高效液相色譜法測(cè)定定喘止咳膠囊中鹽酸麻黃堿含量

魏 萍，張亞鋒，王苑桃

(陜西省西安市食品藥品檢驗(yàn)所，陜西 西安 710054)

定喘止咳膠囊是由麻黃、杏仁等多味中藥制成的復(fù)方成藥，具有宣肺平喘、理氣止咳的功能，用于風(fēng)寒喘咳、胸腹脹滿，亦可用于支氣管哮喘、支氣管炎。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用薄層掃描法測(cè)定方中麻黃堿的含量，但該方法精度較差，誤差較大。筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-4]，采用高效液相色譜法測(cè)定定喘止咳膠囊中的鹽酸麻黃堿含量，專屬性強(qiáng)，且方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、可靠?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津LC-10AVP型高效液相色譜儀，SPD-10Avp可見紫外檢測(cè)器，N2000色譜工作站;KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。鹽酸麻黃堿對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為1241-200102);定喘止咳膠囊(陜西方舟制藥有限公司，批號(hào)為100501，100701，101001，規(guī)格為每粒裝0.4 g);乙腈為色譜純，水為重蒸餾去離子水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:瑞典 Kromasil C18柱(250 mm×4 mm，5μm);流動(dòng)相:0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液(含0.2%三乙胺，用磷酸調(diào)pH至2.7)-乙腈(96∶4);流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫;檢測(cè)波長(zhǎng):207 nm;進(jìn)樣量:10μL。理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿計(jì)應(yīng)不低于3 500。在此條件下，鹽酸麻黃堿與其他成分達(dá)到良好分離，陰性對(duì)照無(wú)干擾(圖1)。

2.2 溶液制備

精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品8.05 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品貯備液(每1 mL中含鹽酸麻黃堿0.322 mg);精密吸取貯備液1 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液(每1 mL含0.032 2 mg)。取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加堿性甲醇(5 mL濃氨加入100 mL甲醇)溶液30 mL，浸泡30 min，超聲(功率250 kW，頻率40 Hz)處理15 min，離心，取上清液，藥渣按上述方法重復(fù)操作3次，合并上清液，低溫蒸干(50℃以下)，殘?jiān)语柡吐然c溶液30 mL溶解，用濃氨試液調(diào)pH至9，用乙醚提取5次，每次30 mL，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状既芙猓?5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取2 mL至10 mL量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，濾過，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

干擾性試驗(yàn):按處方比例和工藝制備陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。按2.1項(xiàng)下色譜條件，分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各 10μL，注入高效液相色譜儀，結(jié)果見圖1。供試品溶液色譜中，鹽酸麻黃堿與其他色譜峰分離較好，陰性對(duì)照品溶液色譜在鹽酸麻黃堿的保留時(shí)間范圍內(nèi)無(wú)干擾峰出現(xiàn)，表明處方中其他藥味對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

線性關(guān)系考察:取鹽酸麻黃堿對(duì)照品貯備液適量，分別配制成質(zhì)量濃度為0.007 728，0.012 88，0.025 76，0.038 64，0.051 52，0.077 28 g/L 的對(duì)照品溶液，各吸取10μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件，注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)、對(duì)照品進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為 Y=1 999 298.4X-550.9，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿質(zhì)量濃度在0.007728～0.07728g/L范圍內(nèi)與峰面積值有良好的線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果鹽酸麻黃堿峰面積的 RSD為0.43%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取配制好的同一供試品溶液，分別于0，1，2，3，4，6，8 h時(shí)依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果的 RSD為0.84%(n=7)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品(批號(hào)為100501)，分別依法制備5份供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件依法測(cè)定含量。結(jié)果鹽酸麻黃堿含量的 RSD為1.43%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取質(zhì)量濃度為0.398 g/L的鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液 3，3，4，4，5，5 mL，分別置具塞錐形角瓶中，低溫?fù)]干溶劑，再分別加入已知鹽酸麻黃堿含量的樣品(批號(hào)為100501)約1.5 g，按供試品溶液制備待測(cè)溶液，依法注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 鹽酸麻黃堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

依法分別測(cè)定制劑中鹽酸麻黃堿的含量，結(jié)果批號(hào)為100501，100701，101001的樣品中每粒含鹽酸麻黃堿分別為0.223，0.265，0.242 mg。

3 討論

取鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，加甲醇配制成一定質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，在190～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，最大吸收峰在207.0 nm波長(zhǎng)處，故確定檢測(cè)波長(zhǎng)為207 nm。

曾對(duì)多種提取方法及超聲時(shí)間進(jìn)行了考察，在流動(dòng)相上還比較了甲醇-水(50∶50)、乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫鉀(10∶90)等，結(jié)果以文中的流動(dòng)相較好。從色譜圖看，本品色譜峰較少，方法學(xué)考察結(jié)果表明，所建立的方法操作較簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性好，可作為定喘止咳膠囊的含量測(cè)定方法。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:396.

[2]王瑞明，張 玲，倪 艷，等.HPLC測(cè)定蘇杏膠囊中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量[J].中成藥，2005，27(6):651-653.

[3]周 穎，劉哨凡，霍曉梅.高效液相色譜法測(cè)定小青龍合劑中鹽酸麻黃堿含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2007，16(20):37-38.

[4]單秀明，王友蘭，吳愛英.高效液相色譜法測(cè)定鼻竇炎糖漿中鹽酸麻黃堿含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2007，16(14):44-45.