大理地區(qū)散養(yǎng)戶豬偽狂犬病病毒野毒株感染的血清學(xué)分析＊

楊尚斌，高 洪，黃 慧，嚴(yán)玉霖，陳 岡，蔣 歡，高利波，趙 汝，李健含，李翠華

（1.云南省大理農(nóng)業(yè)學(xué)校，云南大理 671003；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南昆明 650201；3.云南巍山縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南巍山 672400）

偽狂犬?。≒seudorabie，PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabie virus，PRV）引起的包括多種家畜和野生動(dòng)物如豬、牛、羊、犬、貓、家兔、小鼠、水貂、狐等［1-2］發(fā)病的一種急性傳染病。豬是偽狂犬病病毒的貯存宿主，病豬、帶毒豬以及帶毒鼠類為本病重要傳染源［3］，同時(shí)PRV也是引起豬呼吸系統(tǒng)疾病綜合征的重要原發(fā)性病原之一［4］。豬感染PRV后其癥狀因感染日齡不同而異。發(fā)病仔豬常表現(xiàn)明顯的神經(jīng)癥狀，病死率100%，斷奶仔豬病死率為10%～20%；育肥豬常呈隱形感染，僅表現(xiàn)增重減慢等輕微癥狀，往往易被忽視；成年豬感染后多耐過，呈隱性感染，長(zhǎng)期帶毒排毒［5］；母豬則表現(xiàn)為返情、不發(fā)情、屢配不孕；妊娠母豬通常表現(xiàn)為流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎；公豬則常發(fā)生睪丸腫脹、萎縮等，種用性能降低或喪失。

本病最早于1902年由匈牙利學(xué)者Aujeszky發(fā)現(xiàn)［6］。我國(guó)自1948年首次報(bào)道此病以來，目前已有大約31個(gè)省市發(fā)生和流行此病，嚴(yán)重阻礙了我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展和對(duì)外貿(mào)易。西方發(fā)達(dá)國(guó)家相繼制定和啟動(dòng)了該病的根除計(jì)劃，取得了很好的成效，首先是英國(guó)和丹麥于20世紀(jì)80年代末宣布取得成功，接著荷蘭、比利時(shí)等歐洲國(guó)家基本實(shí)現(xiàn)豬偽狂犬病凈化，美國(guó)也于1989年開始啟動(dòng)為期10年的全國(guó)性凈化計(jì)劃，并取得階段性成果，現(xiàn)在美國(guó)的家豬已經(jīng)無偽狂犬病病毒野毒感染。該病在我國(guó)廣泛存在并引發(fā)巨大損失，我國(guó)一些省區(qū)和部分高級(jí)別大型豬場(chǎng)正積極啟動(dòng)豬偽狂犬病根除計(jì)劃。想在短時(shí)間內(nèi)凈化偽狂犬病不現(xiàn)實(shí)，但可以在一定時(shí)間內(nèi)以“豬場(chǎng)”為單位，配合現(xiàn)有的高效豬偽狂犬病gE基因缺失苗，通過檢測(cè)gE抗體逐步淘汰陽(yáng)性豬只，直至凈化豬偽狂犬病。

為了解大理地區(qū)散養(yǎng)戶中豬偽狂犬病病毒野毒感染情況，對(duì)大理地區(qū)30多個(gè)散養(yǎng)戶的112只不同年齡階段的生豬進(jìn)行了PRV血清學(xué)調(diào)查，以期為豬偽狂犬病的防控和凈化提供理論依據(jù)，以保障養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣本 2010年從大理及周邊地區(qū)的32個(gè)散養(yǎng)戶隨機(jī)采集豬血清樣品112份，其中11份來自廟街鎮(zhèn)，85份來自南詔鎮(zhèn)，16份來自彌城鎮(zhèn)，置-20℃冰柜中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 檢測(cè)試劑 豬偽狂犬gE鑒別ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自深圳市康百得生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)方法 間接ELISA方法，按照檢測(cè)試劑盒的說明書進(jìn)行操作，通過配制洗滌液，稀釋樣品，加樣，溫育，洗板，加酶結(jié)合底物，顯色，終止等操作步驟，最后于450nm處測(cè)定各孔的A值。

1.2.2 結(jié)果判定 以空白孔調(diào)零，當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照孔平均值A(chǔ)450≥0.4，陰性對(duì)照孔平均值A(chǔ)450≤0.1時(shí)試驗(yàn)成立。被檢血清樣品A450≥0.2時(shí)判為陽(yáng)性，A450＜0.2時(shí)判為陰性。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)分析 不同時(shí)間或不同分組間抗體陽(yáng)性率的比較采用Pearsonχ2檢驗(yàn)，以P＜0.05時(shí)差異顯著，P＜0.01差異極顯著，統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS10.0。

2 結(jié)果

2010年從大理地區(qū)散養(yǎng)戶豬群中共采集的112份血清樣本，通過間接ELISA方法檢測(cè)，檢出陽(yáng)性血清9份，陽(yáng)性率8.04%。

2.1 不同品種豬群PRV野毒感染情況

采集的112份血清樣本，其中杜雜豬血清55份，長(zhǎng)白豬血清57份。檢出杜雜豬PRVgE抗體陽(yáng)性血清2份，陽(yáng)性率為3.63%，長(zhǎng)白豬PRVgE抗體陽(yáng)性血清7份，陽(yáng)性率12.28%（表1）。

表1 不同品種豬群PRV野毒感染情況Table 1 The PRV wild virus infection in different pigs

2.2 不同年齡段豬群PRV野毒感染情況

采集的112份血清，其中6月齡～8月齡豬血清63份，9月齡～10月齡豬血清40份，10月齡以上豬血清9份。檢出6月齡～8月齡豬PRVgE抗體陽(yáng)性血清7份，陽(yáng)性率為11.11%，9月齡～10月齡豬PRVgE抗體陽(yáng)性血清2份，陽(yáng)性率5%，10月齡以上豬PRVgE抗體陽(yáng)性血清0份（表2）。

表2 不同年齡段豬群PRV野毒感染情況Table 2 The PRV wild virus infection in different age pigs

2.3 不同性別豬群PRV野毒感染情況

采集的112份血清，其中公豬血清62份，母豬血清50份。檢出公豬PRVgE抗體陽(yáng)性血清6份，陽(yáng)性率9.68%，母豬PRVgE抗體陽(yáng)性血清3份，陽(yáng)性率6%（表3）。

表3 不同性別豬群PRV野毒感染情況Table 3 The PRV wild virus infection in different gender pigs

3 討論

此次調(diào)查的采樣方式為隨機(jī)采樣，采樣豬只的年齡、性別和品種等均是根據(jù)該地區(qū)散養(yǎng)戶的情況隨機(jī)選取，沒有特別要求。結(jié)果顯示，大理地區(qū)散養(yǎng)戶豬群偽狂犬病病毒野毒陽(yáng)性率為8.04%，與王政等［7］對(duì)廣東惠州的6個(gè)縣（區(qū)）的67個(gè)豬場(chǎng)的1 419份豬血清中，偽狂犬病病毒野毒抗體陽(yáng)性檢出率5.43%接近，但低于冼瓊珍等［8］報(bào)道的廣東省9個(gè)地區(qū)豬場(chǎng)中的平均陽(yáng)性率為46.4%，衛(wèi)秀余等［9］對(duì)300多個(gè)豬場(chǎng)調(diào)查的陽(yáng)性率30.6%，這說明該地區(qū)散養(yǎng)戶豬偽狂犬病凈化效果良好。另外，結(jié)果還顯示長(zhǎng)白豬的陽(yáng)性率高于杜雜豬，6月齡～8月齡豬陽(yáng)性率稍高于9月齡以上豬，公豬陽(yáng)性率略高于母豬，此結(jié)果在某種程度上說明了該地區(qū)不同品種、不同年齡以及不同性別豬只對(duì)豬偽狂犬病病毒野毒易感情況的差異。然而，散養(yǎng)戶豬群和規(guī)?；i場(chǎng)豬群之間，在養(yǎng)殖規(guī)模、飼養(yǎng)模式、飼養(yǎng)環(huán)境等方面都存在著較多差異，而且該地區(qū)散養(yǎng)戶豬只的年齡一般都在6月齡以上，因此，此次調(diào)查與分析只顯示了大理地區(qū)散養(yǎng)戶豬群中豬偽狂犬病病毒野毒感染情況，但此調(diào)查對(duì)了解、監(jiān)測(cè)和指導(dǎo)該地區(qū)散養(yǎng)戶的養(yǎng)殖仍有一定的現(xiàn)實(shí)意義，做好豬偽狂犬病的防控和凈化工作是最終的目標(biāo)。

目前，我國(guó)已有多個(gè)省市先后報(bào)道該病，給我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失［10-11］。并且，豬感染偽狂犬病病毒后，免疫系統(tǒng)受到損害［12］，容易繼發(fā)感染其他疾病，如豬瘟［13］、豬繁殖與呼吸綜合征［14］等，給豬偽狂犬病的防控增加了難度，也給豬病防控提出了新的課題。偽狂犬病病毒屬于皰疹病毒，一旦感染就會(huì)終身帶毒，注射疫苗雖能減少其發(fā)病，但是不能完全阻止其感染和排毒，在應(yīng)激條件下（如密度過大、混群、轉(zhuǎn)欄、分娩等），潛伏的病毒就會(huì)被激活，反過來影響其他正常豬。豬病學(xué)第九版［15］指出PR控制的最終目標(biāo)是根除，標(biāo)記疫苗的應(yīng)用是免疫根除方案的一部分。參照國(guó)外應(yīng)用基因缺失苗來凈化豬偽狂犬病的成功經(jīng)驗(yàn)，對(duì)下屬的種豬場(chǎng)應(yīng)用熒光抗體、PCR、ELISA檢測(cè)技術(shù)和偽狂犬病病毒基因缺失弱毒苗及其他配套技術(shù)［16-17］，實(shí)施了豬偽狂犬病凈化計(jì)劃，經(jīng)過3年的工作，已取得初步效果。

根據(jù)此次調(diào)查結(jié)果，了解到該地區(qū)豬偽狂犬病凈化要采取一些特異性的措施：①最好做到自繁自養(yǎng)；②養(yǎng)種豬的散養(yǎng)戶，每頭種豬要進(jìn)行偽狂犬病病毒野毒抗體檢測(cè)，逐一淘汰帶毒種豬。同時(shí)跟蹤采用抗體檢測(cè)和經(jīng)過凈化后豬群生長(zhǎng)性能和繁殖性能的變化情況；③育肥散養(yǎng)戶，確保引進(jìn)陰性豬；④加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，做好生物安全措施，做好重要疫?。ㄘi瘟、豬繁殖和呼吸綜合征、日本腦炎、細(xì)小病毒病等）的免疫接種工作。

然而，該病還會(huì)通過老鼠、運(yùn)輸車輛等途徑傳播［16］。經(jīng)驗(yàn)證明，在實(shí)施偽狂犬病凈化時(shí)，除應(yīng)用基因缺失苗以及配套檢測(cè)技術(shù)外，生產(chǎn)管理中的全進(jìn)全出單向流動(dòng)和嚴(yán)格的消毒隔離、滅鼠工作等生物安全措施可有效地阻止病原在不同生產(chǎn)階段的豬群間傳播，再結(jié)合淘汰陽(yáng)性豬的措施，才能達(dá)到凈化的目的。

［1］ 邊傳周，王慧杰，陳 創(chuàng).豬偽狂犬病毒河南株的分離與鑒定［J］.河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005（3）：69-72.

［2］ Boelaert F，Deluyker H，Maes D，et a1.Prevalence of herds with young sows seropositive to pseudorabies（Aujeszky＇s disease）in Northern Belgium［J］.Prev Vet Med，1999，41（4）：239-255.

［3］ 孫 放，彭麗波.豬偽狂犬病的防控措施［J］.養(yǎng)豬技術(shù)顧問，2011（2）：144.

［4］ 倪 嬌，周緒斌，張馨玉，等.近期部分規(guī)?；i場(chǎng)豬偽狂犬病野毒抗體監(jiān)測(cè)情況調(diào)查［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2007，34（9）：201-203.

［5］ 殷 震，劉景華.動(dòng)物病毒學(xué)［M］.2版.北京：科學(xué)出版社，1997：44-45.

［6］ 李玉勇.豬偽狂犬病的診斷與防控［J］.中國(guó)畜禽種業(yè)，2011（2）：96.

［7］ 王 政，譚翼武，廖志歡，等.廣東省惠州地區(qū)2007年上半年豬場(chǎng)偽狂犬病野毒感染的血清學(xué)調(diào)查報(bào)告［J］.廣東畜牧獸醫(yī)科技，2007，32（6）：22.

［8］ 冼瓊珍，蔡明福，王淑敏，等.廣東部分地區(qū)中小型豬場(chǎng)豬偽狂犬病野毒感染的血清學(xué)調(diào)查［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2006，27（10）：81.

［9］ 衛(wèi)秀余，曹玉良.2007年豬病診斷回顧和2008年流行趨勢(shì)預(yù)測(cè)［J］.養(yǎng)豬，2008（2）：44.

［10］ 徐引弟，王治方，朱文豪，等.河南省規(guī)?；i場(chǎng)高熱綜合癥細(xì)菌性病原的分離鑒定［J］.河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（1）：116-118.

［11］ 胡 濤，崔保安，王 巖，等.偽狂犬病病毒Min-A株TK基因的克隆與序列測(cè)定［J］.河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2004（1）：112-114.

［12］ 馮敏燕.偽狂犬病防制的最新進(jìn)展［J］.國(guó)外獸醫(yī)學(xué)：畜禽傳染病，1990（1）：7-8.

［13］ 費(fèi)流芳，伍時(shí)達(dá)，吳 虹，等.豬瘟與偽狂犬病混合感染的防制［J］.中國(guó)獸醫(yī)科技，1995，33（4）：33.

［14］ Lglesias G，Trujano M，Lokensgard J，et al.Study of the potential involvemeng of pseudorabies virus in swine respiratory disease［J］.Can J Vet Res，1992，56（1）：74-77.

［15］ Barbara E S，Jeffery J Z，Sylvie D A，et al.豬病學(xué)［M］.9版.趙德明，張中秋，沈建忠，等，譯.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2008：475-476.

［16］ 姚若存，李林東.豬偽狂犬病凈化的做法與效果［J］.廣西畜牧獸醫(yī)，2008，24（1）：34-35.

［17］ Serena M S，Metz G E，Corva S G，et al.A differential ELISA based on recombinant immunodominant epitopes of the gE gene of SHV-1in a baculovirus-insect cell system to discriminate between pigs infected naturally with pseudorabies and vaccinated pigs［J］.J Virol Meth，2011，171（2）：388-393.