葛根及川芎合用對(duì)缺血再灌注大鼠保護(hù)作用的研究

黃安安，高 麗

（遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，貴州遵義563000）

葛根及川芎合用對(duì)缺血再灌注大鼠保護(hù)作用的研究

黃安安，高 麗

（遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，貴州遵義563000）

目的研究葛根及川芎合用對(duì)缺血再灌注大鼠的保護(hù)作用，為臨床提供數(shù)據(jù)參考。方法 選取120只SD大鼠分為正常對(duì)照組，假手術(shù)組，模型組，葛根聯(lián)合川芎高、中、低劑量組，葛根組，川芎組。正常對(duì)照組、假手術(shù)組、模型組均給予等體積生理鹽水灌胃；葛根聯(lián)合川芎高、中、低劑量組分別給予8、4、2g／kg葛根及川芎灌胃；葛根組給予4g／kg葛根灌胃；川芎組給予4g／kg川芎灌胃。灌胃時(shí)間為再灌注0、6h時(shí)。測(cè)定腦組織含水量，神經(jīng)功能缺損評(píng)分及腦組織腫瘤壞死因子（TNF－α）、白細(xì)胞介素－6（IL－6）的含量。結(jié)果模型組與正常對(duì)照組比較大鼠腦組織含水量、神經(jīng)功能缺損評(píng)分及TNF－α、IL－6的含量明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。葛根聯(lián)合川芎高、中劑量組及葛根組、川芎組與模型組比較大鼠腦含水量及TNF－α、IL－6的含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論葛根及川芎合用對(duì)缺血再灌注大鼠可起到保護(hù)作用，其機(jī)制可能與降低腦組織含水量、改善神經(jīng)功能以及降低腦炎癥因子含量有關(guān)。

葛根；川芎；腦缺血；再灌注損傷

葛根為豆科植物野葛的干燥根，習(xí)稱野葛。其化學(xué)成分主要包括有葛根素、黃豆苷和黃豆苷元。川芎為傘形科植物川芎的干燥根莖，其化學(xué)成分主要包括川芎嗪、阿魏酸和藁本內(nèi)酯類化合物。二者在臨床上常聯(lián)合用于治療心腦血管疾病，本研究建立大鼠腦缺血再灌注模型，采用兩藥聯(lián)用探討其對(duì)心腦血管的保護(hù)作用，為臨床用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料 選取清潔級(jí)SD大鼠，雌雄合用，體質(zhì)量（200±20）g，購(gòu)自重慶醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。葛根及川芎購(gòu)自遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院中藥房，經(jīng)鑒定為豆科植物野葛的干燥根及形科植物川芎的干燥根莖。葛根及川芎水提液由本實(shí)驗(yàn)室自制，即將藥材分別粉碎后加水浸潤(rùn)1h，然后分別加水8倍、6倍煎煮2次，第1次2h，第2次1h，抽濾，合并濾液，濃縮到500 mL，相當(dāng)于原藥材0.4／mL，0～5℃冷藏備用。

1.2 儀器與試劑 采用全自動(dòng)酶標(biāo)儀MK3（美國(guó)THERMO公司）；低溫離心機(jī)3K15（德國(guó)SIGMA公司）；烘箱Z91－2290－81［艾普瑞（上海）精密光電有限公司］；天平FA1004N（上海天普分析儀器有限公司）。腫瘤壞死因子（TNF－α），白細(xì)胞介素－6（IL－6）酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程有限公司。

1.3 方法

1.3.1 復(fù)制模型 根據(jù)Borti等［7］方法制作大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）型，腹腔注射10% 水合氯醛（350mg／kg）以麻醉大鼠，分離、結(jié)扎并切斷右側(cè)頸外動(dòng)脈，由頸外動(dòng)脈殘端沿頸總和頸內(nèi)動(dòng)脈緩慢插入頭端膨大的尼龍魚線約18mm，阻塞大腦中動(dòng)脈入口造成缺血。缺血3h后拔出栓線進(jìn)行24h再灌注。假手術(shù)組僅分離頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈但不插線。

1.3.2 分組與給藥 選取120只SD大鼠分為正常對(duì)照組（等容生理鹽水）、假手術(shù)組（等容生理鹽水）、模型組（等容生理鹽水）、葛根聯(lián)合川芎高、中、低劑量組（8、4、2g／kg）、葛根組（44g／kg）、川芎組（4g／kg）。灌胃給藥，灌胃時(shí)間為再灌注0、6h時(shí)。

1.3.3 腦組織含水量的測(cè)定 灌注24h后，分別腹腔注射10% 水合氯醛（350mg／kg）麻醉大鼠，迅速斷頭取腦，稱質(zhì)量，記錄。將腦組織置于80℃烘箱內(nèi)烘烤48h，稱干質(zhì)量，記錄，按EIIis公式計(jì)算含水量:腦組織含水量＝（濕質(zhì)量－干質(zhì)量）／濕質(zhì)量×100%。

1.3.4 神經(jīng)功能評(píng)分 灌注24h后，參照Bederson等［3］分級(jí)方法觀察大鼠神經(jīng)行為學(xué)變化，進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分。0級(jí):無神經(jīng)功能缺失癥狀；1級(jí):提尾時(shí)病灶對(duì)側(cè)肢體屈曲；2級(jí):除1級(jí)征象外伴有向病灶對(duì)側(cè)的側(cè)推阻力下降；3級(jí):除1、2級(jí)征象外伴有活動(dòng)時(shí)向癱瘓側(cè)旋轉(zhuǎn)征象。

1.3.5 腦組織中TNF－α及IL－6的測(cè)定 灌注24h后，取大鼠腦組織，準(zhǔn)確稱質(zhì)量，按質(zhì)量（g）與體積（mL）為1∶9的比例加9倍體積的PBS，冰水中勻漿，3 000r／min離心后取上清液待測(cè)。酶標(biāo)儀分別在492nm及450nm波長(zhǎng)下測(cè)定TNF－α及IL－6的含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)資料以±s表示，組間采用t檢驗(yàn)，用Spearman等級(jí)相關(guān)分析相關(guān)性，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 葛根及川芎合用對(duì)模型大鼠腦組織含水量的影響 模型組與正常對(duì)照組比較大鼠腦組織含水量明顯增加（P＜0.01）。葛根聯(lián)合川芎高、中劑量組及葛根組、川芎組與模型組比較大鼠腦組織含水量明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）。4g／kg葛根聯(lián)合川芎降低模型大鼠腦組織含水量的功效等同與4g／kg葛根或川芎?jiǎn)我挥盟帟r(shí)的功效；8g／kg葛根聯(lián)合川芎降低模型大鼠腦組織含水量的功效優(yōu)于與4g／kg葛根或川芎?jiǎn)我挥盟帟r(shí)的功效（P＜0.05），結(jié)果見表1。

表1 葛根及川芎合用對(duì)模型大鼠腦組織含水量的影響

2.2 葛根及川芎合用對(duì)模型大鼠神經(jīng)功能評(píng)分的影響 模型組與正常對(duì)照組比較大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分明顯上升（P＜0.01）。葛根聯(lián)合川芎高、中劑量組及葛根組、川芎組與模型組比較大鼠腦組織含水量明顯下降（P＜0.05或P＜0.01）。4 g／kg葛根聯(lián)合川芎改善模型大鼠神經(jīng)功能缺損狀態(tài)的功效等同于4g／kg葛根或川芎?jiǎn)我挥盟帟r(shí)的功效；8g／kg葛根聯(lián)合川芎改善模型大鼠神經(jīng)功能缺損狀態(tài)的功效優(yōu)于4g／kg葛根或川芎?jiǎn)我挥盟帟r(shí)的功效（P＜0.05），結(jié)果見表2。

2.3 葛根及川芎合用對(duì)TNF－α及IL－6的影響 模型組與正常對(duì)照組比較，TNF－α及IL－6含量明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。葛根聯(lián)合川芎高、中劑量組及葛根組、川芎組與模型組比較，TNF－α及IL－6含量明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。4g／kg葛根聯(lián)合川芎改善 TNF－α及IL－6水平等同于4g／kg葛根或川芎?jiǎn)我挥盟帟r(shí)的效果；8 g／kg葛根聯(lián)合川芎改善TNF－α及IL－6水平明顯優(yōu)于4g／kg葛根或川芎?jiǎn)我挥盟帟r(shí)的效果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），結(jié)果見表3。

表2 葛根及川芎合用對(duì)模型大鼠神經(jīng)功能評(píng)分的影響

表3 葛根及川芎合用對(duì)TNF－α及IL－6的影響

3 討 論

缺血性腦血管病在缺血和再灌注早期伴隨著細(xì)胞因子、黏附分子表達(dá)并促使缺血性損傷向炎性損傷轉(zhuǎn)變及脂質(zhì)過氧化、神經(jīng)細(xì)胞凋亡［4－12］。本實(shí)驗(yàn)中大鼠缺血再灌注24h后，TNF－α及IL－6含量明顯較正常對(duì)照組增加，用藥后有所改善，單用葛根或川芎（4g／kg）降低模型大鼠TNF－α及IL－6水平的效果與葛根（2g／kg）聯(lián)合川芎（2g／kg）合用相同，但弱于相同劑量下兩藥合用的效果。

有研究表明，葛根與川芎均能改善缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能狀態(tài)［13］。本研究發(fā)現(xiàn)，在缺血再灌注24h后，大鼠出現(xiàn)神經(jīng)功能障礙，模型大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分明顯升高，腦組織水含量明顯增加，經(jīng)藥物干預(yù)后情況有所改善，單用葛根或川芎（4g／kg）降低模型大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分及腦組織含水量的效果與葛根（2g／kg）聯(lián)合川芎（2g／kg）合用相同，但弱于相同劑量下兩藥合用的效果。

本研究顯示，經(jīng)藥物干預(yù)的模型大鼠，TNF－α、IL－6含量明顯減低，神經(jīng)功能缺損評(píng)分及腦含水量降低。說明改善缺血再灌注大鼠狀態(tài)以葛根及川芎合用為好，且效果好于單一味藥的使用。

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The proective effect of Puerarialobata and rhizoma Chuanxiong on ischemia reperfusion rats

Huang An＇an，Gao Li
（The Affiliated Hospital of Zunyi Medical College，Zunyi，Guizhou563000，China）

ObjectiveTo study Puerarialobata and Rhizoma Chuanxiong combination on ischemia reperfusion in rats and the protective effect，and provide reference data for clinical.Methods120SD male rats were divided into normal control group，sham operation group，model group，Puerarialobata and Chuanxiong in high，medium and low dose group，Puerarialobata group and Chuanxiong group.Normal control group，sham operation group，model group were given equal volumes of saline lavage；Puerarialobata and Chuanxiong high，medium and low dose group were given 8g／kg，4g／kg，2g／kg kudzuvine root and Rhizoma Chuanxiong gavage；Puerarialobata group was given 4g／kg kudzu gavage；Chuanxiong group was given 4g／kg Chuanxiong gastric perfusion.Gastric lavage for reperfusion 0h，6h.Detecting the water content of brain，neural function defect score and brain tumor necrosis factor，interleukin6content.ResultsIn the model group and normal control group comparison of rat brain water content，neural function defect score and tumor necrosis factor，interleukin 6were significantly increased（P＜0.01）.Puerarialobata＋ Rhizoma Chuanxiong high and medium dose group and Puerarialobata group，Chuanxiong group compared with the model group rats brain water content and tumor necrosis factor，interleukin 6were significantly reduced（P＜0.05or P＜0.01）.ConclusionThe root and Rhizoma Chuanxiong combination on ischemia reperfusion rats may play aprotective role，its mechanism may be associated with brain water content，improve the nerve function and reduces brain inflammation factor content.

puerarialobata；rhizoma Chuanxiong；brain ischemia；reperfusion injury

10.3969／j.issn.1671－8348.2012.34.019

A

1671－8348（2012）34－3621－02

2012－06－09

2012－08－22）

·技術(shù)與方法·