黃龍通絡(luò)膠囊對(duì)大鼠心肌缺血再灌注心律失常的影響

趙 濤，盧 露，謝 偉，張曉紅

臨床上黃龍通絡(luò)膠囊主要用于治療中風(fēng)病中經(jīng)絡(luò)病癥，具有療效顯著、毒性低、副反應(yīng)小等特點(diǎn)。但在長(zhǎng)期臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，其對(duì)中風(fēng)伴有心律失常患者有著獨(dú)特的療效，這方面具體的作用機(jī)制研究甚少。因此，本試驗(yàn)以期通過(guò)建立心肌缺血再灌注心律失常模型，探討其作用于心律失常的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 黃龍通絡(luò)膠囊，由山東步長(zhǎng)制藥有限公司出品；鹽酸普羅帕酮片，每片50mg，由上海三維制藥有限公司提供；烏拉坦，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供。

1.2 儀器 BL-420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)；HX-300動(dòng)物呼吸機(jī)，成都泰盟儀器廠。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)大鼠80只，180g～220g，雌雄各半。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 分組及給藥 將大鼠分為假手術(shù)組、模型組、普羅帕酮組、黃龍通絡(luò)膠囊高劑量組（高劑量組）、黃龍通絡(luò)膠囊中劑量組（中劑量組）、黃龍通絡(luò)膠囊低劑量組（低劑量組），除假手術(shù)組10只外，其余各組分別為12只。按15mL／kg的體積，灌胃給予黃龍通絡(luò)膠囊高劑量（10.0g／kg）、中劑量（5.0g／kg）、低劑量（2.5g／kg），每天1次，連續(xù)15d。陽(yáng)性藥（27mg／kg）從第13天開(kāi)始灌胃給藥，每天1次，連續(xù)3d。

1.4.2 造模方法［1］末次給藥1h后，經(jīng)腹腔注射20%的烏拉坦（1.2g／kg）麻醉大鼠，行氣管插管，連接 HX-300動(dòng)物呼吸機(jī)，記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖和心率。在心尖搏動(dòng)最明顯處，剪開(kāi)皮膚，用止血鉗鈍性分開(kāi)肋間肌，打開(kāi)胸壁，用止血鉗撐斷第五肋骨，即可看到跳動(dòng)的心臟。用鑷子輕輕撕開(kāi)心包膜，擠出心臟，迅速在左心耳下緣1mm處用醫(yī)用帶線彎針穿過(guò)心肌淺表，穩(wěn)定5min后，在兩條線之間穿過(guò)一直徑為3mm×3mm的橡皮管，共同結(jié)扎于冠狀動(dòng)脈左前降支，引起冠脈閉塞造成心肌缺血，30min后剪斷結(jié)扎線取出橡皮管，恢復(fù)冠脈再灌注15min。假手術(shù)組開(kāi)胸穿線，不結(jié)扎。全實(shí)驗(yàn)過(guò)程連續(xù)觀測(cè)Ⅱ?qū)?lián)心電圖和心率變化。

1.4.3 取材及檢測(cè)指標(biāo) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取出每只大鼠的心臟，用冷生理鹽水沖洗血液，稱取0.5g心肌組織，加入5mL生理鹽水，制成10%的心肌組織勻漿液，按照ATP酶試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定組織Na+、K+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、Ca2+-ATP酶［2］。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件中Independent T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1 對(duì)缺血再灌注心律失常大鼠模型心電圖的影響 與假手術(shù)組相比，模型組在缺血及再灌注的狀態(tài)下，其P-R間期和QRS時(shí)限明顯縮短，ST段顯著抬高（P＜0．01或P＜0.001），提示造模成功。與模型組相比，高、中劑量及陽(yáng)性藥有明顯穩(wěn)定P-R間期和QRS時(shí)限、降低ST段的作用，尤其在缺血再灌注后作用更顯著。低劑量組雖有此趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見(jiàn)表1、表2。

表1 黃龍通絡(luò)膠囊對(duì)結(jié)扎后缺血大鼠心電圖的影響（x±s）

表2 黃龍通絡(luò)膠囊對(duì)缺血再灌注大鼠心電圖的影響（x±s）

2．2 對(duì)心律失常大鼠模型ATP酶的影響 模型組的ATP酶明顯降低（P＜0．01或P＜0.001）。而中藥各劑量組及陽(yáng)性藥組ATP酶顯著升高（P＜0．001），各劑量組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見(jiàn)表3。

表3 黃龍通絡(luò)膠囊對(duì)模型大鼠ATP酶的影響（x±s）

3 討 論

黃龍通絡(luò)膠囊由黃芪、雞血藤、當(dāng)歸、川芎等十二味藥材精制而成，具有益氣養(yǎng)血、祛風(fēng)痰活血絡(luò)功效。本實(shí)驗(yàn)采用結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈前降支引起心肌缺血再灌注所致心律失常模型，進(jìn)一步探討黃龍通絡(luò)膠囊的抗心律失常作用機(jī)制。

有研究提示［3］，心肌細(xì)胞的活動(dòng)幾乎全依賴于有氧代謝，即主要由ATP供細(xì)胞生存及做功所需能量，而ATPase的活性在維持心肌細(xì)胞，及鈉、鈣、鎂的穩(wěn)定狀態(tài)中也起著重要的作用。心肌缺血缺氧時(shí)，線粒體中鈉、鈣、鎂的含量出現(xiàn)不同程度的改變。Mg2+含量的減少以及Na+、Ca2+含量增多均可引起能量代謝障礙，從而使Ca2+-Mg2+-ATPase活性下降；心肌細(xì)胞膜Ca2+-Mg2+-ATPase是將鈣離子主動(dòng)泵出細(xì)胞外的主要途徑，其活力下降將會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)高鈣。同時(shí)，由于膜Na+-K+-ATPase活力下降可致胞內(nèi)高Na+，從而增加Na+-Ca2+交換使胞內(nèi)鈣濃度再次升高。另外，心肌缺血后一旦再灌注，開(kāi)始時(shí)由于兒茶酚胺活性增加，Ca2+內(nèi)流進(jìn)一步增加，心肌細(xì)胞內(nèi)鈣超負(fù)荷觸發(fā)了心律失常。由此可見(jiàn)，當(dāng)缺血缺氧-再灌注心律失常時(shí)，心肌細(xì)胞內(nèi)能量代謝障礙，主要表現(xiàn)為胞內(nèi)和線粒體內(nèi)Ca2+大量堆積、線粒體膜ATPase活性顯著降低。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈前降支，引起心肌缺血再灌注所致心律失常模型，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析證實(shí)該模型科學(xué)、穩(wěn)定可靠。通過(guò)本試驗(yàn)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該膠囊劑能明顯穩(wěn)定P-R和QRS間期，降低抬高的ST段，說(shuō)明該膠囊劑有降低心肌損傷程度的作用；同時(shí)該膠囊劑還能顯著提高線粒體膜Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase的活性。據(jù)推測(cè)黃龍通絡(luò)膠囊可能就是通過(guò)提高ATPase的活性，而穩(wěn)定缺血損傷心肌細(xì)胞膜，減輕線粒體內(nèi)Ca2+堆積，改善心肌缺血程度等作用，以發(fā)揮其抗心律失常的顯著作用。

［1］ 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：885.

［2］ 殷惠軍，羅蘭，蔣躍絨，等.地精子皂甙抗缺血再灌性心律失常的作用機(jī)制研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2005，3（1）：39-41.

［3］ 秦緒光，趙煥宗，王大通，等.缺血再灌注性心律失常電生理機(jī)制及硫氮唑酮對(duì)其作用機(jī)理的研究［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊，2003，1（5）：54-57.