不同外源激素對清遠(yuǎn)筆架茶愈傷組織誘導(dǎo)的影響

歐少云 陳珊 陳春蘭 劉細(xì)群

摘要：采用清遠(yuǎn)筆架茶［Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ （Ｌ．）Ｏ． Ｋｕｎｔｚｅ］的嫩葉作為外植體，探索不同外源激素種類及濃度對清遠(yuǎn)筆架茶愈傷組織誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明，在培養(yǎng)基１／２ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ １．０ ｍｇ／Ｌ中誘導(dǎo)效果最好，誘導(dǎo)率為８６．７％，且愈傷組織生長健壯。

關(guān)鍵詞：清遠(yuǎn)筆架茶［Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ （Ｌ．）Ｏ． Ｋｕｎｔｚｅ］；外源激素；愈傷組織

中圖分類號：Ｑ９４９．７５８．４；Ｑ９４３．１文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０12）16－3626-02

Effects of Type and Concentration of Exogenous Hormone on Callus Induction of Qingyuanbijia Tea

ＯＵ Ｓｈａｏ－ｙｕｎ，ＣＨＥＮ Sｈａｎ，ＣＨＥＮ Ｃｈｕｎ－ｌａｎ，ＬＩＵ Xｉ－ｑｕｎ

（Ｑｉｎｇｙｕａｎ Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ，Ｑｉｎｇｙｕａｎ ５１１５１０，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｔｅｎｄｅｒ ｌｅａｆ ｏｆ Ｑｉｎｇｙｕａｎｂｉｊｉａ ｔｅａ［Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）Ｏ． Ｋｕｎｔｚｅ］ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ， ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｙｐｅ ａｎｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ ｈｏｒｍｏｎｅ ｏｎ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ １／２ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ １．０ｍｇ／Ｌ ｈａｄ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗｉｔｈ ａｎ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ８６．７％， ａｎｄ ｔｈｅ ｃａｌｌｕｓ ｇｒｏｗｅｄ ｖｉｇｏｒｏｕｓｌｙ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｑｉｎｇｙｕａｎｂｉｊｉａ ｔｅａ ［Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）Ｏ． Ｋｕｎｔｚｅ］； ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ ｈｏｒｍｏｎｅ； ｃａｌｌｕｓ

清遠(yuǎn)筆架茶［Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ （Ｌ．）Ｏ． Ｋｕｎｔｚｅ］屬于山茶科（Ｔｈｅａｃｅａｅ）山茶屬（Ｃａｍｅｌｌｉａ），是清遠(yuǎn)筆架山種植的特有地方品種，葉橢圓形，芽葉黃綠色，葉質(zhì)硬，適合制作為綠茶，茶湯香氣清長持久，滋味爽口而滑，帶甜甘味，有解暑、化痰、生津之功效。目前清遠(yuǎn)筆架茶主要通過有性形式進(jìn)行繁殖，但利用種子繁殖發(fā)芽率很低。歐少云等［１］用嫩葉、嫩莖和花瓣進(jìn)行試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，嫩葉的愈傷組織的誘導(dǎo)率最高。本文采用清遠(yuǎn)筆架茶的嫩葉作為外植體，以ＭＳ和１／２ＭＳ為基本培養(yǎng)基，以６－ＢＡ、ＮＡＡ、２，４－Ｄ為外源激素，研究不同外源激素種類及濃度對清遠(yuǎn)筆架茶嫩葉愈傷組織誘導(dǎo)的影響，為今后研究清遠(yuǎn)筆架茶植株的快繁技術(shù)打下基礎(chǔ)。

１材料與方法

１．１材料

清遠(yuǎn)筆架茶的嫩葉取自清遠(yuǎn)市筆架山農(nóng)場；外源激素有６－ＢＡ、ＮＡＡ、２，４－Ｄ；基本培養(yǎng)基有ＭＳ、１／２ＭＳ。

１．２方法

１．２．１培養(yǎng)基的制備（單位：ｍｇ／Ｌ）①以１／２ＭＳ為基本培養(yǎng)基，添加６－ＢＡ（０、１．０、２．０、４．０）和ＮＡＡ（０、０．５、１．０、２．０）或者添加６－ＢＡ（０、１．０、２．０、４．０）和２，４－Ｄ（０、０．５、１．０、２．０）形成試驗(yàn)組合。②以ＭＳ為基本培養(yǎng)基，添加６－ＢＡ（０、１．０、２．０、４．０）和ＮＡＡ（０、０．５、１．０、２．０）或６－ＢＡ（０、１．０、２．０、４．０）和２，４－Ｄ（０、０．５、１．０、２．０）形成試驗(yàn)組合。

１．２．２培養(yǎng)基的滅菌所有培養(yǎng)基和接種器具均用高壓蒸汽滅菌鍋于１２１ ℃滅菌２０ ｍｉｎ，冷卻待用。

１．２．３外植體的消毒處理取清遠(yuǎn)筆架茶剛展開的嫩葉，用軟毛筆蘸取洗潔精稀釋液小心清洗，用流水沖洗１．０～１．５ ｈ后，用潔凈紗布吸干；于超凈工作臺上用體積分?jǐn)?shù)為７０％的乙醇處理２０ ｓ，用無菌水漂洗２次，然后將其置于１ ｇ／Ｌ ＨｇＣｌ２溶液中浸泡１０～２０ ｍｉｎ；用無菌水漂洗５～６次，用無菌濾紙吸干表面水分待用。

１．２．４接種把經(jīng)過消毒處理的嫩葉切成１ ｃｍ２左右、具葉脈的小葉塊，將小葉塊上表面朝上，接種于按１．２．１的方法制得的培養(yǎng)基中，每瓶接種５個小葉塊，每種培養(yǎng)基共接種１０瓶。試驗(yàn)３次重復(fù)，結(jié)果?。炒蔚钠骄?。

１．２．５培養(yǎng)將接種后的外植體均放在２５ ℃下暗培養(yǎng)２周，然后在散射光下以１４ ｈ／ｄ繼續(xù)光照培養(yǎng)。試驗(yàn)３次重復(fù)，結(jié)果?。炒蔚钠骄?。

２結(jié)果與分析

培養(yǎng)３０ ｄ后統(tǒng)計的愈傷組織誘導(dǎo)情況見表１至表４。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用１／２ＭＳ作為基本培養(yǎng)基比用ＭＳ對清遠(yuǎn)筆架茶嫩葉愈傷組織誘導(dǎo)的效果更好。由表１至表４可知，在不添加外源激素的情況下，清遠(yuǎn)筆架茶嫩葉無法有效地形成愈傷組織；只添加６－ＢＡ不添加ＮＡＡ、２，４－Ｄ，或只添加ＮＡＡ或２，４－Ｄ不添加６－ＢＡ，也不能有效地誘導(dǎo)愈傷組織的形成；當(dāng)６－ＢＡ濃度為１．０、４．０ ｍｇ／Ｌ時，不管添加的ＮＡＡ或２，４－Ｄ濃度是低還是高，也不能誘導(dǎo)愈傷組織的形成；只有當(dāng)６－ＢＡ濃度為２．０ ｍｇ／Ｌ時，添加一定濃度的NAA或２，４－Ｄ才能誘導(dǎo)愈傷組織的形成，且在６－ＢＡ ２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ １．０ ｍｇ／Ｌ組合下愈傷組織誘導(dǎo)率最高，愈傷組織的狀態(tài)最好。

３討論

基本培養(yǎng)基中的大量元素對茶樹組織培養(yǎng)影響很大。成浩等［２］認(rèn)為，ＭＳ培養(yǎng)基中大量元素減半，不僅有利于莖段的誘導(dǎo)和生長，而且有利于減少莖段的褐化率，提高成活率。張婭婷等［３］研究發(fā)現(xiàn)，基本培養(yǎng)基１／２ＭＳ比ＭＳ培養(yǎng)效果好，而且ＭＳ中含有的無機(jī)離子濃度較高，對芽的分化具有一定的抑制作用。但在實(shí)際應(yīng)用中，大多數(shù)學(xué)者在誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)時采用全量的大量元素，而在生根培養(yǎng)時采用半量的大量元素［４］。本試驗(yàn)也得到了與上述研究相同的結(jié)果，即用１／２ＭＳ作為基本培養(yǎng)基比用ＭＳ在誘導(dǎo)清遠(yuǎn)筆架茶嫩葉愈傷組織形成上的效果好。

生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的種類和濃度配比是影響外植體能否成功啟動的關(guān)鍵因素之一。董德賢［５］用茶樹的新梢作材料誘導(dǎo)再生植物，結(jié)果表明，在生長誘導(dǎo)中培養(yǎng)基的生長素濃度發(fā)揮著關(guān)鍵作用。李家華等［６］探討了不同激素配方對大葉種茶樹新梢組織培養(yǎng)的效果，結(jié)果表明，６－ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ ４．０ ｍｇ／Ｌ促進(jìn)腋芽形成單生芽的效果最好，６－ＢＡ １０．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ誘導(dǎo)愈傷組織形成和腋芽分化均獲得了較好效果，６－ＢＡ ４．０ ｍｇ／Ｌ促進(jìn)叢芽形成的效果最好。本研究發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基１／２ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ １．０ ｍｇ／Ｌ中清遠(yuǎn)筆架茶嫩葉愈傷組織的誘導(dǎo)效果最好，誘導(dǎo)率為８６．７％，且愈傷組織生長健壯?？梢姡L調(diào)節(jié)物質(zhì)在清遠(yuǎn)筆架茶的組織培養(yǎng)中發(fā)揮著重要的作用。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 歐少云，陳春蘭，鄭正．清遠(yuǎn)筆架茶不同器官誘導(dǎo)愈傷組織的研究［Ｊ］．科技資訊，２０１１（２４）：３．

［２］ 成浩，李素芳． 茶樹微繁殖技術(shù)的研究與應(yīng)用［Ｊ］．中國茶葉，１９９６（２）：２９－３１．

［３］ 張婭婷，張偉． 藪北茶的組織培養(yǎng)［Ｊ］．周口師范學(xué)院學(xué)報，２００４，２１（５）：７４－７６．

［４］ 程柳，湯浩如．茶樹組織培養(yǎng)及影響因素［Ｊ］．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，２００７，３５（７）：１９６０－１９６３．

［５］ 董德賢． 茶樹組織培養(yǎng)的研究［Ｊ］．茶業(yè)通報，１９８９，５７（１）：４９．

［６］ 李家華，周紅杰，李明珠．不同激素配方對大葉種茶樹新梢組織培養(yǎng)的效果［Ｊ］．云南農(nóng)業(yè)科技，２００１（３）：２７－２８．