分光光度法測(cè)定雞矢藤中總環(huán)烯醚萜苷的含量

王永昌，高克立，樊錦慧，李 娟

（甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院分析實(shí)驗(yàn)中心，甘肅 蘭州 730050）

分光光度法測(cè)定雞矢藤中總環(huán)烯醚萜苷的含量

王永昌，高克立，樊錦慧，李 娟

（甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院分析實(shí)驗(yàn)中心，甘肅 蘭州 730050）

目的 建立雞矢藤藥材中總環(huán)烯醚萜苷的含量測(cè)定方法。方法 采用分光光度法，以雞矢藤苷為對(duì)照品，經(jīng)香草醛-乙酸顯色，紫外-可見(jiàn)光全波長(zhǎng)掃描在620 nm處有最大吸收，并在此處測(cè)定其含量。結(jié)果 雞矢藤苷及其藥材在620 nm處有最大吸收，測(cè)得含量穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，雞矢藤苷在10．3～51．5μg/m l范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2=0．999 5）。結(jié)論 建立雞矢藤中總環(huán)烯醚萜苷的含量測(cè)定方法，該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠，可作為雞矢藤提取、分離、純化過(guò)程的質(zhì)量控制方法。

分光光度法；雞矢藤；總環(huán)烯醚萜苷；含量測(cè)定

雞矢藤為茜草科雞矢藤屬多年生草質(zhì)藤本植物，雞矢藤[Paederia scandens（Lour．）Merr．]或毛雞矢藤[P．scandens（lour．）merr．var．tomentosa（Bl．）H．-M．]全草或根是我國(guó)傳統(tǒng)的中草藥，具有祛風(fēng)活血，止痛解毒，消食導(dǎo)滯，除濕消腫的功效，在我國(guó)分布廣泛。雞矢藤含有多種化學(xué)成分，包括揮發(fā)油、環(huán)烯醚萜苷類、多種烷醇、齊墩果酸等油脂及甾醇類化合物[1]。現(xiàn)代研究證明，雞矢藤提取物具有良好的保肝、鎮(zhèn)痛、抗驚、解毒、消炎、抗病毒和抗腫瘤等作用[2～7]。研究表明，雞矢藤總環(huán)烯醚萜苷是一類有效成分[8～9]。目前，對(duì)雞矢藤中總環(huán)烯醚萜苷的質(zhì)量控制研究較少[10]。我們通過(guò)分光光度法建立了雞矢藤中總環(huán)烯醚萜苷含量的測(cè)定方法，此法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、易行，適于對(duì)雞矢藤中總環(huán)烯醚萜苷的含量進(jìn)行測(cè)定。

1 材料及儀器

1.1 材料

雞矢藤藥材采自甘肅隴南地區(qū)，標(biāo)本經(jīng)甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院石長(zhǎng)栓副研究員鑒定為茜草科雞矢藤屬植物雞矢藤的全草。

雞矢藤苷對(duì)照品由本研究室分離純化并鑒定結(jié)構(gòu)，采用HPLC歸一法測(cè)定其含量為98．60%。

薄層層析硅膠G（批號(hào)：040212，青島海洋化工有限公司生產(chǎn)）、層析用硅膠（100～140目，青島海洋化工有限公司生產(chǎn)）、D101 型大孔吸附樹(shù)脂[非極性，批號(hào)：04/05/12（1-2）]、活性炭（粒狀，批號(hào)：020226，天津市天達(dá)凈化材料精細(xì)化工廠生產(chǎn)）、冰醋酸、甲醇、乙酸乙酯、正丁醇及其他試劑均為市售AR級(jí)。

1.2 儀器與設(shè)備

AE260（萬(wàn)分之一）型電子分析天平（上海）、DHG-9030型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海）、SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵（鄭州）、KDM型調(diào)溫電熱套（山東）、B3200S-T型超聲波振蕩儀、BüCHI 461型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士）、UV-240型紫外-可見(jiàn)分光光度儀（日本島津）、Aligent-1100型高壓液相色譜儀（德國(guó)）、DLSB-5/10型低溫循環(huán)泵（鄭州）。

1.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取雞矢藤苷對(duì)照品10．0 mg置10 m l容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成1．03mg/m l的對(duì)照品溶液備用。

1.4 供試品溶液的制備

精密稱取在60℃干燥后粉碎的雞矢藤粗粉10．0g，用甲醇索氏提取2 h，過(guò)濾取濾液，定容至100 ml容量瓶中，搖勻，作為供試品溶液。

2 實(shí)驗(yàn)

2.1 顯色條件

精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和甲醇0．5m l于10 m l試管中，水浴蒸干，冷卻至室溫后，加入0．2 ml的5%香草醛冰醋酸溶液和0．8m l的高氯酸，經(jīng)60℃水浴加熱15 min，取出立即置冰水浴中3min[11]，用冰醋酸定容至刻度，搖勻，以甲醇管為空白，用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)于620 nm處測(cè)定吸光度。

2.2 吸收波長(zhǎng)的選擇

精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和甲醇 0．5 m l，按“2．1”項(xiàng)下顯色條件顯色，用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)于200～700 nm范圍掃描，結(jié)果對(duì)照品和供試品溶液在620 nm處具有相似最大吸收，故選擇620 nm為測(cè)定吸收峰。

2.3 線性關(guān)系

精 密 吸 取 對(duì) 照 品 溶 液 0．10、0．15、0．20、0．25、0．30、0．35、0．40、0．45、0．50 ml，水浴蒸干，按“2．1”項(xiàng)下顯色條件顯色，在620 nm 處測(cè)定吸光度值，分別為 0．091、0．186、0．287、0．372、0．293、0．557、0．638、0．742、0．843。以對(duì)照品溶液濃度（c）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果雞矢藤苷在10．3～51．5μg/ml范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，得回歸方程：A=0．018c-0．091 8，R2=0．999 5。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液1．0m l，用甲醇定容至10m l容量瓶中，搖勻。精密吸取 0．5ml，水浴蒸干，按“2．1”項(xiàng)下顯色條件顯色后1～2 h內(nèi)，每隔10min在620 nm處測(cè)定其吸光度，其吸光值分別為 0．047，0．047，0．047，0．047，0．048，0．047，0．047，0．048，0．047，0．047，0．046，0．046，平均值為 0．047，RSD=0．02%（n=12），表明在0～2 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液 0．5 m l，水浴蒸干，按“2．1”項(xiàng)下顯色條件顯色，顯色后 1 h 內(nèi)連續(xù)測(cè)定 6 次吸光度，RSD=0．02%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取雞矢藤粗粉 6 份，每份 10．0 g，按“2．2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液。以“2．1”項(xiàng)下方法顯色，測(cè)定結(jié)果平均含量為1．53%，RSD=2．33%（n=6），說(shuō)明該法重復(fù)性良好。

2.7 加標(biāo)回收試驗(yàn)

精密吸取“2．7”項(xiàng)各供試品溶液 5．0ml，分別精密加入對(duì)照品溶液 1．0m l，甲醇定容至 10．0ml，混勻，制成樣標(biāo)供試液。按“2．1”項(xiàng)下方法顯色，測(cè)定并計(jì)算回收率，具體見(jiàn)表1。

表1 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測(cè)定

精密稱取雞矢藤粗粉 6 份，每份 10．0 g，按“2．2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液。以“2．1”項(xiàng)下方法顯色，測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出甘肅產(chǎn)地雞矢藤中總環(huán)烯醚萜苷平均含量為1．50%。

3 討論

（1）雞矢藤中含有多種化學(xué)成分，包括揮發(fā)油、環(huán)烯醚萜苷類、多種烷醇、齊墩果酸等油脂及甾醇類化合物，僅對(duì)某一成分進(jìn)行含量測(cè)定很難全面評(píng)價(jià)其質(zhì)量的優(yōu)劣。曲銀鋒等[12]對(duì)雞矢藤注射液中的揮發(fā)油成分進(jìn)行分析及測(cè)定，孫素珍[10]利用超高壓液相色譜法測(cè)定了雞矢藤熊果苷含量[10]，我們認(rèn)為也應(yīng)該對(duì)作為雞矢藤抗炎鎮(zhèn)痛的有效部位之一的環(huán)烯醚萜苷類，進(jìn)行質(zhì)量控制，并以雞矢藤苷為對(duì)照品測(cè)定其總環(huán)烯醚萜苷較為合理。

（2）在試驗(yàn)過(guò)程中，曾選擇香草醛-冰醋酸法[13]，對(duì)二甲氨基苯甲醛-鹽酸法[14]，對(duì)二甲氨基苯甲醛-醋酸法[13]，用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)在400～700 nm范圍內(nèi)掃描，3種顯色方法均在620 nm處有最大吸收，香草醛-冰醋酸法中標(biāo)準(zhǔn)溶液顯天藍(lán)色，呈色較穩(wěn)定，含量測(cè)定在2 h內(nèi)較穩(wěn)定。而對(duì)二甲氨基苯甲醛-鹽酸法和對(duì)二甲氨基苯甲醛-醋酸法顯色不明顯，且不穩(wěn)定。故認(rèn)為選擇香草醛-冰醋酸法測(cè)定雞矢藤總環(huán)烯醚萜苷類成分較為理想。

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G424．31

A

1671-1246（2012）02-0096-02

甘肅省科技廳條件財(cái)務(wù)處項(xiàng)目（GKS022-B05-07）