RP-HPLC法測定天王補(bǔ)心丸中梓醇的含量

楊仕林，李小剛，謝云（.湖北陽新縣人民醫(yī)院，湖北 陽新 43500；.湖北中醫(yī)藥大學(xué)，武漢 430064）

天王補(bǔ)心丸是2010年版《中國藥典》（一部）收錄的中藥制劑，以丹參、當(dāng)歸、黨參、茯苓、五味子、地黃、酸棗仁（炒）等中藥為原料，經(jīng)粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻，泛丸，干燥而得，具有滋陰養(yǎng)血、補(bǔ)心安神之功效，用于心陰不足、心悸健忘、失眠多夢、大便干燥等。在其藥品標(biāo)準(zhǔn)中僅對五味子醇甲進(jìn)行了含量測定[1]，國內(nèi)有文獻(xiàn)報道該制劑中其他藥材主要成分的定量測定方法，如丹參素、酸棗仁皂苷A、丹酚酸B[2-4]，但對該制劑中地黃的主要成分梓醇的含量測定方法未見報道。為此，筆者采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法測定天王補(bǔ)心丸中梓醇的含量。

1 儀器與試藥

LC-10A型HPLC儀（日本島津公司）；BS124S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

梓醇對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號:808-9301）；天王補(bǔ)心丸（上海和黃藥業(yè)有限公司，規(guī)格:9 g，批號:A090606、A091003、A091108）；乙腈（色譜純，美國Fisher公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent-ZORBX SB-C18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流動相:乙腈-0.1%磷酸溶液（V/V）＝1∶99；流速:1.0mL·min－1；檢測波長:210 nm；柱溫40 ℃；進(jìn)樣量:20μL。在此色譜條件下，梓醇與相鄰峰的分離度均＞1.5，理論板數(shù)按梓醇峰計算為7300。色譜見圖1。

2.2 溶液的制備

圖1 高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品；C.陰性對照；1.梓醇Fig 1 HPLC chromatogramA.reference substance；B.the test；C.negative control；1.catalpol

2.2.1 對照品溶液的制備 取梓醇對照品適量，精密稱定，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成相當(dāng)于梓醇濃度為200.4μg·mL－1的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取天王補(bǔ)心丸10粒，研細(xì)，取約4.5 g，精密稱定，加甲醇50mL，稱定重量，置水浴上加熱回流1.5 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液10mL，濃縮至近干，殘渣用流動相溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，并用流動相稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按天王補(bǔ)心丸處方配比及制備工藝，取除地黃外的其他藥材，制得陰性樣品，再按“2.2.2”項(xiàng)下方法制得陰性對照溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

取梓醇對照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別精密量取對照品溶液1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10mL，置于100mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，制得系列對照品溶液。精密吸取系列對照品溶液各20μL，注入HPLC儀。以梓醇濃度（X，μg·mL－1）為橫坐標(biāo)，其峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A＝3821.4X－832.7（r＝0.9993）。結(jié)果表明，梓醇檢測濃度在2.004～20.046μg·mL－1范圍內(nèi)與其峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

取同一份梓醇對照品溶液（濃度為10.02μg·mL－1）適量，精密吸取20μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，注入HPLC儀，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定峰面積。結(jié)果，RSD＝0.7%，表明該法的精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液適量，分別于1、2、4、6、8 h測定梓醇的峰面積。結(jié)果，峰面積測定值基本不變，RSD＝1.4%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一樣品（批號:A090606）適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法平行制備5份供試品溶液，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定峰面積。結(jié)果，樣品中每丸梓醇的平均含量為1.1mg，RSD＝1.7%，表明該方法具有較好的重復(fù)性。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

取已測含量的天王補(bǔ)心丸適量（批號:A090606），研細(xì)，取2.5 g，精密稱定，分別精密加入梓醇對照品溶液（濃度為50.1μg·mL－1）4.0、5.0、6.0mL，加甲醇至 50mL，稱定重量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下測定含量，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.8 樣品含量測定

取3批樣品（批號:A090606、A091003、A091108）適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取20μL，注入HPLC儀，記錄峰面積。另取梓醇對照品溶液（濃度為10.02μg·mL－1）適量，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，按外標(biāo)法以峰面積計算天王補(bǔ)心丸樣品中梓醇的含量。結(jié)果，3批樣品中每丸梓醇的平均含量分別為1.1、0.98、0.98mg。

3 討論

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

3.1 色譜條件的優(yōu)化

梓醇的最大吸收波長為210 nm，故選擇210 nm波長作為檢測波長。考慮到甲醇溶劑的末端吸收，試驗(yàn)僅選擇了乙腈作為強(qiáng)溶劑。同時，比較了2種流動相乙腈-0.1%磷酸溶液（V/V）＝1∶99和乙腈-水（V/V）＝1∶99，結(jié)果前者的分離效果較佳，峰形對稱，干擾較少。雖然在8min后還有許多極性較小的物質(zhì)出峰，但對本試驗(yàn)未見影響。

3.2 提取方式

筆者考察了加熱回流提取、超聲提取2種方式，結(jié)果前者提取率較后者高出近20%。此外，還對加熱回流的時間和次數(shù)進(jìn)行了研究，結(jié)果加熱回流提取1次、時間1.5 h即可基本提盡樣品中的梓醇。

綜上所述，本文建立的方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，加樣回收率符合要求，可用于天王補(bǔ)心丸的質(zhì)量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:515.

[2]何新榮，劉 萍，孫 艷.HPLC-ELSD測定天王補(bǔ)心丸中酸棗仁皂苷A的含量[J].中國醫(yī)院用藥評價與分析，2011，11（10）:910.

[3]孫 裕，王蓮萍，楊玉華.HPLC法測定天王補(bǔ)心丸（濃縮丸）中丹酚酸B的含量[J].衛(wèi)生職業(yè)教育，2010，28（2）:91.

[4]楊 芳.RP-HPLC法測定天王補(bǔ)心丸中丹參素含量的研究[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2008，22（6）:105.