鹽酸樂卡地平片有關(guān)物質(zhì)HPLC檢查方法研究

湯典慧 ，李 威 ，彭敏 ，郭思維 ，朱劍波 ，邱細(xì)敏

（1.湘雅醫(yī)院藥劑科，湖南 長(zhǎng)沙 410008；2.湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410006）

鹽酸樂卡地平是1,4-二氫吡啶類化合物，是一種治療高血壓的新型藥物[1]。它是由意大利Recordati公司開發(fā),1997年在荷蘭首次上市,現(xiàn)已在歐美國(guó)家得到廣泛應(yīng)用，且反響良好。在國(guó)內(nèi)上市以后得到了快速發(fā)展，未來應(yīng)用前景廣闊。近年有關(guān)的報(bào)道有：用RHPLC測(cè)定鹽酸樂卡地平片劑含量[2]、用HPLC-MS方法測(cè)定人血清中樂卡地平的含量[3]及用HPLC-電化學(xué)檢測(cè)器方法測(cè)定樂卡地平中的含量[4]，而樂卡地平中的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定報(bào)道甚少,片劑中有關(guān)物質(zhì)測(cè)定未見報(bào)道。為規(guī)范藥品生產(chǎn)及保證臨床所用藥品質(zhì)量安全，同時(shí)能方便、快捷、準(zhǔn)確地測(cè)定鹽酸樂卡地平藥品中的有關(guān)物質(zhì)，作者采用高相色譜法，建立了一種快速、靈敏、精密度好的測(cè)定鹽酸樂卡地平藥品中有關(guān)物質(zhì)的分析方法。

1 儀器、試藥及試劑

日本島津LC-2010高效液相色譜儀，LC-solution色譜工作站， 依利特 300A-ODS(5μm、4.6x200mm)色 譜柱 ，AS2060、Cleaner(autosience)超聲波清洗儀，pHS-2c酸度計(jì)。鹽酸樂卡地平片(湖南天地恒一有限公司提供)，鹽酸樂卡地平對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所)。乙腈(色譜純，上海陸都化學(xué)試劑廠)，乙酸銨(分析純 )，乙酸(分析純)，三乙胺(分析純，廣東汕頭市西龍化工廠)，水(超純水，自制)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：依利特 300A-ODS(5μm,4.6×200mm);流動(dòng)相:乙腈-0.01moL/L乙酸銨溶液-三乙胺(650:350:1)[用乙酸調(diào)節(jié) pH 值至 6.0]；柱溫：25℃；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：240 nm;進(jìn)樣量：20 μL。 在此條件下,鹽酸樂卡地平片和有關(guān)物質(zhì)可達(dá)到良好的分離，理論塔板數(shù)按樂卡地平峰計(jì)不得少于2000，見圖1。

圖1 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)圖譜

2.2 測(cè)定方法

取本品細(xì)粉適量，用流動(dòng)相配制成1mL中含鹽酸樂卡地平約0.3 mg的供試品溶液和1mL中含鹽酸樂卡地平約6 μg的對(duì)照溶液。取對(duì)照溶液20 μL，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的10%～20%；再準(zhǔn)確量取上述兩種溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至保留時(shí)間的3倍。在供試品溶液色譜中，單個(gè)雜質(zhì)峰的峰面積不得大于對(duì)照溶液中主成分峰的峰面積的0.5%，各雜質(zhì)峰的峰面積之和不得大于對(duì)照溶液中主成分峰的峰面積的2.0%[5]。

2.3 專屬性考察

2.3.1 破壞試驗(yàn)

取本品20片，置250mL容量瓶中，加0.01moL/L鹽酸溶液25mL，超聲使崩解，加甲醇100mL超聲溶解，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液作為樣品儲(chǔ)備液；按同法操作，用250mL容量瓶配制空白溶劑作為溶劑儲(chǔ)備液；同樣，取不含鹽酸樂卡地平的空白對(duì)照樣品，制成輔料儲(chǔ)備溶液。量取溶劑儲(chǔ)備液、樣品儲(chǔ)備液及輔料各5 mL置于兩個(gè)刻度試管中,分別用2 moL/L的鹽酸1 mL破壞 12 h，破壞后的溶液用相應(yīng)的堿進(jìn)行中和；2 moL/L的氫氧化鈉1 mL破壞12 h，破壞后的溶液用相應(yīng)的酸進(jìn)行中和；30%的雙氧水0.5 mL破壞12h；100℃水浴鍋中破壞1 h；強(qiáng)光照射下破壞24 h；最后分別用乙腈-0.01 moL/L乙酸銨溶液-三乙胺(650:350:1)[用乙酸調(diào)節(jié)pH值至6.0]的混合溶液稀釋到10 mL的刻度。精密移取上述不同溶液20 μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，如圖2。

2.3.2 破壞結(jié)果分析

(1)根據(jù)破壞試驗(yàn)的色譜圖進(jìn)行分析，樣品經(jīng)強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、光照、氧化、水浴等破壞試驗(yàn)破壞后，降解產(chǎn)物的色譜峰與主峰分離良好。(2)各有關(guān)物質(zhì)均在240 nm的波長(zhǎng)處有吸收，說明該HPLC法能有效檢測(cè)雜質(zhì)。(3)從圖譜可知，氧化后的樣品溶液較未被破壞樣品溶液多出一個(gè)雜質(zhì)峰，此峰經(jīng)圖譜比較可以看出是雙氧水產(chǎn)生的峰。(4)由圖可知，輔料樣品破壞穩(wěn)定，在主峰的位置無降解雜質(zhì)，不干擾本品的有關(guān)物質(zhì)檢查。(5)由上述試驗(yàn)結(jié)果可知：該色譜條件專屬性好，符合本品有關(guān)物質(zhì)檢查的要求。

2.4 檢測(cè)限與定量限的測(cè)定

圖2 破壞試驗(yàn)的HLPC圖譜

取鹽酸樂卡地平對(duì)照品適量，精密稱定為19.6mg，用流動(dòng)相逐級(jí)稀釋。分別量取各級(jí)稀釋溶液20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，量取鹽酸樂卡地平色譜峰峰高，采取信噪比法，按照S/N=3計(jì)(N是指噪音，S是信號(hào))，計(jì)算鹽酸樂卡地平的檢測(cè)限約為0.2ng；按照S/N=10計(jì)，計(jì)算鹽酸樂卡地平的定量限約為0.4ng。見下圖3、4。

圖3 鹽酸樂卡地平片檢出限HPLC圖譜

圖4 鹽酸樂卡地平片定量限HPLC圖譜

2.5 精密度的考察

取本品10片，置250 mL量瓶中，加0.01 moL/L鹽酸溶液25 mL，超聲使崩解，加甲醇100 mL超聲溶解，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液；精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，連續(xù)進(jìn)樣6次，以面積歸一化法計(jì)算本品含量，并考察RSD%，結(jié)果見下表1。

表1 本品有關(guān)物質(zhì)溶液精密度考察結(jié)果

2.6 穩(wěn)定性的考察

取精密度實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下的樣品溶液，置于室溫條件下,在第 0、2、4、6、8 h 分別取樣 20 μL 注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以面積歸一化法計(jì)算有關(guān)物質(zhì)，并考察RSD%。結(jié)果見下表2。

表2 本品有關(guān)物質(zhì)溶液穩(wěn)定性考察結(jié)果

表3 本品有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果

3 有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定

取4批樣品及上市品分別加流動(dòng)相使其溶解，并稀釋成0.3mg/mL的溶液，依法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)，計(jì)算有關(guān)物質(zhì)含量，結(jié)果見下表3。

4 討論

4.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

本研究曾參考文獻(xiàn)的色譜條件對(duì)鹽酸樂卡地平有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果分離度達(dá)不到要求，采用紫外檢測(cè)器，對(duì)供試品溶液進(jìn)行光譜掃描，發(fā)現(xiàn)樂卡地平在356nm處有最大吸收峰，但各雜質(zhì)峰在此處吸收很少，甚至沒有吸收，所以此波長(zhǎng)不適宜該藥有關(guān)物質(zhì)的含量檢查，另外檢測(cè)到有關(guān)物質(zhì)在波長(zhǎng)220nm-240nm之間均有較大吸收，但由于流動(dòng)相中含有緩沖鹽，采用較低波長(zhǎng)時(shí)，流動(dòng)相會(huì)有干擾，因此決定采用240nm為檢測(cè)波長(zhǎng)來進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。

4.2 流動(dòng)相的選擇

參照文獻(xiàn)，作者以0.15mol/L高氯酸鈉溶液(用70%高氯酸調(diào)節(jié)PH值至3.0)-乙腈(39:61)為流動(dòng)相時(shí)，主峰對(duì)稱度為2.253，拖尾嚴(yán)重，且分離度(1.221)不好；為了改善主峰對(duì)稱性，作者在流動(dòng)相中加入0.1%的三乙胺，并且考慮到色譜柱的耐受性，將流動(dòng)相的pH值調(diào)至6.0，并將極性高的高氯酸鈉緩沖液改用極性相對(duì)弱的乙酸銨代替，即以乙腈-0.1mol/L乙酸銨溶液-三乙胺 (650:350:1)[用乙酸調(diào)節(jié)pH值至6.0]為流動(dòng)相，結(jié)果峰形良好，主峰對(duì)稱度為1.052，理論板數(shù)高于4000，且分離度為18.709，各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求,系統(tǒng)適用性良好。因此，本品流動(dòng)相選擇為：乙腈-0.01mol/L乙酸銨溶液-三乙胺(650:350:1)[用乙酸調(diào)節(jié)pH值至6.0]。

[1]Taya K,Watanabe Y,Kobayashi H,et al.Nimodipine improves the disruption ofspatial cognition induced by cerebral ischemia Physiol[J].Behavior,2000,70:19-25.

[2]楊麗萍,張津楓,張廣明,等.反相高效液相色譜法測(cè)定樂卡地平片的含量[J].天津藥學(xué),2006,18(5):16-18.

[3]黃小玉,尚京川.高效液相-質(zhì)譜法測(cè)定人血漿中樂卡地平的濃度[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2008,28(22):1939-1942.

[4]Yuksl Altuna,Bengi Uslu,Sibel A,et al.Electroanalytical Characteristics of Lercanidipine and its Voltammetric Determination in Pharmaceuticals and Human Serum on Boron-Doped Diam-ond Electrode[J].Analytical Letters,2010,43:1958-1975.

[5]張才煜,吳健敏,張啟明.關(guān)于紫杉醇注射液有關(guān)物質(zhì)檢查方法的探討[J].中國(guó)藥師,2010,13(9):1310-1312.