結(jié)核抗體蛋白芯片法對(duì)泌尿系結(jié)核的診斷價(jià)值

韓 剛，陳宇東，李蘇利，劉偉英，張 倩，高江平

（1.解放軍252醫(yī)院泌尿外科，河北 保定071000；2.解放軍總醫(yī)院，北京100853）

近年來泌尿系結(jié)核發(fā)病率有所上升，但由于部分醫(yī)生缺乏認(rèn)識(shí)以及氟喹諾酮類抗菌藥物的廣泛使用，使得泌尿系結(jié)核癥狀多不典型，又缺乏快速特異性的檢查措施，使不少患者延誤診治［1，2］。本研究中我們采用蛋白芯片法檢測(cè)血清抗結(jié)核分枝桿菌脂阿拉伯甘露醇（LAM）、基因工程重組的16kD（結(jié)核分枝桿菌蛋白，分子量16kD）和38kD（結(jié)核分枝桿菌蛋白，分子量38kD）IgG抗體，并與尿沉渣找抗酸桿菌試驗(yàn)進(jìn)行比較，探討該方法對(duì)泌尿系結(jié)核的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 泌尿系結(jié)核組：2009年3月－2011年3月我院泌尿外科收治的52例泌尿系結(jié)核患者，男性22例，女性30例；年齡中位數(shù)43（21－71）歲，其中單純腎結(jié)核11例，腎輸尿管結(jié)核25例，腎輸尿管膀胱結(jié)核16例，均經(jīng)組織病理檢查或尿沉渣找抗酸桿菌試驗(yàn)并隨訪6個(gè)月以上確診。對(duì)照組為同期收治的泌尿系非特異性感染患者89例，男性32例，女性57例，均經(jīng)密切隨訪1年以上，其間均未出現(xiàn)結(jié)核相關(guān)癥狀，并多次尿沉渣找抗酸桿菌試驗(yàn)陰性。

1.2 檢測(cè)方法 真空采集靜脈血2ml分離血清（體積不少于150μl），新鮮血樣在2－8℃環(huán)境下存放不超過48h。結(jié)核分枝桿菌IgG抗體檢測(cè)試驗(yàn)盒（蛋白芯片）及生物芯片識(shí)別儀（PBT－X4）購自南京大淵生物技術(shù)工程有限公司，按說明書規(guī)定方法操作。

1.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用 Microsoft Office Excel 2003電子表格分別計(jì)算單獨(dú)應(yīng)用LAM／16kD／38 kD或聯(lián)合應(yīng)用2種／3種抗體診斷泌尿系結(jié)核的敏感性和特異性；并采用 MedCalc○RVersion9.6.4.0軟件（Frank Schoonjans，Belgium）分別構(gòu)建上述5項(xiàng)診斷試驗(yàn)的受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線，通過與尿沉渣找抗酸桿菌試驗(yàn)比較以及相互比較曲線下面積（area under the curve，AUC）、Z值及95%可信區(qū)間等指標(biāo)評(píng)價(jià)其診斷效能。P＜0.05作為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

如表1及圖1所示，單獨(dú)應(yīng)用抗LAM、16kD和38kD抗體檢測(cè)泌尿系結(jié)核的敏感性分別為67.31%、23.08%和61.54%，特異性分別為89.89%、96.63%和100.00%，相應(yīng)的 AUC分別為0.786、0.599和0.808，其中38kD的AUC顯著高于尿沉渣找抗酸桿菌試驗(yàn)（Z＝2.042，P＝0.041）。

表1 結(jié)核抗體蛋白芯片法與尿沉渣找抗酸桿菌試驗(yàn)對(duì)泌尿系結(jié)核的診斷效果評(píng)價(jià)

圖1 結(jié)核抗體蛋白芯片法LAM／16kD／38kD和聯(lián)合2種／3種抗體以及尿沉渣找抗酸桿菌試驗(yàn)的ROC曲線

聯(lián)合2種或3種抗體檢測(cè)泌尿系結(jié)核的敏感性分別為67.31%和11.54%，特異性分別為96.63%和100%，相應(yīng)的AUC分別為0.820和0.558，其中聯(lián)合2種抗體的AUC顯著高于尿沉渣找抗酸桿菌試驗(yàn)（Z＝2.042，P＝0.041）。

3 討論

泌尿系結(jié)核的診斷主要依靠病史分析、病原學(xué)檢查和影像學(xué)檢查［3，4］。其中以尿液病原學(xué)檢查最為可靠。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，連續(xù)3－5次尿沉渣找抗酸桿菌試驗(yàn)的陽性率為5.8%－42.7%［5，6］，但患者會(huì)陰部、包皮、尿道口處可能存在的包皮垢分枝桿菌、枯草桿菌經(jīng)抗酸染色亦為陽性結(jié)果，本研究中該試驗(yàn)的陽性率為46.15%，與文獻(xiàn)報(bào)告基本一致，對(duì)照組中亦有9例結(jié)果為陽性，但經(jīng)密切隨訪6個(gè)月以上未發(fā)生結(jié)核，考慮可能為收集尿液時(shí)受到其它分枝桿菌的污染，提示需嚴(yán)格控制標(biāo)本采集條件；尿結(jié)核菌培養(yǎng)最具診斷價(jià)值［7］，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，但陽性率低，操作復(fù)雜，培養(yǎng)時(shí)間長達(dá)4－8周，難以滿足臨床需要。

結(jié)核抗體蛋白芯片是基于生物芯片技術(shù)的一種新的檢測(cè)方法，其基本原理是以微孔濾膜為載體，利用微陣列技術(shù)將的結(jié)核菌LAM、16kD和38kD等多種抗原固相于同一膜片上，使抗原抗體反應(yīng)在固相膜上快速進(jìn)行，再以免疫金作為標(biāo)記物在膜上顯色，然后通過加入芯片識(shí)別系統(tǒng)進(jìn)行結(jié)果分析［8，9］。

LAM是分枝桿菌屬細(xì)胞壁特有的一種多糖，具有較強(qiáng)的免疫原性，診斷結(jié)核病的敏感性較高［10，11］，但除結(jié)核分枝桿菌外，如包皮垢桿菌、枯草桿菌等也含有LAM成分，因而其特異性較低［12］。本研究中，LAM陽性的診斷敏感性為67.31%，特異性為91.01%，對(duì)照組中有8例LAM陽性，經(jīng)密切隨訪1年以上未發(fā)生結(jié)核病，考慮可能為其它分枝桿菌污染。38kD與16kD是結(jié)核分枝桿菌特有的抗原，與其它分枝桿菌不存在交叉反應(yīng)，診斷特異性較高［13－14］。但其中16kD在人接種了卡介苗后也會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。本研究中16kD陽性的敏感性為23.08%，特異性為96.63%，有3例對(duì)照組患者16 kD陽性，可能與上述情況有關(guān)。16kD的診斷價(jià)值較低，AUC僅為0.599，接近0.5，不但低于LAM（Z＝3.253，P＝0.001）和 38kD（Z＝3.337，P＝0.001），而且與尿沉渣找抗酸桿菌試驗(yàn)相比亦無顯著性差異（Z＝1.197，P＝0.231）。接種卡介苗后人體同樣會(huì)產(chǎn)生38kD抗體，但結(jié)核桿菌感染造成的38kD濃度明顯高于接種卡介苗所產(chǎn)生的38kD濃度，所以38kD檢測(cè)結(jié)果不受接種卡介苗影響。本研究中，38kD顯示出與LAM相同的高敏感性，且特異性為100%，ROC曲線分析結(jié)果提示38kD抗體的診斷效能顯著優(yōu)于尿沉渣找抗酸桿菌試驗(yàn)（Z＝2.042，P＝0.041）。

聯(lián)合檢測(cè)2種／3種抗體檢測(cè)泌尿系結(jié)核時(shí)，前者敏感性為67.31%，特異性為96.63%，ROC曲線分析結(jié)果提示該試驗(yàn)的診斷效能顯著優(yōu)于尿沉渣找抗酸桿菌試驗(yàn)（Z＝2.328，P＝0.020）；后者特異性為100.00%，但敏感性僅為11.54%，AUC為0.558，可信區(qū)間跨越0.5（0.472－0.641），診斷價(jià)值較低，與尿沉渣找抗酸桿菌試驗(yàn)相比無顯著性差異（Z＝1.763，P＝0.078）。

在顯著優(yōu)于尿沉渣找抗酸桿菌試驗(yàn)的2項(xiàng)試驗(yàn)中，聯(lián)合檢測(cè)2種抗體比單獨(dú)應(yīng)用38kD的診斷效能略優(yōu)，但兩者并無顯著差異（Z＝0.401，P＝0.689）。對(duì)照組38kD陽性率為0%，提示38kD是診斷泌尿系結(jié)核的高特異性指標(biāo)，對(duì)于否定病例患有泌尿系結(jié)核價(jià)值較高；而聯(lián)合檢測(cè)2種抗體的敏感性較好，可以作為確診泌尿系結(jié)核的診斷試驗(yàn)。

綜上所述，由于泌尿系結(jié)核表現(xiàn)不典型，尿沉渣找抗酸桿菌試驗(yàn)陽性率頗低，多次陰性仍不能排除結(jié)核診斷；同時(shí)蛋白芯片法血清結(jié)核抗體檢查方便、快速、具有較高的敏感性和特異性，因此蛋白芯片法結(jié)核抗體（LAM、16kD和38kD）檢測(cè)對(duì)泌尿系結(jié)核的診斷具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

［1］Pai M，O＇Brien R.New diagnostics for latent and active tuberculosis：state of the art and future prospects［J］.Semin Respir Crit Care Med 2008；29：560.

［2］竇 科，盧一平，李響，等.兩個(gè)時(shí)期腎結(jié)核的臨床分析［J］.臨床泌尿外科雜志，2005，20：609.

［3］夏術(shù)階，荊翌峰.關(guān)注泌尿系結(jié)核.臨床泌尿外科［J］.雜志，2005，20：385.

［4］賀大林.泌尿男性生殖系統(tǒng)結(jié)核診斷治療／／那彥群，孫光.中國泌尿外科疾病診斷治療指南［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：253－262.

［5］任選義，黃隨富，竇建衛(wèi)，等.晚期腎結(jié)核診斷新特征與治療分析（附39例報(bào)告）［J］.醫(yī)學(xué)信息手術(shù)學(xué)分冊(cè)，2008，25：395.

［6］丘少鵬，劉卓煒，陳俊星，等.腎結(jié)核281例分析［J］.中華泌尿外科雜志，社2002，23：398.

［7］Lenk S SJ.Genitourinary tuberculosis［J］.Caurr Opin Urol，2001，11：93.

［8］Steingart KR，Henry M，Laal S，et al.A systematic review of commercial serological antibody detection tests for the diagnosis of extra－pulmonary tuberculosis［J］.Thorax 2007；62：911.

［9］朱中元，王海波，劉愛國，等.抗結(jié)核分枝桿菌多種抗原的抗體檢測(cè)蛋白芯片研究［J］.中國熱帶醫(yī)學(xué)，2004，4（6）：907.

［10］Tessema TA，Bjune G，Hamasur B，et al.Circulating antibodies to lipoarabinomannan in relation to sputum microscopy，clinical features and urinary anti－lipoarabinomannan detection in pulmonary tuberculosis.Scand J Infect Dis 2002；34：97－103.

［11］Chan ED，Reves R，Belisle.IT，et al.Diagnosis of tuberculosis by a visually detectable immunoassay for lipoarabinomannan［J］.Am J Respir Crit Care Med，2000，161（5）.

［12］薛承巖，杜新生，劉懷森，等.酶聯(lián)免疫法檢測(cè)腦脊液阿拉伯糖甘露脂抗體診斷結(jié)核性腦膜炎［J］.中華結(jié)核和呼吸雜志，1999，22（1）：57.

［13］Demkow U，Ziolkowsk J，F(xiàn)ilewska M.Diagnostic value of different serological test for turberculosis in Poland［J］.Physiol Pharmacol，2004，55（Suppl3）：57.

［14］Wilkinson RJ，Haslov K，Rappuol R，et al.Evaluation of the recombinant 38－Kilodalton antigen of Mycobacterium tuberculosis of a potential immunodiagnostic reagent［J］.Journal of Clinical Microbiology，1997，35（3）：553.