化瘀無糖顆粒制備工藝的篩選

劉向紅，陳金娜

(1山東大學(xué)齊魯醫(yī)院，濟(jì)南250012;2山東中醫(yī)藥大學(xué))

化瘀顆粒為山東大學(xué)齊魯醫(yī)院自制制劑，由人參、蒲公英、漏蘆、水蛭等十三味中藥組成，用于腫瘤術(shù)后及放化療后，具有化瘀解毒、鎮(zhèn)痛及增強(qiáng)機(jī)體免疫力等作用。為了擴(kuò)大適應(yīng)證，使其可用于糖尿病患者和糖耐量異常人群，2011年8月～2012年5月，我們在原制劑基礎(chǔ)上進(jìn)行一系列工藝改進(jìn)，研制出了化瘀無糖顆?！，F(xiàn)將其制備工藝研究報(bào)告如下。

1 主要儀器及藥品

高效液相色譜儀(6CE，美國Waters公司)、Waters 2996檢測器、Empower600色譜工作站、分析天平(CP2250，奧豪斯國際貿(mào)易有限公司)、876-Ⅰ型真空干燥箱(南通科學(xué)儀器廠)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(RE-52A，上海亞榮生化儀器廠)，貝利微粉機(jī)(BFMYT6B，濟(jì)南貝利粉技術(shù)工程有限公司)?？Х人釋φ掌?批號(hào)110885-200102，購自中國食品藥品檢定研究院)，糊精(東阿阿膠集團(tuán)，批號(hào)20110115)，阿斯巴甜(鄭州泰維生物技術(shù)有限公司)。均為藥用?；鲱w粒所含的十三味中藥材均由濟(jì)南藥業(yè)集團(tuán)購得，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院張學(xué)順主任藥師鑒定，均符合藥典規(guī)定。

2 方法與結(jié)果

2.1 化瘀無糖顆粒提取工藝的篩選 人參、水蛭制成超微粉，余蒲公英等11味中藥按傳統(tǒng)方法加水煎煮［1］。

2.1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 按處方比例稱取上述藥材9份，每份試驗(yàn)藥材重264 g。采用L9(34)正交試驗(yàn)法［2］(見表1)，對提取效果影響較顯著的因素［加水量(A)、煎煮次數(shù)(B)、煎煮時(shí)間(C)］進(jìn)行觀察，以咖啡酸含量和干膏得量(權(quán)重系數(shù)均為0.5，進(jìn)行加權(quán)求和計(jì)算綜合評(píng)分，滿分10分)作為指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

表1 L9(34)水提取工藝因素水平

2.1.2 咖啡酸含量測定 ①色譜條件:Luna C18色譜柱，以甲醇∶0.1%磷酸水溶液(30∶70)為流動(dòng)相等度洗脫，流速:1 mL/min。檢測波長為323 nm，柱溫25℃。理論板數(shù)按咖啡酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。②對照品溶液的制備:精密稱取于105℃干燥至恒重的咖啡酸5.06 mg置25 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲溶解，放冷并稀釋，得濃度為202.4 μg/mL的咖啡酸對照品儲(chǔ)備液。③供試品溶液的制備:精密稱取相當(dāng)于蒲公英原藥材0.75 g的藥材干膏粉，移至50 mL錐形瓶中，精密加5%甲酸的甲醇溶液10 mL，密塞，搖勻，稱重，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，取出，放冷，稱重，用5%甲酸的甲醇溶液補(bǔ)足失重，搖勻，離心(3 300 r/min，8 min)，取上清液，0.22 μm 微孔濾膜濾過，備用。④測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀測定。⑤線性關(guān)系考察:分別精密量取上述對照品溶液 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0 mL，加甲醇，得濃度為 10.12、20.24、40.48、60.72、80.96、121.44、202.40 μg/mL 的對照品溶液。精密吸取10 μL注入液相色譜儀中測定峰面積，以咖啡酸對照品的峰面積(Y)對進(jìn)樣量(X)進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程:Y=62 305X－37 581，r=0.999 9?？Х人嵩?10.12 ～202.40 μg 范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量數(shù)據(jù)用ˉx±s表示，數(shù)據(jù)比較采用方差分析。α=0.05。

2.3 化瘀無糖顆粒提取的正交試驗(yàn)結(jié)果 見表2、3。通過對正交試驗(yàn)結(jié)果直觀分析，各因素影響次序?yàn)锽(煎煮次數(shù))＞C(煎煮時(shí)間)＞A(加水量)。方差分析表明，B因素對綜合評(píng)分有顯著性影響，結(jié)合K值分析，確定最佳提取工藝為 A2B3C3，即加入10倍量的水，煎煮3次、2 h/次。

表2 化瘀無糖顆粒提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 綜合評(píng)分方差分析表

2.4 化瘀無糖顆粒提取工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果 稱取處方量藥材3份，按上述制備工藝進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果與正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符(見表4)，說明本提取工藝穩(wěn)定可行。

表4 化瘀無糖顆粒提取工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

2.5 顆粒成型工藝的篩選

2.5.1 浸膏粉的制備 稱取處方量藥材，按優(yōu)化所得工藝煎煮提取，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.30～1.35的清膏，60℃真空干燥得干浸膏，粉碎，過100目篩，加入人參、水蛭超微粉，混勻，備用。

2.5.2 樣品的制備 將上述浸膏粉與糊精、阿斯巴甜混合均勻，干法［3，4］制粒(設(shè)備參數(shù):送料變頻器速率22.0、壓片變頻器轉(zhuǎn)速20.5、制粒變頻器速率21.0)、整粒、分裝即得。

2.5.3 輔料用量的選擇 選用糊精［5，6］作為賦型劑。取上述干浸膏粉分別加入5%、10%、15%糊精與不加糊精的干浸膏粉分別干法制粒，觀察顆粒的成型性、吸濕性、溶化性［7，8］。

對這3項(xiàng)指標(biāo)根據(jù)其對顆粒劑質(zhì)量評(píng)價(jià)的作用綜合評(píng)分(權(quán)重系數(shù)分別為 0.5、0.25、0.25)，總分為10分。詳見表5。由表5可知10%糊精為最佳用量。

表5 不同比例糊精制化瘀無糖顆粒質(zhì)量評(píng)價(jià)情況

2.5.4 顆粒流動(dòng)性的測定 用休止角［8，9］來衡量，采用固定漏斗法［10］，即將3只漏斗串聯(lián)并固定于水平放置的坐標(biāo)紙上適宜高度處，使漏斗下口距坐標(biāo)紙的距離為H，小心地將樣品沿漏斗壁倒入最上面的漏斗中，直到最下面漏斗藥粉的圓錐體尖端接觸到漏斗口為止，此時(shí)由坐標(biāo)紙測出圓錐體底部的直徑R，計(jì)算出休止角(tgα=2H/R)。每個(gè)批次測定3次，求其均值。予5批樣品測定，休止角均值分別為28.07°、28.39°、28.72°、28.72°、28.39°，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.96%，表明顆粒流動(dòng)性均較好。

2.6 矯味劑用量的篩選 處方中含水蛭原粉，具腥味，且提取物有一定的苦味，故選用阿斯巴甜［11，12］加以矯味，比較阿斯巴甜用量分別為粉末總量0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%時(shí)的口感，結(jié)果表明阿斯巴甜用量為0.3%時(shí)甜度適宜，口感佳。

3 討論

化瘀顆粒為臨床經(jīng)驗(yàn)方，功效扶正益氣，化瘀去毒。腫瘤術(shù)后及放化療后，機(jī)體元?dú)獯髠?，五臟俱虛，方中人參苦甘而溫，大補(bǔ)元?dú)?、補(bǔ)脾益肺;蒲公英清熱解毒、消腫散結(jié)，可清尚存瘤毒;佐以水蛭等逐瘀行氣、軟堅(jiān)散結(jié)之品，可消瘤毒所致氣血瘀滯，諸藥合用共奏扶正祛邪之效。用于各種腫瘤防治及放療化療、腫瘤術(shù)后的輔助治療，臨床應(yīng)用多年療效確切。

原化瘀顆粒以蔗糖為輔料，易潮解變質(zhì)，不宜久存;且蔗糖具有較高生物活性，能誘發(fā)胃炎、齲齒、糖尿病及肥胖，不宜用于年老及禁糖患者。本試驗(yàn)在原制劑基礎(chǔ)上進(jìn)行劑型改革，研制出化瘀無糖顆粒劑型，從而提高了藥物穩(wěn)定性，保證了臨床療效;改為無糖劑型后可減少輔料用量，便于攜帶和服用;擴(kuò)大了適應(yīng)證，解除了糖尿病患者和糖耐量異常的人群的用藥限制［14］。

本試驗(yàn)旨在研制其無糖劑型，以擴(kuò)大適應(yīng)證，故未改變提取溶媒。因其君藥人參以原粉入藥，臣藥中以蒲公英為主藥，故選擇咖啡酸作為含量測定指標(biāo)結(jié)合干膏量的綜合評(píng)分篩選提取工藝。根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果化瘀無糖顆粒最佳提取工藝條件為A2B3C3，即加10倍量水，煎煮3次，每次2 h。

干法制粒具有輔料用量少、成本低、工藝簡單、周期短、污染小等優(yōu)點(diǎn)，適用于中藥顆粒劑及片劑的制備，試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)干浸膏粉直接制顆粒成型性尚可，但吸濕性較強(qiáng)易粘連軋輪，故需要加入輔料;在輔料選擇方面，考慮到微晶纖維素水溶性較差、乳糖成本太高、淀粉用量大，故我們選用糊精作為賦型劑。

通過對本顆粒成型工藝的篩選發(fā)現(xiàn)，糊精用量為干浸膏量的10%時(shí)顆粒的成型性、吸濕性、溶化性均優(yōu)于其他比例;阿斯巴甜用量為粉末總量的0.3%時(shí)甜度適宜。

總之，工藝驗(yàn)證試驗(yàn)表明加10倍量水煎煮3次，每次2 h;糊精用量為干浸膏量的10%，阿斯巴甜用量為粉末總量的0.3%，采用干法制粒工藝制得的化瘀無糖顆粒各質(zhì)量指標(biāo)均符合《中國藥典》2010年版規(guī)定。因此，采用本試驗(yàn)篩選所得工藝可成功制備化瘀無糖顆粒，且該制備工藝穩(wěn)定可行。

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