水團花化學成分的研究△

郭躍偉，黃偉暉，陳雯婷，劉海利

（中國科學院上海藥物研究所國家新藥研究重點實驗室，上海 201203）

水團花Adinapilulifera是茜草科（Rubiaceae）水團花屬植物，分布在福建、江西、湖南、浙江、廣西和廣東等地，它的根部可供藥用，有清熱利濕、消瘀定痛、止血生肌的功效[1]。我國學者曾對該植物化學成分進行研究，從中分離得到生物堿、色原酮、雞納酸及其糖脂等化學成分[2-3]。為了進一步尋找該植物的生物活性成分，闡明其藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，課題組對采自廣東的水團花根部進行了系統(tǒng)的化學成分研究。從水團花根部位分得12個化合物，經(jīng)波譜分析和化學方法分別鑒定為quinovic acid（1），quinovic acid 3-β-D-glucopyranoside（2），quinovic acid 3-β-D-glucopyranoside（28→1）-β-D-glucopyranoside（3），quinovic acid 3-β-D-glucopyranosyl-（1→ 3）-rhamnopyranoside（4），蘆薈大黃素（5），sweroside（6），loganin（7），noreugenin（8），undulatoside B（9），5，7-dihydroxy-2-methyl-chromone 7-O-β-D-apiofuranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranoside（10），β-谷甾醇（11）和胡蘿卜苷（12）（見圖1）。其中，化合物4、5、6、11和12為首次從水團花植物中分離得到。本文報道這些化合物的提取分離和結(jié)構(gòu)鑒定工作。

1 儀器和材料

Bruker-DRX 400型核磁共振儀，以TMS為內(nèi)標；Finnigan-MAT-95質(zhì)譜儀。柱層析和薄層層析硅膠（青島海洋化工廠），其余試劑均為分析純。實驗材料采自廣東省肇周鼎湖山，由中國科學院上海藥物研究所沈金貴教授鑒定為茜草科水團花屬水團花Adinapilulifera的根。

2 提取分離

將1 kg水團花根粗粉用95%的乙醇浸提，超聲3次，過濾，合并濾液后減壓濃縮，混懸于水中，分別用乙酸乙酯和正丁醇萃取，得乙酸乙酯萃取部位4 g，正丁醇萃取部位50 g。正丁醇萃取部位（50 g）經(jīng)100～200目硅膠柱層析，以三氯甲烷-甲醇（95∶5→90∶10→80∶20→70∶30→0∶100）梯度洗脫，每個梯度3000 mL，每個流分收集約1000 mL，共收集18份，經(jīng) TLC檢查，合并第1～3份，4～5份。

正丁醇部位第1～3份（2.1 g）經(jīng)200～300目硅膠柱層析，以石油醚 -丙酮（95∶5→90∶10→85∶15→75∶25→50∶50）梯度洗脫，每個梯度 300 mL，每個流分收集約100 mL，共收集16份，其中第4-5份析出白色結(jié)晶為化合物11（15 mg），第10～13份析出橙黃色結(jié)晶為化合物8（25 mg），第14份析出白色粉末狀晶體為化合物1（11 mg）。

圖1 化合物1～10的結(jié)構(gòu)式

正丁醇部位第4～5份（1.5 g）經(jīng)200～300目硅膠柱層析，以三氯甲烷 -甲醇 -水（9∶1∶0.1→8.5∶1.5∶0.1）梯度洗脫，每個梯度500 mL，每個流分收集約100 mL，共收集10份，其中第2～3份再經(jīng)硅膠柱層析以三氯甲烷-甲醇-水（9.5∶0.5∶0.05→9∶1∶0.1）梯度洗脫，經(jīng)TLC檢查后合并相同流分，分得化合物12（22 mg）和化合物2（28 mg）；第4份再經(jīng)200～300目硅膠柱層析，以正丁醇-三氯甲烷-醋酸 -水（6∶2∶0.3∶0.3）洗脫后經(jīng) RP-18反相硅膠柱層析，以50%→70%甲醇／水純化，分得化合物4（12 mg）；第5份經(jīng) Sephadex LH-20凝膠柱層析，以甲醇洗脫，每流分收集20 mL，經(jīng)TLC檢查，合并第4～7份再上硅膠柱（200～300目），以正丁醇 -三氯甲烷 -醋酸 -水（6∶2∶0.5∶0.5）洗脫后，合并有紫外吸收部分，用反相硅膠柱純化，分得化合物7（12 mg）。

正丁醇部位第6份（105 mg）經(jīng)200～300目硅膠柱柱層析，以三氯甲烷-甲醇-水（9.5∶0.5∶0.05→9∶1∶0.1→8.5∶1.5∶0.1）梯度洗脫，每個梯度200 mL，每個流分收集約50 mL，共收集12份，經(jīng)TLC檢識，合并為6份。第1份放置若干天有橙紅色針狀析出，為化合物5（8 mg）；第4份再上硅膠柱（200-300目），以正丁醇-三氯甲烷-醋酸-水（6∶1.5∶0.5∶0.5）洗脫后，合并有紫外吸收部分，得化合物 6（26 mg）。

正丁醇部位第8份（1.5 g）經(jīng)G-60型硅膠柱層析，經(jīng)三氯甲烷 -甲醇 -水（8∶2∶0.1）洗脫，每個流分收集約50 mL。經(jīng)TLC檢查，合并其中第2～4份再經(jīng)硅膠柱（200～300目），以三氯甲烷 -甲醇 -水（7.5∶2.5∶0.1）洗脫，經(jīng) TLC檢查后合并相同成分，合并為前后2份，分別經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層析純化，前一份得化合物3（15 mg），后一份得化合物 9（10 mg）。

正丁醇部位第11份（50 mg）經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層析以甲醇洗脫，每流分收集20 mL，經(jīng)TLC檢查，合并第3～6份，再反復(fù)經(jīng)硅膠柱（200-300目）層析，得化合物10（32 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1

白色粉末。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ6.01（1H，brs，H-12），3.25（1H，dd，J＝0.2 Hz，H-3），2.80（1H，m，H-18），1.21（3H，d，J＝6.2 Hz，19-CH3），1.16（3H，s），1.06（3H，s），0.99（3H，s），0.95（3H，s），0.81（3H，d，J＝6.5 Hz，20-CH3）；13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ39.0（t，C-1），26.1（t，C-2），77.7（d，C-3），39.0（s，C-4），55.5（d，C-5），18.6（t，C-6），36.8（t，C-7），39.0（s，C-8），47.0（d，C-9），37.1（s，C-10），23.1（t，C-11），128.7（d，C-12），133.8（s，C-13），56.5（s，C-14），27.9（t，C-15），25.2（t，C-16），48.4（s，C-17），54.7（d，C-18），37.4（d，C-19），39.8（d，C-20），30.2（t，C-21），36.8（t，C-22），28.6（q，C-23），16.3（q，C-24），16.3（q，C-25），18.0（q，C-26），177.7（s，C-27），179.8（s，C-28），18.6（q，C-29），21.0（q，C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻[4]報道的化合物 quinovic acid基本一致。

3.2 化合物2

白色粉末。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ5.60（1H，brs，H-12），4.30（1H，d，J＝8.1 Hz，H-1′），3.85（1H，dd，J＝11.9，2.2 Hz），3.65（1H，dd，J＝11.9，5.1 Hz），3.10～3.40（4H，overlap），1.02（3H，s），0.98（3H，s），0.91（3H，d），0.90（3H，d），0.89（3H，s），0.84（3H，s）。以上數(shù)據(jù)與文獻[5]報道的 quinovic acid 3-β-D-glucopyranoside基本一致。

3.3 化合物3

白色針狀。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ5.61（1H，brs，H-12），5.38（1H，d，J＝8.0 Hz，H-1″），4.30（1H，d，J＝7.7 Hz，H-1′），3.81（2H，m），3.66（2H，m），3.10～3.45（8H，overlap），1.01（3H，s），0.97（3H，s），0.92（3H，d），0.91（3H，d），0.88（3H，s），0.83（3H，s）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ40.5（t，C-1），27.6（t，C-2），91.2（d，C-3），40.6（s，C-4），55.8（d，C-5），19.7（t，C-6），38.3（t，C-7），40.7（s，C-8），48.5（d，C-9），38.3（s，C-10），24.4（t，C-11），131.4（d，C-12），133.7（s，C-13），57.8（s，C-14），26.3（t，C-15），26.9（t，C-16），48.9（s，C-17），57.4（d，C-18），38.7（d，C-19），41.3（d，C-20），31.6（t，C-21），37.5（t，C-22），29.0（q，C-23），19.7（q，C-24），17.5（q，C-25），18.6（q，C-26），179.6（s，C-27），178.4（s，C-28），17.6（q，C-29），22.0（q，C-30），107.2（d，C-1′），75.7（d，C-2′），79.1（d，C-3′），72.1（d，C-4′），78.1（d，C-5′），63.3（t，C-6′），96.1（d，C-1″），74.4（d，C-2″），78.7（d，C-3″），71.7（d，C-4″），78.7（d，C-5″），63.0（t，C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻[6-7]報道的 quinovic acid 3-β-D-glucopyranoside（28→1）-β-D-glucopyranoside基本一致。

3.4 化合物4

白色粉末，ESI-MSm／z：793[M-H]-，分子式為 C42H66O14。1H-NMR（CD3OD，400 MHz） δ4.51（1H，brs，H-1′），4.29（1H，d.J＝6.9Hz，H-1″），3.68（1H，dd，J＝6.5，6.2 Hz），3.55（1H，m），3.00～3.40（8H，overlap），1.15（3H，d），1.05（3H，d），0.80（3H，s），0.75（3H，d），0.72（3H，s），0.72（3H，s），0.61（3H，s）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ40.3（t，C-1），27.0（t，C-2），90.8（d，C-3），40.5（s，C-4），57.1（d，C-5），19.9（t，C-6），38.4（t，C-7），38.8（s，C-8），48.5（d，C-9），38.4（s，C-10），24.3（t，C-11），131.0（d，C-12），134.4（s，C-13），57.8（s，C-14），24.3（t，C-15），26.2（t，C-16），49.5（s，C-17），56.0（d，C-18），38.8（d，C-19），40.9（d，C-20），31.7（t，C-21），38.4（t，C-22），29.2（q，C-23），18.4（q，C-24），17.6（q，C-25），19.6（q，C-26），179.6（s，C-27），180.2（s，C-28），18.7（q，C-29），22.0（q，C-30），104.5（d，C-1′），72.7（d，C-2′），82.7（d，C-3′），73.5（d，C-4′），70.3（d，C-5′），17.4（t，C-6′），107.1（d，C-1″），75.8（d，C-2″），78.1（d，C-3″），71.6（d，C-4″），78.1（d，C-5″），67.4（t，C-6″）。以上理化常數(shù)和波譜數(shù)據(jù)與文獻[8-9]報道的基本一致，鑒定為quinovic acid 3-β-D-glucopyranosyl（1→3）-rhamnopyranoside。

3.5 化合物5

橙紅色針晶。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ8.16（1H，s，H-4），7.90（1H，d，J＝7.4 Hz，H-7），7.69（1H，s，H-2），7.61（1H，dd，J＝8.1，7.8 Hz，H-6），7.37（1H，d，J＝8.3 Hz，H-5），5.00（2H，s，3-CH2OH）；13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ163.1（s，C-1），117.9（d，C-2），155.0（s，C-3），121.3（d，C-4），119.8（d，C-5），137.3（d，C-6），124.6（d，C-7），162.5（s，C-8），181.8（s，C-9），192.7（s，C-10），116.4（s，C-1′），134.0（s，C-4′），134.2（s，C-5′），115.0（s，C-8′），63.2（t，3-CH2OH）。綜合以上波譜數(shù)據(jù)并與文獻[10]對照，確定化合物5為蘆薈大黃素。

3.6 化合物6

透明液狀。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ7.93（1H，s，H-3），5.78（1H，s，H-1），5.32（1H，d，J＝7.4 Hz，H-1′），5.32（1H，m，H-8），5.00（2H，m，H-10），4.10～4.60（5H，overlap），4.00（2H，m，H-7），3.60～3.90（1H，overlap），3.00（1H，m.H-5），2.60（1H，m，H-9），1.21～1.70（2H，m，H-6）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ98.4（d，C-1），154.5（d，C-2），106.5（s，C-3），28.9（d，C-4），26.4（t，C-5），70.2（t，C-6），133.8（d，C-7），44.3（d，C-8），121.3（t，C-9），169.0（s，C-10），100.1（d，C-1′），75.2（d，C-2′），78.3（d，C-3′），72.0（d，C-4′），78.8（d，C-5′），63.1（t，C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道的 sweroside基本一致。

3.7 化合物7

透明液狀，ESI-MSm／z：779（2M-H）-，分子式為 C17H26O10。1H-NMR（CD3OD，400 MHz） δ7.39（1H，s，H-3），5.21（1H，d，J＝4.4 Hz，H-1），4.61（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），4.02（1H，m），3.88（1H，dd），3.64（3H，s，-OCH3），3.61（1H，m，H-8），3.10～3.55（3H，overlap），2.21（1H，ddd，J＝7.9，1.5 Hz，H-5），2.01（2H，m，H-9），1.85（1H，m，H-6），1.60（1H，m，H-7），1.09（3H，d，J＝6.9 Hz，7-CH3）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ98.2（d，C-1），152.6（d，C-3），114.5（s，C-4），32.6（d，C-5），42.7（d，C-6），47.0（d，C-7），75.5（d，C-8），43.2（t，C-9），13.9（q，C-10），170.0（s，C-11），52.1（q，-OCH3），100.5（d，C-1′），75.2（d，C-2′），78.5（d，C-3′），72.0（d，C-4′），78.8（d，C-5′），63.2（t，C-6′）。綜合以上理化常數(shù)和波譜數(shù)據(jù)，并與文獻[12]對照，確定化合物7為loganin。

3.8 化合物8

淡黃色針晶。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ6.68（1H，d，J＝2.2 Hz，H-8），6.58（1H，d，J＝2.2 Hz，H-6），6.07（1H，s，H-3），2.06（3H，s，2-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻[5]報道的noreugenin基本一致。

3.9 化合物9

無定型白色粉末，[α]20D＝-67.8°（c0.20，吡啶），ESI-MSm／z：485[M-H]-，分子式為 C21H26O13。1H-NMR（C5D5N，400 MHz） δ7.00（1H，d，J＝2.2 Hz，H-8），6.78（1H，d，J＝2.2 Hz，H-6），6.04（1H，s，H-3），5.60（1H，d，J＝7.6 Hz，H-1′），4.91（1H，d，J＝7.1 Hz，H-1″），4.76（1H，d，J＝9.9 Hz，H-6′b），4.36（1H，m，H-3′），4.34（1H，d，J＝9.9 Hz，H-6′a），4.33（1H，m，H-5′），4.32（1H，d，J＝10.2 Hz，H-5″b），4.25（1H，m，H-2′），4.20（1H，m，H-4″），4.18（1H，m，H-4′），4.10（1H，m，H-3″），4.07（1H，m，H-2″），3.61（1H，d，J＝0.9 Hz，H-5″a），2.10（3H，s，2-CH3）；13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ20.2（q，2-CH3），168.0（s，C-2），108.9（d，C-3），182.9（s，C-4），162.5（s，C-5），100.8（d，C-6），164.0（s，C-7），95.5（d，C-8），158.4（s，C-9），106.4（s，C-10），102.0（d，C-1′），74.7（d，C-2′），77.7（d，C-3′），71.5（d，C-4′），78.5（d，C-5′），70.3（t，C-6′），106.2（d，C-1″），75.0（d，C-2″），78.2（d，C-3″），71.1（d，C-4″），67.1（t，C-5″）。以上數(shù)據(jù)與文獻[12]對照，其理化常數(shù)和波譜數(shù)據(jù)與undulatoside B基本一致。

3.10 化合物10

淡黃色粉末， [α]20D＝-48.8°（c0.62，MeOH）。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ6.92（1H，d，J＝2.2 Hz，H-8），6.76（1H，d，J＝2.2 Hz，H-6），6.04（1H，s，H-3），5.68（1H，d，J＝2.4 Hz，H-1″），5.60（1H，d，J＝7.6 Hz，H-1′），4.75（1H，d，J＝2.2 Hz，H-2″），4.72（1H，d，J＝1.5 Hz，H-6′b），4.60（1H，d，J＝9.3 Hz，H-4″b），4.36（1H，d，J＝9.3 Hz，H-4″a），4.35（1H，m，H-3′），4.34（1H，m，H-5′），4.30（1H，m，H-2′），4.20（2H，s，H-5″），4.12（1H，d，J＝1.5 Hz，H-6′a），4.10（1H，m，H-4′），2.17（3H，s，2-CH3）；13C-NMR（C5D5N，100 MHz） δ20.0（q，2-CH3），168.0（s，C-2），108.9（d，C-3），182.8（s，C-4），162.5（s，C-5），100.7（d，C-6），164.0（s，C-7），95.4（d，C-8），158.4（s，C-9），106.3（s，C-10），102.0（d，C-1′），74.7（d，C-2′），78.6（d，C-3′），71.6（d，C-4′），77.5（d，C-5′），69.1（t，C-6′），111.3（d，C-1″），78.0（d，C-2″），80.5（s，C-3″），75.2（t，C-4″），65.8（t，C-5″）。以上理化常數(shù)和波譜數(shù)據(jù)與文獻[12-13]報道的 5，7-dihydroxy-2-methylchromone 7-O-β-D-apiofuranosyl-（1 → 6）-β-D-glucopyranoside基本一致。

3.11 化合物11

無色針晶。與標準品共薄層層析，Rf值一致；與對照品對照氫譜數(shù)據(jù)一致，故鑒定為β-谷甾醇。

3.12 化合物12

白色粉末。與標準品共薄層層析，Rf值一致；與標準品對照氫譜數(shù)據(jù)一致，故鑒定為胡蘿卜苷。