時(shí)24小時(shí)尿蛋白量明顯減少，血肌酐、血尿素氮水平顯著降低。腎炎模型組和溶媒組生化指標(biāo)無明顯改變，與SB203580組比較差異有顯著性(P＜0.05)。

2.2 動(dòng)物分組p-p38MAPK、p38MAPK、FasL、Fas、Caspase-3蛋白的表達(dá)情況 在成功復(fù)制動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上，分別于第2、7、14、21和28天，取腎皮質(zhì)檢測(cè) p-p38MAPK、p38MAPK、FasL、Fas、Caspase-3 在不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)水平。免疫印跡結(jié)果(圖1)顯示:腎炎模型組大鼠腎組織p38MAPK磷酸化水平于第2天就明顯高于正常對(duì)照組，此后一直維持在較高水平，與正常對(duì)照組相比差異有顯著性(P＜0.05);而p38MAPK蛋白表達(dá)量各時(shí)間點(diǎn)與正常對(duì)照組相比無明顯變化。FasL、Fas蛋白表達(dá)量于第2天開始升高，第14天達(dá)到高峰，第21天有所下降，但仍高于正常對(duì)照組(P＜0.05)。Caspase-3是重要的凋亡效應(yīng)因子，正常情況下，Caspase-3蛋白酶以無活性的前體形式定位在胞漿中，只有當(dāng)細(xì)胞凋亡時(shí)才被切割激活為有活性的Caspase-3。因此，用抗active-Caspase-3抗體作免疫印跡分析，檢測(cè)胞漿中切割后Caspase-3的活性片段，由圖1可知，Caspase-3活性于第2天開始升高，第21天達(dá)到高峰，與正常對(duì)照組相比差異有顯著性(P＜0.05)。

表1 腎炎模型組和正常對(duì)照組大鼠各時(shí)間點(diǎn)生化指標(biāo)(±s，n=5)Tab．1 Biochemical indexes of nephritic group and normal control group in rats(±s，n=5)

表1 腎炎模型組和正常對(duì)照組大鼠各時(shí)間點(diǎn)生化指標(biāo)(±s，n=5)Tab．1 Biochemical indexes of nephritic group and normal control group in rats(±s，n=5)

Note:1)P＜0.05 vs normal control group.

Time(day) Groups 24 h urinary protein(mg/24 h)Scr(μmol/L)BUN(mmol/L)2 Nephritic group 5.85±0.391) 68.98±2.041) 5.75±0.371)04±0.59 Normal control group 4.96±0.42 60.15±4.75 5.09±0.51 7 Nephritic group 8.27±1.371) 84.76±4.961) 6.41±0.441)Normal control group 5.15±0.97 61.58±5.36 5.18±0.49 14 Nephritic group 26.48±2.431) 99.89±6.031) 7.06±0.621)Normal control group 5.10±1.03 63.37±4.92 5.02±0.51 21 Nephritic group 29.52±2.811) 129.96±6.371) 8.76±0.531)Normal control group 5.37±1.18 64.52±5.75 5.21±0.48 28 Nephritic group 24.31±2.371) 152.37±5.411) 9.91±0.721)Normal control group 5.04±0.94 62.15±4.78 5.

表2 SB203580組、腎炎模型組及溶媒組大鼠各時(shí)間點(diǎn)生化指標(biāo)(±s，n=5)Tab．2 Biochemical indexes of SB203580 group，Nephritic group and Solvent group in rats(±s，n=5)

表2 SB203580組、腎炎模型組及溶媒組大鼠各時(shí)間點(diǎn)生化指標(biāo)(±s，n=5)Tab．2 Biochemical indexes of SB203580 group，Nephritic group and Solvent group in rats(±s，n=5)

Note:1)P＜0.05 vs Nephritic group，2)P＜0.05 vs Solvent group.

Time(day) Groups 24 h urinary protein(mg/24 h)Scr(μmol/L)BUN(mmol/L)2 SB203580 group 5.11±0.271)2) 59.89±2.641)2) 5.35±0.291)2)39 Nephritic group 5.55±0.28 69.77±3.40 5.84±0.33 Solvent group 5.35±0.28 68.85±2.85 5.43±0.40 7 SB203580 group 5.14±0.351)2) 59.75±2.751)2) 5.61±0.401)2)Nephritic group 8.84±0.11 82.64±3.14 6.30±0.20 Solvent group 8.13±0.37 85.81±3.43 6.32±0.46 14 SB203580 group 11.03±1.201)2) 65.41±3.651)2) 5.59±0.311)2)Nephritic group 27.76±0.63 99.82±3.35 6.9±0.12 Solvent group 25.21±0.26 98.13±3.58 6.84±0.

圖1 腎炎模型組和正常對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)腎組織p-p38MAPK、p38MAPK、FasL、Fas和Caspase-3蛋白表達(dá)Fig．1 The expression of p-p38MAPK，p38MAPK，F(xiàn)asL，F(xiàn)as and Caspase-3 in nephritic group and normal control group

隨后，應(yīng)用免疫印跡及免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)了腎炎模型第14天時(shí)p38MAPK阻斷劑SB203580對(duì)以上蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果可示，SB203580明顯抑制了腎炎模型第14天時(shí)腎組織中p38MAPK的磷酸化水平、FasL、Fas的表達(dá)以及Caspase-3的活性，而SB203580對(duì)腎組織中p38MAPK蛋白的表達(dá)無影響(見圖2～4)。

2.3 動(dòng)物分組腎組織病理學(xué)反應(yīng) 本實(shí)驗(yàn)室以前的結(jié)果顯示腎炎模型組大鼠尾靜脈注射兔抗大鼠GBM血清后2天[4]，腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)稍有增多;14天腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)明顯增多，細(xì)胞型新月體形成，腎小管內(nèi)可見大量蛋白管型，間質(zhì)大量炎性細(xì)胞浸潤?？梢?，14天時(shí)是腎炎模型組大鼠病理學(xué)反應(yīng)較為嚴(yán)重的時(shí)期，因此，本實(shí)驗(yàn)選擇第14天觀察SB203580是否可減輕腎炎大鼠病理學(xué)反應(yīng)。結(jié)果顯示(圖5):腎炎模型組及溶媒組大鼠腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)明顯增多，間質(zhì)淋巴細(xì)胞浸潤，腎小管內(nèi)可見大量蛋白管型;而SB203580組，炎癥細(xì)胞浸潤較腎炎模型組明顯減少，腎小管內(nèi)未見蛋白管型。

圖2 SB203580組、腎炎模型組及溶媒組第14天腎組織 p-p38MAPK、p38MAPK、FasL、Fas和Caspase-3蛋白表達(dá)Fig．2 The expression of p-p38MAPK，p38MAPK，F(xiàn)asL，F(xiàn)as and Caspase-3 in SB203580 group，Nephritic group and Solvent group on the 14th day

圖3 SB203580組、腎炎模型組及溶媒組大鼠第14天腎組織FasL表達(dá)情況(免疫組織化學(xué)，10×40)Fig．3 The FasL expression of SB203580 group，Nephritic group and Solvent group in rats on the 14th day(p-v two steps，10×40)

圖5 SB203580組、腎炎模型組及溶媒組大鼠第14天腎組織病理學(xué)觀察(HE，10×40)Fig．5 The pathological changes of SB203580 group，Nephritic group and Solvent group in rats on the 14 th day(HE，10×40)

圖6 SB203580組、腎炎模型組及溶媒組大鼠第14天細(xì)胞凋亡情況(TUNEL，10×20)Fig．6 The apoptosis of SB203580 group，Nephritic group and Solvent group in rats on the 14 th day(TUNEL，10×20)

2.4 動(dòng)物分組腎組織細(xì)胞凋亡情況 我們以前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，腎炎模型組大鼠腎小球內(nèi)凋亡細(xì)胞數(shù)第2天開始升高，于14天達(dá)高峰，21天有所減少，但仍維持較高水平[4]。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇14天觀察SB203580對(duì)腎炎大鼠腎小球內(nèi)凋亡細(xì)胞數(shù)的影響。TUNEL結(jié)果(圖6)可示:腎炎模型組及溶媒組大鼠腎小球、腎小管和腎間質(zhì)部位可見大量凋亡細(xì)胞，鏡下呈綠色熒光。SB203580組腎小球、腎小管和腎間質(zhì)部位也可見凋亡細(xì)胞，但數(shù)量較模型組及溶媒組明顯減少。

3 討論

大鼠抗GBM腎炎模型是研究人類新月體性腎炎發(fā)病機(jī)制的常用動(dòng)物模型，此模型病程的早、中期，腎小球內(nèi)大量的免疫細(xì)胞浸潤，腎小球內(nèi)皮細(xì)胞明顯增多;至病程晚期，腎小球內(nèi)細(xì)胞明顯減少，腎小球纖維化，最終腎功能完全喪失。我們以前的實(shí)驗(yàn)表明病程晚期腎小球細(xì)胞明顯減少與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，證實(shí)細(xì)胞凋亡參與了抗GBM腎炎的發(fā)病機(jī)制，加重了腎炎病變[4]。

研究發(fā)現(xiàn)，p38MAPK是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的重要物質(zhì)之一，炎癥細(xì)胞如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的激活可誘導(dǎo)p38 MAPK的磷酸化，磷酸化的p38 MAPK轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核，使轉(zhuǎn)錄因子(ATF-2、c-Jun、NF-κB)活化，從而調(diào)節(jié)多種基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化和凋亡[13]。而有關(guān)內(nèi)容目前在人類新月體腎小球腎炎發(fā)病機(jī)制中少見報(bào)道。大量文獻(xiàn)顯示[5-9]，p38 MAPK經(jīng)多條途徑調(diào)控細(xì)胞凋亡，其中p38 MAPK可通過增強(qiáng)Fas/FasL表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞的凋亡[7]。此外，我們以前的研究[4]發(fā)現(xiàn)，在大鼠抗GBM腎炎中，腎小球細(xì)胞凋亡、新月體形成及病程進(jìn)展與Fas/FasL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。因此，大鼠抗GBM腎炎模型中，p38MAPK是否可以誘導(dǎo)腎小球細(xì)胞凋亡以及是否可經(jīng)Fas∕FasL通路誘導(dǎo)，從而加重腎炎病變，是本實(shí)驗(yàn)研究的重點(diǎn)。

為了證實(shí)以上觀點(diǎn)，我們首先成功復(fù)制了大鼠抗GBM腎炎模型，并分別于實(shí)驗(yàn)的第2、7、14、21和28天取腎組織檢測(cè) p-p38MAPK、p38MAPK、FasL、Fas、Caspase-3的表達(dá)水平。免疫印跡結(jié)果顯示:腎炎模型組p38MAPK磷酸化水平于第2天就明顯高于正常對(duì)照組，此后逐漸上升，一直維持在較高水平，而腎炎模型組p38MAPK蛋白表達(dá)量各時(shí)間點(diǎn)與正常對(duì)照組相比無明顯變化;FasL、Fas蛋白表達(dá)量于第2天開始升高，第14天達(dá)到高峰，第21天有所下降;Caspase-3活性于第2天開始升高，第21天達(dá)到高峰。可見，p38MAPK磷酸化水平與FasL、Fas表達(dá)，Caspase-3激活趨勢(shì)基本一致。據(jù)此，我們推測(cè):Fas/FasL通路的激活與p38MAPK的活化密切相關(guān)。

為了進(jìn)一步證實(shí)這一點(diǎn)，我們選用了p38MAPK的特異性阻斷劑SB203580作為工具藥檢測(cè)其對(duì)大鼠抗GBM腎炎的作用。SB203580是吡啶咪唑芳基雜環(huán)類化合物，與p38MAPK競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合ATP位點(diǎn)，使p38MAPK失去與ATP結(jié)合的能力，從而高效抑制p38MAPK的磷酸化，使其失去激酶活性，最終實(shí)現(xiàn)對(duì)p38MAPK通路的抑制。SB203580于注射兔抗GBM血清后3小時(shí)腹腔注射，此后隔天注射一次，于實(shí)驗(yàn)第14天處死大鼠，采集標(biāo)本進(jìn)行相關(guān)研究。之所以選擇第14天作為此次研究的重點(diǎn)，是由于pp38MAPK、FasL、Fas的表達(dá)以及各項(xiàng)生化指標(biāo)在第14天明顯增高，且腎小球細(xì)胞凋亡數(shù)于第14天達(dá)高峰[4]。

阻斷劑SB203580應(yīng)用后，結(jié)果顯示:SB203580能夠明顯減少第7、14天時(shí)24小時(shí)尿蛋白，降低血肌酐、血尿素氮的水平;第14天時(shí)，SB203580抑制了大鼠腎炎模型中 p-p38MAPK、FasL、Fas、Caspase-3的表達(dá);炎癥細(xì)胞浸潤明顯減少，腎小管內(nèi)未見蛋白管型;腎小球、腎小管和腎間質(zhì)部位凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯減少。究其原因，可能是大鼠抗GBM腎炎模型建立后，炎癥細(xì)胞的激活誘導(dǎo)p38 MAPK磷酸化，磷酸化的p38MAPK轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核，使轉(zhuǎn)錄因子ATF-2、c-Jun活化，從而促進(jìn)Fas/FasL的表達(dá)增加[14];FasL與靶細(xì)胞表面的Fas結(jié)合，進(jìn)而啟動(dòng)Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致腎組織中細(xì)胞大量凋亡，致使病程后期腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)進(jìn)行性減少，最終加劇了腎小球纖維化，腎功能減退。

總之，通過本實(shí)驗(yàn)研究，一方面證實(shí)了p38MAPK參與了大鼠抗GBM腎炎的發(fā)生發(fā)展如炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡等，并能通過Fas/FasL信號(hào)通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;另一方面其阻斷劑SB203580能夠減輕大鼠抗GBM腎炎的病理反應(yīng)，降低生化指標(biāo)，這均為臨床進(jìn)一步闡明人類新月體性腎小球腎炎的發(fā)病機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，且為防治人類新月體性腎炎提供了新的思路。

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