蠅蛆復(fù)合發(fā)酵蛋白替代魚粉對彭澤鯽的生長性能和肝臟功能的影響

西南大學(xué)動物科技學(xué)院水產(chǎn)系 郭玉陽 羅 莉＊陳任孝 朱根廷

新希望集團(tuán)技術(shù)研發(fā)中心 羅 浩 李洪琴

蠅蛆復(fù)合發(fā)酵蛋白 （fermented maggot protein，F(xiàn)MP）是將集中孵化的幼蛆搭配其他蛋白原料，在適宜條件下與特定微生物共生培養(yǎng)而得到的一種復(fù)合發(fā)酵蛋白，該蛋白含有大量游離氨基酸、多肽及其他未知促生長因子。本試驗(yàn)以FMP替代彭澤鯽飼料中魚粉，研究其對彭澤鯽的生長性能和肝臟功能的影響，以期科學(xué)評價FMP的替代效果，為FMP替代魚粉的應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計及日糧 根據(jù)鯽魚的營養(yǎng)參數(shù)，以魚粉、豆粕、小麥、米皮糠等為主要原料配制基礎(chǔ)日糧，日糧組成及營養(yǎng)水平見表1（張萍等，2001）。試驗(yàn)日糧以6%、10%和16%的FMP等量替代基礎(chǔ)日糧中的魚粉，相當(dāng)于替代魚粉總量的37.5%、62.5%和100%，分別為M-6%組、M-10%組和M-16%組。預(yù)處理后的原料粉碎過60目篩，按配方稱重后均勻混合，擠壓成粒徑為1.5 mm，風(fēng)干成水分含量為11%的顆粒飼料，置于-18℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)魚與飼養(yǎng)管理 彭澤鯽購自重慶市北碚區(qū)歇馬漁場，在室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行養(yǎng)殖試驗(yàn)。挑選體格健壯，體重（9.00±0.50）g的鯽魚，用基礎(chǔ)飼料馴養(yǎng)15 d，待攝食正常后開始正式試驗(yàn)。生長試驗(yàn)分為4個組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù) 50 尾魚，每天投喂 4 次（8∶00、11∶30、15∶00、18∶30），日投喂量為體重的3% ～5%，根據(jù)試驗(yàn)魚的增重情況，每隔10 d調(diào)整一次投飼率。每個試驗(yàn)桶容積330 L（有效體積）。飼養(yǎng)期間水溫22～28℃，溶解氧 ＞8.0 mg/L，氨氮含量 ＜0.10 mg/L，pH 6.6～7.0，亞硝酸鹽＜0.1 mg/L。正式試驗(yàn)期56 d。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）%

1.3 樣品采集與制備 試驗(yàn)前取30尾魚作為初始樣本，每組取100 g飼料待測。試驗(yàn)結(jié)束，試驗(yàn)魚禁食24 h，測定每缸魚的總重，記錄飼料投喂量。并從每重復(fù)組隨機(jī)取出15尾魚，立即于冰盤上解剖，取出腸道和肝臟，分別稱重后剪碎，按1∶9（g：mL）加入魚用生理鹽水（4 ℃），迅速轉(zhuǎn)入玻璃勻漿器勻漿（勻漿過程在冰浴環(huán)境中進(jìn)行），將勻漿液離心（4 ℃，3500 r/min）15 min，取上清液即得粗酶液，置-80℃超低溫冰箱中冷凍保存，用于腸道和肝臟指標(biāo)的測定。

1.4 測定指標(biāo)及測定方法

1.4.1 試驗(yàn)原料和飼料樣品的分析 試驗(yàn)原料和飼料樣品的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分含量按國際標(biāo)準(zhǔn)方法（AOAC，1995）測定。氨基酸采用酸水解法測定，由于色氨酸在酸水解過程中被破壞，未測定到，所用儀器為日立835-50型氨基酸自動測定分析儀。

1.4.2 生長性能指標(biāo)

式中，W0為魚初始尾均重 /g；Wt為魚終末尾均重 /g；F為平均攝食飼料總量/g。

1.4.3 腸道消化酶活性的測定 蛋白酶活性采用福林-酚法測定（中山大學(xué)生物系，1979）；淀粉酶活性采用淀粉-碘顯色法測定 （上海市醫(yī)學(xué)化驗(yàn)所主編，1979）；脂肪酶活性采用聚乙烯醇橄欖油乳化液水解法測定（中山大學(xué)生物系，1979）。

1.4.4 肝胰臟常規(guī)指標(biāo)的測定 肝臟常規(guī)指標(biāo)均采用南京建成生物研究所研制的相應(yīng)試劑盒和752型分光光度計測定。谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）活性采用賴氏法測定；γ-谷氨酰氨轉(zhuǎn)移酶（γ-GT）和堿性磷酸酶（AKP）活性采用比色法測定；超氧化物歧化酶（SOD）活性采用黃嘌呤氧化酶法測定；丙二醛（MDA）含量采用TBA法測定。

1.5 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因子方差分析 （One-way ANOVA），同時進(jìn)行Duncan’s多重比較，P＜0.05為差異顯著，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果

2.1 不同比例FMP替代魚粉對彭澤鯽生長性能的影響 由表2可知，對照組彭澤鯽增重率和飼料利用率均最高，各試驗(yàn)組隨替代比例升高呈下降趨勢，與對照組相比均差異顯著（P＜0.05），增重率分別比對照組降低5.88%、10.62%和13.74%，飼料系數(shù)分別較對照組提高10%、18.33%和20%。試驗(yàn)魚成活率均為100%。

2.2 不同比例FMP替代魚粉對彭澤鯽腸道消化酶活性的影響 由表3可知，F(xiàn)MP的替代提高了彭澤鯽的腸道脂肪酶活性，降低了腸道蛋白酶和淀粉酶活性。其中，M-6%組的腸道脂肪酶活性與對照組差異不顯著（P＞0.5）；其他各組與對照組均差異顯著 （P＜0.05），M-10%組和M-16%組分別較對照組提高27.77%和39.97%。

表2 FMP替代魚粉對彭澤鯽生長性能的影響

表3 FMP替代魚粉對彭澤鯽腸道消化酶活性的影響

2.3 不同比例FMP替代魚粉對彭澤鯽肝臟功能的影響

2.3.1 FMP對彭澤鯽肝臟功能常規(guī)指標(biāo)的影響由表4可知，隨FMP替代比例的增加彭澤鯽肝臟中GOT和GPT活性呈下降趨勢，各替代組與對照組相比差異顯著 （P＜0.05），GPT/GOT比值呈下降趨勢，但M-6%組與對照組差異不顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)組γ-GT活性均顯著低于對照組（P＜0.05），且呈下降趨勢；AKP活性逐漸降低，各替代組中M-6%組值最高。

表4 FMP替代魚粉對彭澤鯽肝臟功能指標(biāo)的影響

2.3.2 FMP對彭澤鯽肝臟抗氧化能力指標(biāo)的影響 由表5可知，各試驗(yàn)組SOD活性均低于對照組，隨著替代比例的增加，替代組肝臟SOD活性逐漸升高，其中M-16%組SOD活性與對照組差異不顯著（P＞0.05）；肝臟MDA含量先升高后降低，各組間差異顯著（P＜0.05）。

3 討論

表5 FMP替代魚粉對彭澤鯽肝臟抗氧化能力的影響

魚體對蛋白質(zhì)的利用與氨基酸的種類、含量及平衡有關(guān)（劉超等，2002；張滿龍和鄧?yán)恚?002；Tesseraud等，1996）。研究表明，氨基酸平衡能提高動物對蛋白質(zhì)和氨基酸的利用率，促進(jìn)動物生長，節(jié)約飼料蛋白質(zhì)資源，減少含氮物質(zhì)對環(huán)境的污染（李桂梅等，2010）。本試驗(yàn)日糧配方的配制，通過補(bǔ)充包膜氨基酸僅平衡了試驗(yàn)日糧的賴氨酸和蛋氨酸含量，而魚粉是公認(rèn)的氨基酸平衡性最好的動物蛋白源，作為替代蛋白原的FMP與魚粉的氨基酸模式相差較大（表6），隨著替代魚粉比例增大，氨基酸不平衡的缺陷越明顯，故而彭澤鯽的生長性能逐漸下降。

表6 FMP和魚粉的營養(yǎng)成分比較 %

消化與吸收是魚類獲取營養(yǎng)物質(zhì)與能量的基本途徑，這一過程主要由消化酶對食物進(jìn)行化學(xué)性消化來完成。國內(nèi)外學(xué)者對鱖魚 （錢國英，1998）、黃鱔（楊代勤等，2004）、胡子鯰（Uys 和Hecht，1987）、鯉（Ragyanszki，1980）研究表明，魚類攝取的食物對體內(nèi)消化酶分泌有較大的影響，消化道內(nèi)存在的食物種類與魚類消化酶的分泌數(shù)量及種類有一定相關(guān)性。隨著FMP替代魚粉比例的增加，彭澤鯽的腸道蛋白酶活性和淀粉酶活性下降，可能與FMP在發(fā)酵過程中使用了消化率低于魚粉的其他蛋白原料有關(guān)，且其他餅粕類蛋白原料中抗?fàn)I養(yǎng)因子并沒有通過發(fā)酵完全去除。脂肪酶活性的升高機(jī)制和影響目前尚不清楚，需進(jìn)一步的研究。

正常情況下機(jī)體自由基的產(chǎn)生與清除處于一種動態(tài)平衡，當(dāng)自由基產(chǎn)生過多而清除物質(zhì)過少時，就會對機(jī)體造成氧化損傷（Sies，1997）。 SOD對體內(nèi)自由基的清除具有重要作用，其含量可以反映機(jī)體對自由基的清除能力 （Fattman等，2003）；MDA的含量可反映自由基的產(chǎn)生量和生物膜的損傷程度（Traystman等，1991）。本試驗(yàn)中，隨著FMP替代魚粉的比例增加，彭澤鯽肝臟自由基清除能力先下降后升高，這可能與蠅蛆發(fā)酵蛋白在發(fā)酵中獲得的其他有益生長因子，如益生菌、游離氨基酸或功能性小肽等有關(guān) （沈文英等，2011；王炳祥等，2011；王一娟等；2011）。 當(dāng) FMP的替代量增加時，日糧中所含的有益生長因子也相應(yīng)增多，故而表現(xiàn)出肝臟抗氧化能力先下降后升高的現(xiàn)象。

GPT和GOT是機(jī)體最重要的兩種轉(zhuǎn)氨酶，廣泛分布于各組織器官，肝臟是GOT含量最高的組織，肝臟中GPT的含量也很高，僅次于心臟。這兩種酶在機(jī)體蛋白質(zhì)和氨基酸代謝中起重要作用，其活性與氨基酸代謝強(qiáng)弱有關(guān)（李桂梅等，2010）。γ-GT參與谷胱甘肽循環(huán)，生理作用主要是參與蛋白質(zhì)的合成，并控制組織谷胱甘肽水平，攝取血漿中的谷氨酸以供合成蛋白質(zhì)之用，其活性的強(qiáng)弱可反應(yīng)機(jī)體蛋白質(zhì)代謝的強(qiáng)度（王繼貴，1996）。本試驗(yàn)中各替代組的肝臟GOT、GPT和γ-GT活性下降表明氨基酸代謝降低，蛋白質(zhì)分解升高，不利于氮在體內(nèi)的蓄積，在生產(chǎn)中即表現(xiàn)為體增重下降。

AKP可以催化各種含磷化合物水解，在動物機(jī)體的骨化，營養(yǎng)的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)與利用，解毒體系和免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用（孫靜秋等，2007；He和Sun，1992）。本試驗(yàn)中彭澤鯽肝臟AKP活性升高后下降，可能是FMP中某些有益生長因子的作用，提高了彭澤鯽代謝及免疫力；也可能是受有毒物質(zhì)誘導(dǎo)，肝臟內(nèi)AKP的合成出現(xiàn)生理補(bǔ)償現(xiàn)象，而隨劑量增加，肝臟無法適應(yīng)，AKP活性隨之下降，與一些魚類的毒性試驗(yàn)結(jié)果類似（孔祥會等，2007）。

GPT/GOT比值在臨床上可作為評判肝炎病人肝纖維化和肝硬化的一個獨(dú)立的指標(biāo)，其比值隨肝病病程變長、病程加重而升高（傅淑艷，2002；Sheth等，1998）。本試驗(yàn)中，雖然各檢測指標(biāo)與對照組相比有高有低，但并不能說明彭澤鯽肝臟受一定損傷或有病理變化，其可能是在正常范圍內(nèi)。至于魚類各項(xiàng)檢測指標(biāo)的參考范圍及評價標(biāo)準(zhǔn)尚有待進(jìn)一步研究。

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