北蟲草規(guī)范化培殖技術(shù)要點

劉明輝，李洪波，孫紅霞，李福泉

（遼寧仙榆灣北冬蟲夏草（集團(tuán)）有限公司，遼寧 本溪 117000）

北蟲草Cordycepsmilitaris（L.）Link為子囊菌亞門麥角菌目麥角菌科蟲草屬，又名蛹蟲草、北蛹蟲草、蟲草花等。野生北蟲草菌株分布較廣，陜西、吉林、河北、遼寧、安徽，云南、湖北、廣東、廣西、四川、貴州、福建均有分布，多分布于低海拔地區(qū)[1-2]。主要含有蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖、SOD、蛋白質(zhì)、10余種維生素、20余種礦質(zhì)元素等成分[3-4]，具有補(bǔ)肺益腎功能。

北蟲草野生菌株寄主廣泛[5]，春夏至夏秋季節(jié)，半埋于林地或腐枝落葉層下的昆蟲蛹上，長出子座，子座單生或叢生，一般不分枝，高4～7 cm，單個子座粗3～5 mm。人工栽培一般高8～10 cm，叢生性強(qiáng)。

1 場地及準(zhǔn)備工作

1.1 場地的選擇

北蟲草培殖場地應(yīng)選在遠(yuǎn)離城市、重工業(yè)區(qū)、礦山、畜牧廠等可能造成雜菌污染的地方。要選離優(yōu)質(zhì)水源較近、交通便利的地方。

1.2 場區(qū)功能化分

場區(qū)大體上可分為生活區(qū)和生產(chǎn)區(qū)。生活區(qū)包括職工宿舍、食堂等。生產(chǎn)區(qū)包括實驗室、洗刷室、裝料室、滅菌室、接種室、標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)室、庫房（原料庫與成品庫分開）、鍋爐房等。

1.3 設(shè)備

1.3.1 生產(chǎn)設(shè)備 生產(chǎn)設(shè)備包括鍋爐、滅菌器（柜）、接種機(jī)、培養(yǎng)室光源（日光燈）、洗瓶機(jī)、烘干機(jī)、培養(yǎng)器皿。

1.3.2 實驗室（制種室）設(shè)備 培養(yǎng)箱、搖瓶柜、超凈工作臺、冰箱等。

2 北蟲草規(guī)范化培殖工藝流程

3 菌種

菌種是北蟲草規(guī)范化生產(chǎn)中起決定性作用的因素。要想獲得理想的產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)量，必須把好菌種關(guān)。對于規(guī)模較小或沒有自主生產(chǎn)菌種能力的企業(yè)（個人）應(yīng)當(dāng)選擇有能力、有經(jīng)驗、有資質(zhì)的菌種生產(chǎn)單位購買菌種來生產(chǎn)。

3.1 菌種制備

3.1.1 母種 優(yōu)良菌種可以通過孢子分離法和組織分離法獲得。

3.1.1.1 孢子分離法 選取新鮮成熟的蛹蟲草子座中間一小段，懸掛在無菌的錐形瓶內(nèi)，待子囊孢子或次生孢子彈射后，蘸取少許孢子接入斜面培養(yǎng)基上，置24℃左右遮光條件下培養(yǎng)[6]。

3.1.1.2 組織分離法 選取新鮮、健壯的蟲草子座中間一段，經(jīng)酒精進(jìn)行表面消毒后用手撕開，用接種針挑取斷面內(nèi)部白色組織一小塊，接于斜面培養(yǎng)。凡分離獲得的菌絲均須進(jìn)行先端菌絲提純培養(yǎng)，并反復(fù)數(shù)次，才能獲得純菌種。培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200 g（煮汁），葡萄糖20 g，瓊脂20 g，磷酸二氫鉀1 g，硫酸鎂 1 g，蛋白胨 0.5 g，水 1000 mL[7]。

3.1.2 生產(chǎn)種的制備

3.1.2.1 培養(yǎng)基配方 馬鈴薯200 g（煮汁），葡萄糖20 g，磷酸二氫鉀1 g，硫酸鎂1 g，蛋白胨0.5 g，水1000 mL。

3.1.2.2 培養(yǎng)基制作過程 將馬鈴薯200 g去皮洗凈，切成1cm大小的小塊，于1000 mL開水中煮10～15 min，8層紗布過濾，按配方加入其他成分即成液體培養(yǎng)基。

3.1.2.3 分裝、滅菌 將上述培養(yǎng)基按每瓶100 mL裝入250 mL三角瓶中，加蓋棉塞，外用牛皮紙包好。將三角瓶放入高壓鍋121℃滅菌30 min。

3.1.2.4 接種及搖瓶培養(yǎng) 取出三角瓶，晾至室溫。在超凈工作臺上以無菌操作將試管種接入三角瓶。將三角瓶裝入搖瓶柜，于19.5℃、120 r·d-1培養(yǎng)5～7 d。檢查無雜菌污染可馬上使用或收入冰箱4℃保存。保存時間不應(yīng)超過10 d。

4 培育過程管理要點

4.1 滅菌

滅菌分為高壓滅菌和常壓滅菌。二者各有優(yōu)勢，生產(chǎn)上可根據(jù)實際情況自由選擇。

4.1.1 高壓滅菌 高壓滅菌需要配備蒸汽鍋爐及高壓滅菌器，滅菌時將培養(yǎng)基放入高壓滅菌器，121℃維持40 min。采用高壓滅菌優(yōu)點是時間短，能量消耗少，滅菌效果好。

4.1.2 常壓滅菌 將培養(yǎng)基放入高溫滅菌器（或滅菌灶），鍋爐將水燒沸，維持約6 h。采用常壓滅菌安全性高，但時間長且滅菌效果也不如高壓滅菌。

4.2 接種

將滅菌后的培養(yǎng)基冷卻后送往接種室，在無菌條件下接入事先準(zhǔn)備好的菌種，接種量控制在10%～20%。

4.3 避光培養(yǎng)（發(fā)菌）

接種后的培養(yǎng)基送入避光室，溫度控制在16～18℃恒溫培養(yǎng)，濕度控制在65%～70%。發(fā)菌階段要經(jīng)常進(jìn)行檢查，發(fā)現(xiàn)有雜菌的培養(yǎng)基隨時進(jìn)行處理，培養(yǎng)室內(nèi)不得留存污染培養(yǎng)基。經(jīng)過7～10 d培養(yǎng)基表面布滿菌絲，菌絲吃透培養(yǎng)基，將培養(yǎng)基移至培養(yǎng)室進(jìn)行見光培養(yǎng)。

此外，也可在培養(yǎng)室布置窗簾等避光設(shè)施，在培養(yǎng)室避光發(fā)菌，發(fā)菌結(jié)束后拉開窗簾開始見光培養(yǎng)。

4.4 子實體培養(yǎng)

培養(yǎng)基長滿菌絲后，表面出現(xiàn)一定量的桔黃色突起時，進(jìn)入子實體培養(yǎng)階段。這時要進(jìn)行瓶內(nèi)通風(fēng)，方法是用特制的扎眼工具，將封口膜扎幾個直徑1～2 mm的孔。

培養(yǎng)室要具有良好的通風(fēng)條件，每天通風(fēng)1～2次，通風(fēng)與室外溫度協(xié)調(diào)好，根據(jù)外界氣溫所定，外界氣溫高時，早晚各通風(fēng)一次，時間略長些；外界氣溫低時，中午通風(fēng)次數(shù)略多些，時間略短一些。

4.4.1 溫度控制 在見光轉(zhuǎn)色階段，培養(yǎng)室溫度控制在19℃左右。轉(zhuǎn)色完成后，開始加大溫差，白天控制在22℃左右，夜晚控制在14～16℃。當(dāng)出現(xiàn)子實體后（高度在1 cm以上）保持培養(yǎng)室溫度為18～22℃。這樣有利于提高轉(zhuǎn)化率。

4.4.2 濕度控制 培養(yǎng)室的空氣相對濕度保持在80%～90%，即地面潮濕，四壁、窗臺不起灰塵，給人以空氣清新感覺即可。噴水最好安排在通風(fēng)時間進(jìn)行。

4.4.3 光照控制 子實體生長期間給予散射光，遠(yuǎn)離窗戶的地方每隔1 m要加1個40 W日光燈管。出草前每日24 h光照，出草后（高度在1 cm以上）每日10～12 h光照即可。

4.5 采摘、分級、烘干

當(dāng)子實體發(fā)育到10～12 cm時，子座末端不同程度膨大呈棒狀，顏色較深，即成熟，要及時采收。采收時要從培養(yǎng)基基部采集，采收的鮮品要根據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級。分級后的蟲草分別放在干凈的篩網(wǎng)上，在40℃的烘箱中緩慢烘干，烘至干而不易破碎為宜。烘干的蟲草為桔黃色或橘紅色，切勿日曬，日曬的蟲草會變淡黃色或黃白色，降低了商品質(zhì)量。

4.6 包裝

4.6.1 精包裝 將蟲草干品精細(xì)挑選選出優(yōu)質(zhì)蟲草。將挑選出的蟲草裝入塑料包裝袋后裝入包裝盒，并且貼標(biāo)、打碼。精包裝的蟲草子實體能夠提高蟲草的價格。對樹立企業(yè)品牌起到積極作用。

4.6.2 粗包裝 將分級的蟲草干品分別裝入塑料袋，并標(biāo)明等級。粗包裝要注意以下兩點：

防潮：要將粗包裝的蟲草干品放置于干燥通風(fēng)處，尤其夏季更要防止發(fā)生霉變。

避光：要將粗包裝的蟲草干品用兩層黑色塑料袋密封，放置于避光處。

4.7 入庫

將包裝后的蟲草產(chǎn)品送至庫房入庫，放置于避光、干燥、通風(fēng)的貨架上。