微柱凝膠技術(shù)在新生兒交叉配血中的應(yīng)用

謝 雯

（湖南省婦幼保健院檢驗(yàn)科 湖南 長(zhǎng)沙 410008）

輸血前做交叉配血試驗(yàn)，以檢查受血者的紅細(xì)胞血型抗原及其抗體與供血者的紅細(xì)胞血型抗原及其抗體相互間的配合性，是確保輸血安全的重要手段之一。近年來(lái)，微柱凝膠技術(shù)由于操作簡(jiǎn)便，易于標(biāo)準(zhǔn)化廣泛應(yīng)用于血型鑒定、不規(guī)則抗體篩選、交叉配血等血型血清學(xué)試驗(yàn)。筆者回顧性分析了我院2010年6月～2011年10月496例新生兒交叉配血的結(jié)果，分析如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

2010年6月～2011年10月我院新生兒科EDTA-2K抗凝全血標(biāo)本496例。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器

戴安娜專用孵育器、戴安娜專用離心機(jī)、Baso血庫(kù)專用離心機(jī)。

1.2.2 試劑

抗人球蛋白檢測(cè)卡(DG Gel Coombs）由斑珀斯技貿(mào)有限公司提供。改良凝聚胺試劑盒由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供。

1.3 方法

1.3.1 鹽水法

嚴(yán)格按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[1]操作。

1.3.2 微柱凝膠法

用定量加樣器向抗人球蛋白檢測(cè)卡主側(cè)孔內(nèi)加入50μL 1%的獻(xiàn)血者紅細(xì)胞及25μL患兒血漿，次側(cè)孔內(nèi)加入50μL1%的患兒紅細(xì)胞及25μL獻(xiàn)血者血漿，同時(shí)向另一孔內(nèi)加入50μL1%的患兒紅細(xì)胞做直接抗人球蛋白試驗(yàn)。在37℃專用孵育器內(nèi)孵育15min后用戴安娜專用離心機(jī)1100r／min離心9min，觀察并記錄結(jié)果。離心后紅細(xì)胞沉積在微柱底層者為陰性，滯留在凝膠上方或中間者為陽(yáng)性。

1.3.3 凝聚胺法 按試劑盒說(shuō)明書操作。

1.3.4 微柱凝膠法交叉配血陽(yáng)性標(biāo)本處理

凡主、次側(cè)陽(yáng)性標(biāo)本均用凝聚胺法復(fù)檢。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

計(jì)數(shù)資料用例數(shù)描述，構(gòu)成比的比較用χ2檢驗(yàn)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

496例新生兒血液標(biāo)本與ABO及RH(D)同型供血者血液采用微柱凝膠法交叉配血，排除技術(shù)失誤和標(biāo)本纖維蛋白引起的假陽(yáng)性后檢出交叉配血不合32例，其中主側(cè)不合5例，次側(cè)不合25例，主次側(cè)均不合2例，直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性22例。微柱凝膠法與鹽水法交叉配血結(jié)果比較，差異有顯著性(P＜0.05)，見(jiàn)表1。 32例微柱凝膠法交叉配血不合標(biāo)本用凝聚胺法復(fù)檢，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 496例新生兒交叉配血結(jié)果比較

表2 32例交叉配血不合結(jié)果

3 討論

輸血是臨床醫(yī)療工作中非常重要的治療措施，同樣也是搶救和治療新生兒的有效手段。新生兒，尤其是早產(chǎn)兒的神經(jīng)、呼吸、循環(huán)、免疫系統(tǒng)發(fā)育尚不成熟，造血系統(tǒng)更是因胎齡、出生體重和日齡不同而變化，造成新生兒輸血治療中不確定因素增多[2]，安全、合理、有效輸血對(duì)新生兒來(lái)說(shuō)尤為重要。

用于交叉配血的方法要求能檢出所有的有臨床意義的抗體，才能達(dá)到安全輸血的目的。目前臨床常用的交叉配血方法主要有鹽水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法。新生兒可由于母嬰血型不合的妊娠經(jīng)胎盤獲得母體內(nèi)的IgG抗體，而鹽水法只能檢出完全抗體(IgM抗體），對(duì)免疫性抗體(主要是IgG抗體）不易檢出，易造成漏檢。凝聚胺法與傳統(tǒng)的抗人球蛋白法可以同時(shí)檢出IgM和IgG抗體，各有優(yōu)點(diǎn)，但也有一些不足之處。凝聚胺法快速簡(jiǎn)便，但因其存在非特異性因素，而且觀察從有凝集到無(wú)凝集的過(guò)程，人為因素的影響較大，振搖力度和解聚時(shí)間需嚴(yán)格掌握，對(duì)操作者技術(shù)要求較高，且不易標(biāo)準(zhǔn)化。傳統(tǒng)的抗人球蛋白法雖然是最準(zhǔn)確、最可靠的方法，但因操作繁瑣、反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)等缺點(diǎn)限制了其在臨床的應(yīng)用。微柱凝膠法交叉配血是基于抗原抗體特異性反應(yīng)、抗人球蛋白試驗(yàn)、凝膠過(guò)濾及離心技術(shù)的一種交叉配血方法，它克服了傳統(tǒng)的抗人球蛋白法需要反復(fù)洗滌的缺點(diǎn)[3-4]，且標(biāo)本用量少(每孔僅需血漿25μL），操作簡(jiǎn)便，結(jié)果清晰易判，易于標(biāo)準(zhǔn)化，對(duì)于新生兒弱抗原、弱抗體的檢出敏感性高，尤其適用于新生兒交叉配血試驗(yàn)。

本組研究結(jié)果顯示，32例微柱凝膠法交叉配血不合者鹽水法僅檢出3例，兩者差異有顯著性。用凝聚胺法復(fù)檢，檢出主側(cè)不合4例，次側(cè)不合6例，主次側(cè)均不合2例。后經(jīng)患兒血漿不規(guī)則抗體篩選試驗(yàn)證實(shí)，凝聚胺法漏檢了1例較弱不規(guī)則抗體引起的主側(cè)交叉配血不合。25例微柱凝膠法次側(cè)不合者凝聚胺法僅檢出6例，其余19例均為微柱凝膠直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性者，且凝集程度在1+～2+之間。依據(jù)凝聚胺法交叉配血結(jié)果，給患兒輸入相合的血液后未引起輸血反應(yīng)。從本組試驗(yàn)結(jié)果可以看出，患兒紅細(xì)胞被自身抗體致敏，直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性是微柱凝膠法次側(cè)不合的主要原因。由于無(wú)法明確次側(cè)凝集是患兒本身紅細(xì)胞被致敏引起的凝集，還是患兒紅細(xì)胞與供血者血漿反應(yīng)引起的凝集，筆者認(rèn)為對(duì)于微柱凝膠直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性患兒交叉配血，將兩種方法聯(lián)合運(yùn)用，以微柱凝膠法為主，用凝聚胺法復(fù)檢是很好的組合。

綜上所述，微柱凝膠法用于新生兒交叉配血，優(yōu)點(diǎn)明顯，可作為新生兒交叉配血的常規(guī)方法。對(duì)于微柱凝膠直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性者結(jié)合凝聚胺法配血，既有利于保障臨床用血安全，又避免了因其敏感性太高導(dǎo)致的血液資源浪費(fèi)。

[1]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].東南大學(xué)出版社,2006.262-263.

[2]張長(zhǎng)虹,周俊.新生兒輸血進(jìn)展與輸血安全[J].中國(guó)輸血雜志,2010,23(7):491.

[3]李勇,馬學(xué)嚴(yán).實(shí)用血液免疫學(xué)血型理論和實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].科學(xué)出版社,2006.566-568.

[4]Kim WD,Lee YH.A fatal case of severe hemolytic disease of newborn associated with antiJk(b)[J].J Korean Med Sci,2006,21(1):151-154.