宮頸鱗癌中survivin的表達及相關(guān)性研究

張蕓中，葉世勤，晏 紅

(1.蘭州大學(xué)第二醫(yī)院婦科;2.蘭州大學(xué)第二醫(yī)院病理科，蘭州 730000)

survivin是近年新發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤特異性凋亡抑制蛋白，具有抑制凋亡效應(yīng)蛋白酶caspase活性、參與細(xì)胞周期調(diào)控及調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂等多種生物學(xué)作用，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。Ki67是細(xì)胞增殖必不可少的非組蛋白，可反映腫瘤細(xì)胞增殖程度和所處周期，被認(rèn)為是一種準(zhǔn)確可靠的檢測細(xì)胞增殖狀態(tài)的方法。VEGF是一種內(nèi)皮細(xì)胞選擇性生長因子，在人類多種腫瘤中過度表達促進腫瘤組織血管生成，與腫瘤的侵襲性生長有關(guān)。本研究采用免疫組化SP法檢測宮頸鱗癌中survivin、Ki67及VEGF的表達，探討survivin與增殖活性的關(guān)系及其與VEGF在宮頸鱗癌發(fā)生中的作用。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本 選擇2008年3月—2011年4月我院病理科經(jīng)活檢和手術(shù)切除宮頸組織標(biāo)本蠟塊84例，其中具有完整臨床病理資料的宮頸鱗癌46例，患者年齡27～72歲，平均47.8歲。根據(jù) FIGO(1995年)臨床分期標(biāo)準(zhǔn):Ⅰa期12例，Ⅰb期15例，Ⅱa期13例，Ⅱb期6例。高分化6例，中分化21例，低分化9例，所有病例術(shù)前均未行放化療。17例上皮內(nèi)瘤樣變(CIN)組織，慢性宮頸炎組織21例。全部標(biāo)本均經(jīng)組織病理學(xué)確診，10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片。

1.2 方法 采用免疫組化SP法染色，按試劑盒說明方法操作。用已知的陽性切片作陽性對照，用PBS代替一抗作為空白對照。

1.3 結(jié)果判斷 以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色著色為survivin和VEGF陽性標(biāo)記。每張切片高倍鏡下選取10個高倍視野，每個高倍視野計數(shù)100個瘤細(xì)胞。每例陽性細(xì)胞數(shù)10% ～50%為(+)，50% ～75%為(++)，＞75%為(+++)。Ki67表達以細(xì)胞核有棕黃色顆粒為陽性，隨機計數(shù)500個腫瘤細(xì)胞中Ki67陽性細(xì)胞所占百分率為Ki67指數(shù)(Ki67 index，KI)以代表增殖活性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件包，采用 χ2檢驗、t檢驗、Fisherman精確概率檢驗及Spearman等級相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 survivin、Ki-67、VEGF 在不同宮頸組織中的表達 survivin，VEGF的陽性染色均主要定位于細(xì)胞質(zhì)或膜上，為粗細(xì)不一的棕黃色顆粒，陽性細(xì)胞呈彌漫性分布。偶可見survivin胞核著色，少數(shù)切片中血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF呈陽性顯色。從慢性子宮頸炎、CIN到宮頸鱗癌，survivin，VEGF陽性表達率呈逐漸增高趨勢(P＜0.05)，見表1。Ki-67主要表達在細(xì)胞核內(nèi)，呈棕黃色顆粒狀。不同子宮頸組織中Ki-67平均指數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，見表1。

表1 survivin，Ki-67，VEGF在不同子宮頸組織中的表達

2.2 survivin、VEGF表達及KI與宮頸鱗癌臨床病理特征的相關(guān)性 survivin、VEGF表達及KI均與宮頸鱗癌的臨床分期顯著相關(guān)(P＜0.05)，與患者年齡無關(guān)(P＞0.05)。雖然VEGF表達在低分化腫瘤(77.8%)中高于高分化腫瘤(50.0%)，但不同分化程度的宮頸鱗癌組織中VEGF表達無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05)，見表2。

表2 survivin表達與宮頸癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性

27例survivin表達陽性的宮頸鱗癌組織中其Ki67平均指數(shù) (43.1±16.4)%，明顯高于19例survivin表達陰性的宮頸鱗癌 (22.3±17.5)% ，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

VEGF表達陽性宮頸鱗癌組織中，survivin的表達陽性率為71.0%，VEGF陰性表達者survivin陽性表達為33.3%，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。Spearman等級相關(guān)分析顯示，宮頸鱗癌組織中survivin與VEGF表達呈正相關(guān)(r=0.358，P＜0.05)。

3 討論

細(xì)胞增殖/凋亡平衡紊亂與細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤的進展密切相關(guān)，宮頸癌的發(fā)生是宮頸癌細(xì)胞增生、凋亡異常共同作用的結(jié)果。近年新發(fā)現(xiàn)的survivin是一種結(jié)構(gòu)獨特的IAP家族成員，通過直接或間接抑制凋亡效應(yīng)蛋白酶caspase-3、caspase-7活化來阻斷由凋亡基因和化療藥物等引起的細(xì)胞凋亡的過程［1］。與其它IAP分子不同，survivin還參與細(xì)胞周期的調(diào)控，調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂、促進細(xì)胞增殖，被認(rèn)為是第一個將抑制細(xì)胞凋亡與細(xì)胞惡變直接聯(lián)系起來的分子。研究表明survivin在大多數(shù)正常成人終末分化組織中不表達而在人類多種惡性腫瘤中廣泛表達，并且survivin的高表達與腫瘤患者預(yù)后不良及腫瘤對化療耐藥密切相關(guān)［2］。

本文資料中，宮頸癌組織中survivin的陽性表達率為58.7%，而且survivin表達與宮頸癌臨床分期及分化程度有關(guān)，即臨床分期愈晚，組織分級惡性程度越高，survivin陽性表達率愈高。表明survivin基因在腫瘤中存在穩(wěn)定表達，可能通過抑制惡性細(xì)胞凋亡參與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展，survivin基因表達預(yù)示腫瘤有較高的侵襲性和不良預(yù)后，在一定程度上反映了宮頸癌的惡性程度，具有一定的預(yù)后參考價值。

細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白Ki-67是一種存在于增殖細(xì)胞中的核抗原，能準(zhǔn)確反映細(xì)胞或組織的增殖活性，可用于評估腫瘤的惡性潛能。我們的研究證實survivin表達與宮頸癌細(xì)胞KI顯著相關(guān)，survivin表達陽性的宮頸癌組織其KI(43.1±6.4)%，明顯高于survivin表達陰性宮頸癌組織(22.3±7.5)%(P＜0.05)。提示survivin基因異常表達可能參與了宮頸癌細(xì)胞增殖的調(diào)控，具有促進宮頸癌細(xì)胞增殖的作用。survivin在細(xì)胞周期的G2/M期特異性表達［3］，這種細(xì)胞周期依賴性表達提示 survivin可能通過影響細(xì)胞周期參與增殖調(diào)控。Suzuki等［4］研究發(fā)現(xiàn)survivin依賴細(xì)胞增殖信號介導(dǎo)而進入核內(nèi)，與細(xì)胞周期依賴激酶 Cdk4結(jié)合，使 p21蛋白與Cdk4分離，分離后的 p21蛋白與線粒體的前Caspase-3相互作用，抑制Fas介導(dǎo)的凋亡。survivin與Cdk4相互作用還可導(dǎo)致Cdk2/CyclinE激活與Rb磷酸化，磷酸化的Rb蛋白失去對細(xì)胞生長的抑制作用，導(dǎo)致細(xì)胞失控性生長，打破了細(xì)胞增殖與凋亡平衡，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。

關(guān)于survivin基因在腫瘤中活化的調(diào)控機制，目前尚不清楚。有文獻報道［5］，在絲裂原VEGF的刺激下，血管內(nèi)皮細(xì)胞survivin的表達水平上調(diào)約16倍。進一步研究表明，內(nèi)皮細(xì)胞中重組survivin的表達可抑制caspase-3活性，從而抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織中survivin蛋白表達與VEGF蛋白表達密切相關(guān)，VEGF蛋白表達陽性者中，survivin的表達陽性率為71.0%(22/31)，15例VEGF陰性表達的宮頸癌中survivin陽性表達為33.3%(5/15)，兩者比較差異有顯著性(P＜0.05)。Spearman等級相關(guān)分析顯示，宮頸癌組織中survivin與VEGF表達呈顯著正相關(guān)(r=0.358，P ＜0.05)，提示二者之間存在一定的內(nèi)在聯(lián)系。同所有實體腫瘤一樣，宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移呈明顯的血管依賴性。當(dāng)腫瘤生長到一定體積，通過腫瘤細(xì)胞分泌多種血管生長因子，促進血管生成。一般認(rèn)為這些細(xì)胞因子中以VEGF最為重要，VEGF作為一種多功能細(xì)胞因子，不僅對血管生成有重要作用，還通過與腫瘤細(xì)胞表達的受體作用充當(dāng)自分泌和旁分泌生長的調(diào)節(jié)因子，調(diào)控腫瘤細(xì)胞某些基因的表達方式［6］。因此，我們推測:VEGF的表達上調(diào)可能直接或間接地參與survivin的基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成的調(diào)控，及其蛋白功能活化的過程，從而增加survivin的積累。而survivin的過度表達，使G2/M期點失控，細(xì)胞失去了正常增殖周期中凋亡開關(guān)的限制，可促使腫瘤細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化和增殖凋亡平衡失調(diào)，還可能作為腫瘤血管生成的調(diào)控因子參與腫瘤血管生成。Mesr等［7］發(fā)現(xiàn)，survivin反義寡核苷酸可抑制VEGF介導(dǎo)的血管保護作用，促進腫瘤血管生成過程中內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡和血管退行性改變。survivin作為一種新的IAP分子及其特異性表達的特點，在腫瘤基因治療中將具有良好的應(yīng)用前景。

目前關(guān)于survivin的研究尚處于初級階段，還有許多問題尚待闡明，如survivin基因表達的調(diào)控，survivin基因在腫瘤中的活化。Survivin與腫瘤耐藥性的關(guān)系，也有待進一步研究。Survivin與婦科惡性腫瘤的預(yù)后關(guān)系也需要在更大的樣本含量的研究中得以證實。以survivin為靶點的基因治療，國內(nèi)外報道都不太多，是目前研究的熱點。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，通過對survivin的深入研究必定有利于闡明腫瘤發(fā)病機制，并為腫瘤的基因治療提供理想的靶點。

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