抑癌基因PTEN和基質(zhì)金屬蛋白酶-2在腎癌的表達(dá)及意義

胡曉暉 陳洪波 朱圣亮 廖兆林 趙純雄

恩施州中心醫(yī)院泌尿外科，湖北恩施 445000

腎癌即腎細(xì)胞癌，是常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其發(fā)病率占全身惡性腫瘤的3%，僅次于膀胱癌居泌尿系腫瘤的第二位[1-2]。腎癌常起源于腎小管上皮細(xì)胞，常于50～70歲高發(fā)。PTEN基因是一種腫瘤抑制基因，在1997年被發(fā)現(xiàn)，具有脂質(zhì)磷酸酶和蛋白磷酸酶雙重活性，人類多種腫瘤細(xì)胞中伴有PTEN基因的突變或者缺失[3]，已知機(jī)制金屬蛋白酶-2（MMP-2）主要降解細(xì)胞外基質(zhì)（ECM），能夠?yàn)槟[瘤掃除物理屏障，本實(shí)驗(yàn)就是探討抑癌基因PTEN蛋白和MMP-2蛋白在腎癌中的表達(dá)情況以及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

所有手術(shù)標(biāo)本組織均取自2008年6月～2011年6月我院的住院患者，臨床病理資料完整，所有患者術(shù)前均未接受化療或放療，所有病例病理診斷明確。65例腎癌標(biāo)本均為透明細(xì)胞癌，其中，男 39例，女 26例，年齡 29～76歲，平均（56.9±5.31）歲；65 例正常腎臟組織來自非瘤（創(chuàng)傷、結(jié)石、炎癥以及活檢等）手術(shù)標(biāo)本，其中，男29例，女36例，年齡9～65歲，平均（39.0±8.21）歲。標(biāo)本所有標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。

1.2 試劑

兔抗人PTEN單克隆抗體、兔抗人MMP-2多克隆抗體均來自美國 SANTA CRUZ公司，SP9001試劑盒和DAB試劑盒均來自北京中杉生物工程公司。

1.3 結(jié)果判定

免疫組織化學(xué)染色采用鏈酶卵白素-生物素過氧化物酶法（SP法），染色步驟嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，用PBS代替一抗作陰性對照，細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中呈現(xiàn)棕黃色染色顆粒為陽性細(xì)胞。光顯色程度的判斷方法，顯色程度計(jì)分：無顯色定為0分；淺黃色定為1分；棕黃色定為2分；棕褐色定為3分。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)一采用總積分＞1，即為陽性表達(dá)作為統(tǒng)計(jì)分析的標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采用χ2比較，并對頻數(shù)資料做關(guān)聯(lián)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正常腎臟組織和腎癌中抑癌基因PTEN和MMP-2蛋白的表達(dá)

抑癌基因PTEN和MMP-2蛋白的表達(dá)情況如表1所示，PTEN主要定位于癌細(xì)胞的胞質(zhì)，呈棕黃色或棕褐色；MMP-2陽性表達(dá)也主要定位于胞質(zhì)。兩組進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

表1 正常腎臟組織和腎癌中PTEN和MMP-2蛋白的表達(dá)（例）

2.2 抑癌基因PTEN和MMP-2蛋白的表達(dá)與腎癌臨床因素的關(guān)系

抑癌基因PTEN和MMP-2蛋白的表達(dá)與腎癌臨床病因素的關(guān)系：抑癌基因PTEN和MMP-2蛋白的異常表達(dá)與有無包膜、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度和TNM分期有關(guān)（P<0.05）；與年齡、性別以及腫瘤的大小無關(guān)（P>0.05）。見表2。

表2 抑癌基因PTEN和MMP-2蛋白的表達(dá)與腎癌臨床因素的關(guān)系（例）

2.3 腎癌中抑癌基因PTEN和MMP-2蛋白表達(dá)的相關(guān)性

抑癌基因PTEN和MMP-2蛋白表達(dá)共陽性表達(dá)8例，共陰性表達(dá)10例。經(jīng)頻數(shù)相關(guān)分析：r=-0.332，P=0.007，二者呈負(fù)相關(guān)。見表3。

表3 腎癌中PTEN和MMP-2表達(dá)的相關(guān)性（例）

3 討論

國內(nèi)外研究表明，抑癌基因PTEN參與多種細(xì)胞間信號調(diào)節(jié)，能使某些磷脂或蛋白激酶相應(yīng)位點(diǎn)去磷酸化，調(diào)控細(xì)胞的黏附、遷移和分化等，并抑制細(xì)胞周期的運(yùn)行，介導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 已知在前列腺癌[4]、腦腫瘤[5]、膀胱癌[6]、黑色素瘤[7]以及神經(jīng)內(nèi)分泌瘤[8]等多種腫瘤中均為低表達(dá)。MMP-2蛋白可由腫瘤細(xì)胞和腫瘤周邊間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，幾乎能降解細(xì)胞外基質(zhì)的所有成分，在多種腫瘤組織中為高表達(dá)，如胃癌、喉癌等[9-10]。本研究與文獻(xiàn)報(bào)道一致。本研究結(jié)果顯示，MMP-2蛋白和抑癌基因PTEN蛋白的異常表達(dá)與有無包膜、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度和TNM分期有關(guān)，提示二者的異常表達(dá)可能與腎癌癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。 進(jìn)一步研究顯示，兩蛋白表達(dá)有相關(guān)，提示二者異常表達(dá)可能有相互協(xié)調(diào)作用，聯(lián)合檢測抑癌基因PTEN和MMP-2蛋白的表達(dá)可作為預(yù)測腎癌的轉(zhuǎn)移趨勢指標(biāo)。

綜上所述，筆者認(rèn)為抑癌基因PTEN蛋白的低表達(dá)和MMP-2蛋白在腎癌中高表達(dá)可能與腎癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移有密切的關(guān)系，聯(lián)合檢測二者的表達(dá)有助于深入的了解腎癌的發(fā)生發(fā)展，并為腎癌的診治提供依據(jù)；更深入研究抑癌基因PTEN蛋白的表達(dá)水平還有助于腫瘤的早期診斷，推動(dòng)腎癌的基因治療，為腎癌的臨床治療提供新思路。

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