JAB1對(duì)缺氧環(huán)境肺癌A549細(xì)胞化療敏感性調(diào)控的研究＊

胡明冬，徐劍鋮△，楊 昱，徐 靜，周長(zhǎng)喜，毛 梅，王 藝

（1.第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院全軍呼吸內(nèi)科研究所，重慶400037；2.解放軍總醫(yī)院南樓呼吸內(nèi)科，北京100039；3.廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院呼吸內(nèi)科，武漢430061）

JAB1對(duì)缺氧環(huán)境肺癌A549細(xì)胞化療敏感性調(diào)控的研究＊

胡明冬1，徐劍鋮1△，楊 昱1，徐 靜1，周長(zhǎng)喜2，毛 梅3，王 藝1

（1.第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院全軍呼吸內(nèi)科研究所，重慶400037；2.解放軍總醫(yī)院南樓呼吸內(nèi)科，北京100039；3.廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院呼吸內(nèi)科，武漢430061）

目的 觀察導(dǎo)入pcDNA3.1－HRE－JAB1真核表達(dá)質(zhì)粒的肺癌A549細(xì)胞，在低氧環(huán)境下對(duì)健擇（Gemzar）的化療敏感性，以期找到一種提高肺癌化療敏感性的方法。方法 首先構(gòu)建缺氧反應(yīng)元件啟動(dòng)的pcDNA3.1－HRE－JAB1真核表達(dá)質(zhì)粒，鑒定后將該質(zhì)粒導(dǎo)入肺癌A549細(xì)胞。在低氧環(huán)境培養(yǎng)過(guò)程中加入化療藥物Gemzar，觀察空白組（A549）、空載體組（A549＋pcDNA3.1－HRE）和質(zhì)粒組（A549＋pcDNA3.1－HRE－JAB1）肺癌A549細(xì)胞對(duì)Gemzar的敏感性。采用Real－time PCR和Western blot分別檢測(cè)各組肺癌A549細(xì)胞中JAB1的mRNA和蛋白表達(dá)水平；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組肺癌A549細(xì)胞周期分布和凋亡情況。結(jié)果 通過(guò)雙酶切鑒定，確定構(gòu)建獲得了pcDNA3.1－HRE－JAB1質(zhì)粒。在有化療藥物Gemzar的情況下，質(zhì)粒組分別與空白組或空載體組比較，質(zhì)粒組肺癌A549細(xì)胞中JAB1mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯增加（P＜0.01），細(xì)胞凋亡率明顯增加（P＜0.01），而細(xì)胞周期被明顯阻滯于G1期（P＜0.01）。結(jié)論 JAB1在低氧環(huán)境下高表達(dá)提高了藥物Gemzar化療的敏感性，這將可能成為一種理想的提高肺癌或其他實(shí)體惡性腫瘤化療敏感性的手段。

A549細(xì)胞；JAB1；耐藥；健擇；化療敏感性

在腫瘤中肺癌的發(fā)病率最高，盡管采用了許多方法進(jìn)行治療，患者的5年生存率仍只有14%左右［1］。通常情況下，肺癌細(xì)胞受到化療藥物作用后，絕大部分細(xì)胞死亡或凋亡，而小部分細(xì)胞由于缺氧，無(wú)法啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)部正常的凋亡程序，僅出現(xiàn)亞致死損傷或潛在致死性損傷，最終導(dǎo)致化療不徹底并出現(xiàn)對(duì)化療藥物的抗性［2］，所以，采用各種方法促使這部分缺氧肺癌細(xì)胞的死亡是克服化療耐藥甚至徹底治愈腫瘤的重要策略。近年來(lái)，隨著對(duì)腫瘤乏氧區(qū)細(xì)胞特性的深入研究，為改善乏氧細(xì)胞的耐藥提供了可能的途徑。在諸多方法中，促凋亡基因的應(yīng)用對(duì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡是一個(gè)極有前景的方法［3］。因此，本實(shí)驗(yàn)擬在低氧環(huán)境下培養(yǎng)肺癌A549細(xì)胞（模擬乏氧區(qū)癌細(xì)胞），導(dǎo)入含JAB1凋亡基因的質(zhì)粒，觀察在化療藥物作用下化療敏感性的變化，以找到更好的治療肺癌甚至其他腫瘤的方法。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 細(xì)胞株 肺腺癌細(xì)胞株A549，由本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.2 主要試劑 Taq酶、DNaseI（RNase free，TaKaRa公司）；PCR引物（上海英駿生物技術(shù)公司合成）；胎牛血清、胰蛋白酶、RNA提取試劑Tripure reagent（Roche公司，美國(guó)）；MMLV Reverse Transcriptase（Promega公司）；Gemzar（F.H.Faulding公司，澳大利亞）；陽(yáng)離子脂質(zhì)體LipofectamineTM2000（上海英駿生物技術(shù)公司）。

1.1.3 主要儀器 Bio－Rad核酸蛋白測(cè)定儀；192型Sub－Cell電泳槽和全自動(dòng)凝膠成像系統(tǒng)（Bio－Rad公司，美國(guó)）；2720型PCR儀（ABI公司，美國(guó)）；FACScan型流式細(xì)胞儀（Becton Dickinson公司，美國(guó)）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 構(gòu)建人pcDNA3.1－HRE－JAB1真核表達(dá)質(zhì)粒 從基因庫(kù)獲得人JAB1基因序列，利用生物軟件Premier5.0設(shè)計(jì)引物，通過(guò)RT－PCR獲得人完整JAB1基因片斷，利用酶切方法合成真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1－JAB1，并經(jīng)過(guò)測(cè)序鑒定，人工合成缺氧反應(yīng)元件啟動(dòng)子（HIF－1/HRE）串聯(lián)重復(fù)序列，利用酶切方法將串聯(lián)重復(fù)系列插入到pcDNA3.0質(zhì)粒CMV啟動(dòng)子上端，獲得重組質(zhì)粒pcDNA3.1－HRE－JAB1，通過(guò)雙酶切法進(jìn)行鑒定。

1.2.2 pcDNA3.1－HRE－JAB1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、A549細(xì)胞的厭氧培養(yǎng)［4］及其JAB1基因mRNA表達(dá)水平的檢測(cè) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體LipofectamineTM2000。在轉(zhuǎn)染前1d，將A549細(xì)胞置于6孔培養(yǎng)板中，當(dāng)細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)板的面積達(dá)70%～80%時(shí)，即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染。具體操作過(guò)程：首先，將A549細(xì)胞在含有質(zhì)粒pcDNA3.1－HRE－JAB1（1ng）培養(yǎng)基中培養(yǎng)10h（質(zhì)粒組）；然后，將培養(yǎng)基更換為普通培養(yǎng)基培養(yǎng)48h。加入400 μg/mL遺傳霉素G418（Roche公司，美國(guó)）培養(yǎng)14d篩選陽(yáng)性細(xì)胞。相應(yīng)地，對(duì)照組細(xì)胞轉(zhuǎn)染pcDNA3.1－HRE空載體（空載體組）。在一個(gè)缺氧手套盒（Coylab，Grass Lake，美國(guó)）中，將A549細(xì)胞暴露于缺氧環(huán)境（0.3%O2）24h。同時(shí)，采用15 μg/mL健擇（Gemzar）處理轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。另外，缺氧暴露后如需要更換培養(yǎng)液，需在用前將其在缺氧環(huán)境中平衡24h。低氧環(huán)境下培養(yǎng)后A549細(xì)胞中JAB1基因mRNA表達(dá)水平的變化通過(guò)2－△△CT方法［5］進(jìn)行計(jì)算。

1.2.3 低氧培養(yǎng)后A549細(xì)胞JAB1蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)

收集A549細(xì)胞，立即加入150μL預(yù)冷去污劑裂解液，隨后劇烈振蕩15s，冰浴10min。隨后以超聲破碎細(xì)胞，100W，3次，每次約5s。接著12 000×g、4℃離心10min。按PIERCE蛋白測(cè)定試劑盒說(shuō)明進(jìn)行蛋白質(zhì)定量檢測(cè)，樣本分裝于－80℃冰箱中保存?zhèn)溆?。將提取液的蛋白濃度調(diào)整一致，各取30μg蛋白經(jīng)12%十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳后，干法轉(zhuǎn)膜至PVDF膜上，參數(shù)為15V，20min。

轉(zhuǎn)膜結(jié)束后用含5%脫脂奶粉封閉4h，TBS洗膜3次，每次5min。隨后分別加入鼠抗JAB1，Caspase－3單克隆抗體（BD Biosciences，美國(guó)）（1∶500），4℃過(guò)夜孵育。隨后加入辣根過(guò)氧化物（HRP）標(biāo)記兔抗鼠IgG（中山金橋生物科技有限公司，北京）（1∶3 000），4℃孵育2h。TBS洗膜2次，每次5 min。采用ECL著色，溫育2min。進(jìn)入暗室，將X光膠片壓在PVDF膜上，依照發(fā)光的強(qiáng)度選擇不同的曝光時(shí)間。將膠片放入顯影液中，出現(xiàn)條帶后，立即放入定影液中，流水沖洗膠片后晾干。對(duì)膠片進(jìn)行掃描，然后用Bio－Rad成像系統(tǒng)分析目的條帶的灰度值。結(jié)果判斷，以JAB1的灰度值與β－actin的灰度值的比值表示JAB1蛋白相對(duì)表達(dá)水平。

1.2.4 A549細(xì)胞周期及凋亡檢測(cè) 將1.0×104對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中（100μL/well），按以下分組：A549＋Gemzar（空白組），A549＋pcDNA3.1－HRE＋Gemzar（空載體組），A549＋pcDNA3.1－HRE－JAB1＋Gemzar（質(zhì)粒組），每孔中加入濃度為15μg/mL的Gemzar進(jìn)行試驗(yàn)觀察。

各組厭氧培養(yǎng)48h后去上清液，收集細(xì)胞，PBS洗滌3次。采用70%乙醇固定，Annexin－V、PI雙著色，用FACScan流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié) 果

2.1 pUC57－HRE－JAB1質(zhì)粒的構(gòu)建，雙酶切鑒定 見圖1。

圖1 pUC57－HRE－JAB1質(zhì)粒的鑒定

2.2 pcDNA3.1－HRE－JAB1質(zhì)粒導(dǎo)入對(duì)A549細(xì)胞中JAB1 mRNA表達(dá)水平的影響 pcDNA3.1－HRE－JAB1質(zhì)粒導(dǎo)入后，與空白組或空載體組比較，質(zhì)粒組JAB1mRNA表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01），見表1。

表1 pcDNA3.1－HRE－JAB1導(dǎo)入對(duì)A549細(xì)胞中JAB1mRNA水平的影響±s，n＝8）

表1 pcDNA3.1－HRE－JAB1導(dǎo)入對(duì)A549細(xì)胞中JAB1mRNA水平的影響±s，n＝8）

＊：P＜0.01與空白組比較；＃：P＜0.01，與空載體組比較。

組別Fold change2－△△CT空白組1.3±0.3空載體組1.5±0.2質(zhì)粒組2.9±0.4＊＃

2.3 pcDNA3.1－HRE－JAB1質(zhì)粒導(dǎo)入對(duì)A549細(xì)胞中JAB1蛋白水平的影響 pcDNA3.1－HRE－JAB1質(zhì)粒導(dǎo)入后，與空白組或空載體組比較，質(zhì)粒組JAB1蛋白水平明顯升高（P＜0.01），見表2、圖2。

圖2 各組JAB1蛋白的表達(dá)

2.4 pcDNA3.1－HRE－JAB1導(dǎo)入對(duì)A549細(xì)胞周期與凋亡的影響 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果提示在Gemzar存在的情況下，經(jīng)pcDNA3.1－HRE－JAB1轉(zhuǎn)染后，質(zhì)粒組與空白組和空載體組比較，G0/G1期細(xì)胞數(shù)量明顯增多（P＜0.01），而G2/M期細(xì)胞數(shù)量明顯減少（P＜0.01），增殖指數(shù)（PI）明顯降低（P＜0.01），見表3、圖3。

表2 pcDNA3.1－HRE－JAB1導(dǎo)入對(duì)A549細(xì)胞中JAB1蛋白水平的影響±s，n＝8）

表2 pcDNA3.1－HRE－JAB1導(dǎo)入對(duì)A549細(xì)胞中JAB1蛋白水平的影響±s，n＝8）

＊：P＜0.01，與空白組比較；＃：P＜0.01與空載體組比較。

組別JAB1蛋白水平空白組0.6±0.1空載體組0.7±0.2質(zhì)粒組2.3±0.4＊＃

表3 pcDNA3.1－HRE－JAB1質(zhì)粒導(dǎo)入對(duì)A549細(xì)胞周期分布的影響±s，%，n＝8）

表3 pcDNA3.1－HRE－JAB1質(zhì)粒導(dǎo)入對(duì)A549細(xì)胞周期分布的影響±s，%，n＝8）

＊：P＜0.01與空白組比較；＃：P＜0.01與空載體組比較。PI＝（S＋G2M）/（G0/G1＋S＋G2M）。

組別G0/G1期S期G2/M期PI期空白組62.3±5.3 35.9±3.4 2.8±0.6 38.7±4.2空載體組62.1±5.5 35.7±3.6 3.2±0.7 38.9±4.8質(zhì)粒組72.9±5.6＊＃26.0±2.5＊＃1.1±0.4＊＃27.1±2.4＊＃

圖3 pcDNA3.1－HRE－JAB1導(dǎo)入對(duì)A549細(xì)胞周期與凋亡的影響

3 討 論

化療是肺癌治療最常采用的一種方法。通常情況下，化療藥物將使大多數(shù)腫瘤細(xì)胞發(fā)生致死性殺傷或凋亡，然而少數(shù)仍會(huì)存活，研究發(fā)現(xiàn)它們主要位于腫瘤缺氧區(qū)［6］。因缺氧導(dǎo)致化療藥物細(xì)胞毒所需的氧供不足而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞耐藥；同時(shí)，由于腫瘤細(xì)胞增殖活躍，氧供與氧耗的失衡也將導(dǎo)致耐藥發(fā)生［7］。有研究者通過(guò)轉(zhuǎn)染化療敏感基因，使其表達(dá)增強(qiáng)來(lái)降低化療耐藥，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)在陽(yáng)離子脂質(zhì)體介導(dǎo)的p16INK4a和p14ARF基因轉(zhuǎn)染導(dǎo)入A549細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡和化療的敏感性有所增加，但未取得預(yù)想的效果［8］。其原因可能是由于它們低的轉(zhuǎn)染效率及靶向特異性差，且它們?cè)诩?xì)胞周期調(diào)控路徑中具有雙重作用，既誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，也可阻滯細(xì)胞周期，因此，雖然它們?cè)谝欢ǔ潭壬习l(fā)揮了作用，但難以取得令人滿意的效果。

而近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的抑癌基因JAB1，是目前所發(fā)現(xiàn)的惟一專職促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡的基因［9］。一系列的研究發(fā)現(xiàn)，將JAB1基因?qū)肴橄侔┘?xì)胞中可明顯降低p27kip1的表達(dá)水平；同樣鼻咽癌組織中p27kip1表達(dá)與其增殖活性與侵襲能力密切相關(guān)［10］；Liu等［11］發(fā)現(xiàn)JAB1與BclGs（Bcl－Gonad short form）的共表達(dá)可協(xié)同誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞的凋亡，JAB1能夠與Bcl－XL/Bcl－2競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到BclGs上，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。相反，當(dāng)通過(guò)RNAi技術(shù)沉默JAB1基因時(shí)，BclGs的前凋亡效應(yīng)明顯減弱。因此，以上實(shí)驗(yàn)均表明，當(dāng)機(jī)體組織中JAB1高表達(dá)時(shí)，癌細(xì)胞往往能發(fā)生有效的凋亡。

研究發(fā)現(xiàn)機(jī)體肺癌乏氧區(qū)JAB1基因表達(dá)往往很低，因此，必須找到JAB1在低氧條件下高表達(dá)的方法。本實(shí)驗(yàn)設(shè)想如果能構(gòu)建出在厭氧環(huán)境下能高表達(dá)JAB1的質(zhì)粒，將其導(dǎo)入肺癌乏氧區(qū)細(xì)胞，那么，它們對(duì)化療藥物敏感性就可能提高。有研究表明，缺氧誘導(dǎo)因子－1（HIF－1）是哺乳動(dòng)物中的一種轉(zhuǎn)錄因子，于1993年在缺氧誘導(dǎo)的細(xì)胞中被確認(rèn)［12］。在缺氧條件下，HIF－1的表達(dá)受缺氧反應(yīng)元件啟動(dòng)子（HIF－1/HRE）的調(diào)控［13］，而HIF－1/HRE可明顯促進(jìn)目的基因在缺氧環(huán)境中表達(dá)［5］。因此，本研究首先擴(kuò)增人類JAB1全長(zhǎng)片段，隨后將其插入pcDNA3.1載體構(gòu)建pcDNA3.1－HRE－JAB1真核表達(dá)質(zhì)粒，并將該質(zhì)粒導(dǎo)入在低氧環(huán)境培養(yǎng)下的A549細(xì)胞中，通過(guò)qRT－PCR與Western blot檢測(cè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞表達(dá)JAB1基因情況，與空白組或空載體組比較，質(zhì)粒組JAB1的mRNA和蛋白水平均明顯升高，表明pcDNA3.1－HRE－JAB1質(zhì)?？稍谌毖醐h(huán)境中高表達(dá)JAB1。

本實(shí)驗(yàn)證實(shí)高表達(dá)的JAB1基因能在厭氧環(huán)境下提高A549細(xì)胞的化療敏感性。導(dǎo)入pcDNA3.1－HRE－JAB1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的A549細(xì)胞在厭氧環(huán)境培養(yǎng)下，使用化療藥物Gemzar后，發(fā)現(xiàn)較空白組和空載體組G0/G1期細(xì)胞數(shù)量明顯增多，而G2/M期細(xì)胞數(shù)量明顯減少，增殖指數(shù)（PI）明顯降低，也就是A549細(xì)胞周期明顯阻滯于G1期以前，細(xì)胞的分裂減少，A549細(xì)胞凋亡增多。與Tomoda等［14］研究結(jié)果在某種程度上基本一致，他發(fā)現(xiàn)JAB1－/－小鼠的胚胎細(xì)胞增殖緩慢，且細(xì)胞周期延遲于G0和S期之間。因此，JAB1具有通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期信號(hào)通路發(fā)揮控制細(xì)胞周期進(jìn)程和促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在A549細(xì)胞中導(dǎo)入含JAB1凋亡基因的質(zhì)粒能在低氧環(huán)境下高表達(dá)JAB1，且比單獨(dú)使用化療藥A549細(xì)胞凋亡明顯增多，實(shí)現(xiàn)了低氧環(huán)境下JAB1基因增強(qiáng)A549細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，因此，可能找到了一種克服肺癌化療耐藥的方法。

［1］Toh CK.The changing epidemiology of lung cancer［J］.Methods Mol Biol，2009，472（5）：397－411.

［2］Harrison L，Blackwell K.Hypoxia and anemia：factors in decreased sensitivity to radiation therapy and chemotherapy？［J］.Oncologist，2004，56（1）：31－40.

［3］Yang QC，Zeng BF，Shi ZM，et al.Inhibition of hypoxiainduced angiogenesis by trichostatin A via suppression of HIF－1aactivity in human osteosarcoma［J］.J Exp Clin Cancer Res，2006，25（10）：593－599.

［4］Maher JC，Wangpaichitr M，Savaraj N，et al.Hypoxia－inducible factor－1confers resistance to the glycolytic inhibitor 2－deoxy－D－glucose［J］.Mol Cancer Ther，2007，6（12）：732－741.

［5］Semenza GL.HIF－1：mediator of physiological and pathophysiological responses to hypoxia［J］.J Appl Physiol，2000，88（10）：1474－1480.

［6］Bell EN，Tse MY，F(xiàn)rederiksen LJ，et al.Atrial natriuretic peptide attenuates hypoxia induced chemoresistance in prostate cancer cells［J］.J Urol，2007，177（2）：751－756.

［7］Yasuda H.Solid tumor physiology and hypoxia－induced chemo/radio－resistance：novel strategy for cancer therapy：nitric oxide donor as a therapeutic enhancer［J］.Nitric Oxide，2008，19（6）：205－216.

［8］Xie QC，Hu YD，Wang LL，et al.The co－transfection of p16（INK4a）and p14（ARF）genes intohuman lung cancer cell line A549and the effects on cell growth and chemosensitivity［J］.Colloids Surf B Biointerfaces，2005，46（3）：188－196.

［9］Park CM，Park MJ，Kwak HJ，et al.Induction of p53－mediated apoptosis and recovery of chemosensitivity through p53transduction in human glioblastoma cells by cisplatin［J］.Int J Oncol，2006，28（1）：119－125.

［10］Kouvaraki MA，Rassidakis GZ，Tian L，et al.Jun activation domain－binding protein 1expression in breast cancer inversely correlates with the cell cycle inhibitor p27Kip1［J］.Cancer Res，2003，63（11）：2977－2981.

［11］Liu X，Pan Z，Zhang L，et al.JAB1accelerates mitochondrial apoptosis by interaction with proapoptotic BclGs［J］.Cell Signal，2008，20（3）：230－240.

［12］Wang GL，Semenza GL.General involvement of hypoxiainducible factor 1in transcriptional response to hypoxia［J］.Proc Natl Acad Sci USA，1993，90（11）：4304－4308.

［13］Post DE，Van Meir EG.Generation of bidirectional hypoxia/HIF2responsive expression vectors to target gene expression to hypoxia cells［J］.Gene Ther，2001，56（8）：1801－1807.

［14］Tomoda K，Yoneda－Kato N，F(xiàn)ukumoto A，et al.Multiple functions of JAB1are required for early embryonic development and growth potential in mice［J］.J Biol Chem，2004，279（8）：43013－43018.

Investigation on human lung cancer cell A549 chemotherapeutic sensitivity regulated by JAB1 in anaerobic condition＊

Hu Mingdong1，Xu Jiancheng1△，Yang Yu1，Xu Jing1，Zhou Changxi2，Mao Mei3，Wang Yi1
（1.Institute of Respiratory Diseases of PLA，Xinqiao Hospital，Third Military Medical University，Chongqing400037，China；2.Department of Respiratory Diseases，General Hospital of PLA，Beijing100039，China；3.Department of Respiratory Diseases，Wuhan General Hospital of Guangzhou Military Command，Wuhan 430061，China）

ObjectiveTo find the way of improving the lung cancer chemotherapeutic sensitivity，we investigated whether the lung cancer A549cells introduced eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1－HRE－JAB1plasmid have the chemotherapeutic sensibility to Gemzar in anaerobic condition.MethodsWe first constructed an eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1－HRE－JAB1 driven by hypoxia response elements promoter.Then，the plasmid was introduced into lung cancer cell line A549.After that，chemotherapeutic drug such as Gemzar was used to treat the A549cells in anaerobic condition，and investigated that the normal control（A549），the empty vector group（A549＋pcDNA3.1－HRE）and the plasmid group（A549＋pcDNA3.1－HRE－JAB1）A549cells had chemotherapeutic sensitivity.qRT－PCR and Western blot was used to assay the mRNA and protein level of JAB1.Cell cycle and apoptosis of A549cells were also assayed according to flow cytometry.ResultsAccording to bi－enzyme digestion evaluation，obtained plasmid was pcDNA3.1－HRE－JAB1plasmid.The results showed that JAB1in the A549was overexpressed after the transfection of pcDNA3.1－HRE－JAB1compared with the normal control and the empty vector（P＜0.01）.The cell proliferation was arrested at G1phase and the cell apoptosis was significantly enhanced after the transfection（P＜0.01）.ConclusionJAB1overexpression significantly increase sensitivity of lung cancer cells to the chemotherapeutic drug Gemzar in anaerobic condition，which might provide an efficient strategy of improving the chemotherapeutic sensitivity of lung cancer or the other cancers.

A549cell；JAB1；drug resistance；Gemzar；chemotherapeutic sensitivity

book=2345,ebook=24

10.3969/j.issn.1671－8348.2012.23.001

A

1671－8348（2012）23－2345－03

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（30801366）?！?/p>

，Tel：（023）68755003；E－mail：xu822036＠sohu.com。

2011－10－09

2012－01－06）

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