反相高效液相色譜法測(cè)定苯酚溶液含量

柳雅君，夏維杰，張連成

(1.沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院特診科，110016;2.黑龍江省齊齊哈爾市藥品檢驗(yàn)所，161006)

苯酚溶液是由苯酚溶解于水而成的溶液，未添加抗氧化劑等其他物質(zhì);由于苯酚溶液易于氧化，所以配制的苯酚溶液應(yīng)密閉、避光、低溫保存。苯酚溶液是良好的消毒劑，用于醫(yī)院病房、手術(shù)室、公共場(chǎng)所的殺菌消毒，也可配制成低濃度溶液用于術(shù)前泡手消毒。苯酚收載于《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版[1]，其含量測(cè)定為容量分析法，方法繁瑣，重復(fù)性差。筆者在本實(shí)驗(yàn)建立測(cè)定苯酚溶液的反相高效液相色譜法[2]，該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，靈敏度高，分離度好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Agilent1100高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器，島津-2550型紫外分光光度計(jì)。

1.2 試藥苯酚對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào):100509-200902)，二次蒸餾水，0.2%苯酚溶液(規(guī)格:500 mL∶1 g，批號(hào):2010071，2010078，20100719，20100912，20100920，沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院制劑室制備)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件采用迪瑪Diamonsil-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動(dòng)相為水-甲醇(85∶25)，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，流速1.0 mL·min－1，進(jìn)樣量20 μL。柱溫30℃[3]，在本條件下苯酚對(duì)照品與樣品色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 空白溶劑(A)、對(duì)照品溶液(B)、供試品溶液(C)高效液相色譜圖1.苯酚

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液精密稱(chēng)取苯酚對(duì)照品20.21 mg，置100 mL棕色量瓶，加水至刻度，搖勻，濃度為0.2 mg·mL－1，作為對(duì)照溶液的儲(chǔ)備液。

2.2.2 供試品溶液精密量取批號(hào)為2010071的溶液10 mL(相當(dāng)于苯酚20 mg)，置100 mL棕色量瓶，加水至刻度，搖勻。精密量取5 mL，置100 mL棕色量瓶，加水溶解至刻度，搖勻。

2.2.3 空白溶劑的制備取生產(chǎn)線制劑用純化水(60～70℃)500 mL，置于產(chǎn)品用塑料瓶，加蓋、密封，存放10 d后使用。

2.3 線性關(guān)系考察精密量取苯酚對(duì)照溶液儲(chǔ)備液1.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，分別置100 mL棕色量瓶，加水至刻度，搖勻，按“2.1”項(xiàng)色譜條件各進(jìn)樣20 μL測(cè)定，測(cè)定苯酚峰面積，并以對(duì)照品的濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=28.625X－16.746，r=0.999 6。結(jié)果表明苯酚進(jìn)樣量在2～20 μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)精密量取3種濃度苯酚對(duì)照品溶液儲(chǔ)備液2.0，4.0，8.0 mL，置100 mL棕色量瓶，加水至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣5次。結(jié)果3種濃度的精密度RSD分別為1.00%，0.87%，1.20%。

2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)配制同一批(批號(hào):2010071)供試品溶液5份，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)定苯酚的含量，RSD為0.8%(n=5)。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一批供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件于0，4，6，8，12，24 h分別進(jìn)樣20 μL測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果RSD為1.2%，初步表明供試品溶液在不避光條件下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密量取已知含量的供試品溶液共9份，分別置于100 mL量瓶，精密加入“2.2.1”項(xiàng)對(duì)照品儲(chǔ)備液，相當(dāng)于供試品中已知含量的80%，100%，120%，各3份(精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液80，100，120 mL各3份)，置上述100 mL量瓶，加水至刻度，過(guò)濾，分別精密量取5 mL置100 mL量瓶，加流動(dòng)相至刻度，按“含量測(cè)定”項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算回收率。平均回收率為99.7%，RSD為0.81%。

2.8 樣品測(cè)定精密量取“2.2.1”項(xiàng)對(duì)照品儲(chǔ)備液5 mL，置100 mL量瓶，加水稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，測(cè)得結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 兩種方法下苯酚含量測(cè)定結(jié)果%

3 討論

原苯酚的含量測(cè)定采用容量分析法[3]，其結(jié)果與高效液相色譜法測(cè)定比較，偏差約0.2%。筆者在本實(shí)驗(yàn)建立了測(cè)定苯酚含量的高效液相色譜法。本方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，可更好地控制苯酚制劑的質(zhì)量。

由于苯酚遇光易氧化，使溶液顏色加深，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，所以實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)避光操作。

采用苯酚溶液紫外測(cè)定項(xiàng)下的波長(zhǎng);在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)色譜條件進(jìn)行了考察，最后通過(guò)色譜系統(tǒng)適應(yīng)性的幾個(gè)指標(biāo):理論板數(shù)、分離度對(duì)稱(chēng)因子等的要求，認(rèn)為以甲醇-水(85∶25)為流動(dòng)相時(shí)，其色譜分離效果較為理想。能充分滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)需求。

《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版收錄了苯酚的含量測(cè)定方法(容量分析法)，筆者在本實(shí)驗(yàn)建立測(cè)定其含量的高效液相色譜法，測(cè)定結(jié)果表明使用高效液相色譜測(cè)定苯酚的含量與容量分析法測(cè)定結(jié)果一致，且操作簡(jiǎn)便，專(zhuān)屬性強(qiáng)，可以有效控制其質(zhì)量。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:443.

[2]張慶合.高效液相色譜實(shí)用手冊(cè)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2008:269.

[3]樊彩梅，孫彥平.苯酚及其光催化降解中間產(chǎn)物的HPLC法同時(shí)測(cè)定[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2000，19(4):49－50.