休眠期中華鱉消化器官中主要消化酶活性分布＊

吳紅松

（菏澤學(xué)院，山東菏澤 274015）

中華鱉（Trionyxsinensis）隸屬于龜鱉目（Testudinata）、鱉科（Trionychidae）、鱉屬（Trionyx），是我國重要的特種經(jīng)濟動物，有較高的食用價值和藥用價值。作為變溫動物，中華鱉對外界溫度變化十分敏感，溫度的高低會直接影響其運動與攝食。每年10月底至翌年4月初，當(dāng)水溫低于約15℃時，中華鱉潛入水底泥沙中冬眠，在此期間動物不攝食，代謝率降低，僅靠體內(nèi)積累的營養(yǎng)物質(zhì)維持較低的代謝過程［1］。體重損失10%～15% 。

近年來，對于中華鱉的研究，在免疫功能方面較多［2－4］，在鱉的疾病防治［5］、系統(tǒng)發(fā)育［6］及分子生物學(xué)［7］、組織學(xué)［8］方面也都有報道，但對中華鱉冬眠期消化道生理生化方面的研究少見報道。本文對中華鱉冬眠期消化酶的活性進行了初步探討，旨在豐富其消化道生理生化的研究內(nèi)容并為中華鱉人工飼料研制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

2010年1月底，自菏澤黃河養(yǎng)殖場購買6只4齡中華鱉，平均體重為672.25g。試驗過程中將中華鱉置于2.0m×1.5m×1.5m的飼養(yǎng)箱中飼養(yǎng)。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理及測定 試驗用中華鱉在室內(nèi)水族箱中休眠2d后取樣，斷頭殺死，取出胃、肝臟和腸道，測量胃、肝臟和腸pH。腸道從第1個回折點以前為前腸，最后1個回折點以后為后腸，其間為中腸。剔除肝臟和腸道周圍的脂肪和腸系膜等附著物，用去離子水沖洗腸道內(nèi)容物，用濾紙吸干。樣品稱重，加9倍體積的蒸餾水勻漿，4 000r／min離心15min，取上清液作為粗酶液，4℃保存、待測。在24h內(nèi)測定完畢。

胃蛋白酶活性的測定：胃蛋白酶采用福林－酚法測定。酶活力單位定義為：每毫克組織蛋白37℃每分鐘分解蛋白生成1μg氨基酸定義為1個胃蛋白酶活力單位。

淀粉酶活性的測定：淀粉酶采用碘－淀粉比色法測定。酶活力單位定義為：組織中每毫克蛋白在30℃與底物作用30min，水解10mg淀粉定義為1個淀粉酶活力單位。

脂肪酶活性的測定：脂肪酶采用甘油三酯乳化液水解法測定，酶活力單位定義為：在37℃條件下，每克組織蛋白與底物作用1min，每消耗1μmol底物定義為一個脂肪酶活力單位。

酶粗提取液中蛋白質(zhì)含量的測定：采用考馬斯亮藍法。

胃蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和蛋白質(zhì)含量的測定均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒測定方法進行。

1.2.2 數(shù)據(jù)處理 試驗所得數(shù)據(jù)采用SPSS10.0軟件進行單因素方差分析，用Duncan多重比較分析組間差異顯著性，所得數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 胃蛋白酶

由表1可知，中華鱉胃蛋白酶活性在腸中最高，胃次之，肝臟中最低，且各器官中差異顯著（P＜0.05）。腸中以中腸最高，前腸次之，后腸最低，但沒有顯著差異。蛋白酶在中華鱉不同消化器官中的分布，有利于增強消化、吸收各種蛋白質(zhì)的能力。

2.2 脂肪酶

由表1可知，腸道中脂肪酶的活性較胃、肝臟中高，但差異不顯著。腸中以中腸最高，后腸次之，前腸最低，且著差異顯著（P＜0.05），由此可以推測中華鱉腸道是消化、吸收脂類物質(zhì)的主要器官。

2.3 淀粉酶

從表1中可知，腸道中淀粉酶的活性較胃、肝臟中高，且差異顯著（P＜0.05）。在腸中以中腸最高，后腸次之，前腸最低，但差異不顯著?？梢姷矸勖冈谀c內(nèi)的消化作用較強，在胃中較弱。

表1 中華鱉不同消化器官中蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤）The activities of protease，lipase，amylase in different parts of digestive organs of Trionyx sinensis（±SD） U／min·g

表1 中華鱉不同消化器官中蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤）The activities of protease，lipase，amylase in different parts of digestive organs of Trionyx sinensis（±SD） U／min·g

注：＊代表組間差異顯著（P＜0.05）。Note：＊shows significant difference among groups（P＜0.05）.

活性酶Enzyme activity胃Stomach肝臟Liver前腸Foregut中腸Midgut后腸Hindgut胃蛋白酶活性Protease activity 490.353±70.920＊ 296.672±72.356＊ 774.407±99.733 822.075±210.614 691.751±165.902脂肪酶活性Lipase activity 166.409±31.627 184.867±41.910 452.507±33.742＊ 614.923±46.446＊ 481.786±44.379＊淀粉酶活性Amylase activity 0.125±0.022＊ 0.050±0.020＊0.140±0.021 0.178±0.024 0.146±0.033

3 討論

中華鱉脂肪酶活性在休眠期呈現(xiàn)，中腸＞后腸＞前腸＞胃，而非休眠期［6］呈現(xiàn)前腸＞ 中腸＞ 后腸＞胃，這可能因為低溫抑制休眠期中華鱉脂肪酶活性，而前腸酶活性受溫度影響較大。中華鱉蛋白酶活性在休眠期，中腸＞ 前腸＞后腸＞胃，非休眠期蛋白酶活性胃＞前腸＞中腸＞后腸［9］，休眠期淀粉酶中腸＞后腸＞前腸＞胃，而非休眠期幼鱉中淀粉酶活性前腸＞胃＞中腸＞后腸［10］。這可能由于低溫抑制休眠期中華鱉消化酶活性，其中胃中酶活性受溫度影響最大，而前腸次之?？梢?，環(huán)境溫度的改變將影響中華鱉消化酶的活力。天然水域中，中華鱉屬于典型的肉食性動物，其蛋白酶活性明顯高于其他肉食性魚類（如鱖魚、烏鱧）［11］，因而要求人工養(yǎng)殖時飼料有較高的蛋白質(zhì)含量。中華鱉消化系統(tǒng)中淀粉酶活性的存在，說明中華鱉依然具有消化吸收淀粉的能力。添加淀粉對中華鱉生長的影響值得進一步試驗研究。肝臟是消化酶生成的中心器官，它分泌機能的強弱直接影響中華鱉對食物的消化能力，但消化酶活性低。由試驗中可以看出，中華鱉的胃、肝、腸中含有蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等消化酶。且不同的消化酶在不同的消化部位，其活性不完全相同。

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