HPLC法同時(shí)測定布洛芬口服液體制劑中布洛芬、苯甲酸鈉的含量

李海燕，劉治安，莫炫永，尹慶和，廖戈瑩（.中山大學(xué)附屬東華醫(yī)院藥學(xué)部，廣東 東莞 530；.東莞市國藥質(zhì)量檢測中心，廣東 東莞 5300）

布洛芬口服液體制劑是臨床常用的解熱鎮(zhèn)痛藥，適用于急性上呼吸道感染等引起的小兒發(fā)熱，也可用于緩解兒童輕至中度疼痛，如頭痛、關(guān)節(jié)痛、偏頭痛、牙痛、肌肉痛、神經(jīng)痛、痛經(jīng)等癥。其處方中還含有防腐劑苯甲酸鈉，它在食品和藥品中可作為防腐劑，但過量攝入會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生一定的毒性，尤其對(duì)于兒童更需要注意。不同劑型的布洛芬口服液體制劑所含的苯甲酸鈉不同。高效液相色譜（HPLC）法是測定苯甲酸鈉的常見方法[1-3]。目前，HPLC法同時(shí)測定布洛芬口服液體制劑中布洛芬、苯甲酸鈉含量的方法尚未見報(bào)道。筆者在查閱文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上建立了HPLC法同時(shí)測定布洛芬口服液體制劑中布洛芬、苯甲酸鈉含量的方法，方法操作簡單，結(jié)果可靠，重復(fù)性好，可為布洛芬口服液體制劑的質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型RRLC高分離度快速HPLC儀，包括G1314B VWD SL紫外檢測器、G1312B Bin Pump SL型二元泵、G1316B TCC SL型柱溫箱、G1329B ALS SL型標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)進(jìn)樣器（美國安捷倫科技有限公司）；KQ5200型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

布洛芬對(duì)照品（使用前不需干燥處理，中國食品藥品檢定研究院，批號(hào):100179-201105）；苯甲酸鈉對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào):100433-200301）；乙腈、甲醇為色譜純（德國默克公司）；水（屈臣氏蒸餾水經(jīng)0.2 μm微孔濾膜過濾）；十二烷基磺酸鈉（西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司，含量≥99%，批號(hào):106437）；樣品為上市的布洛芬口服液體制劑（共20種規(guī)格，包括了糖漿劑、口服液、滴劑、口服混懸劑）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

采用外標(biāo)法測定。色譜柱:Waters XTerra?MS C18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流動(dòng)相:乙腈-0.5%十二烷基磺酸鈉-磷酸（V/V/V）＝520∶480∶1（流動(dòng)相在使用前需經(jīng)0.2 μm微孔濾膜濾過）；流速:1mL·min－1；檢測波長:230 nm；進(jìn)樣量:10μL；柱溫:30℃。以保留時(shí)間定性，峰面積定量。理論板數(shù)以苯甲酸鈉計(jì)可達(dá)4000以上；樣品中苯甲酸鈉峰與布洛芬峰及其他峰能夠達(dá)到分離度＞2，保留時(shí)間苯甲酸鈉為9.5min，布洛芬為11.4min，結(jié)果樣品中的其他組分對(duì)苯甲酸鈉和布洛芬的含量測定無干擾。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.樣品；B.苯甲酸鈉對(duì)照品；C.布洛芬對(duì)照品；1.苯甲酸鈉；2.布洛芬Fig 1 HPLC chromatogramsA.sample；B.sodium benzoate control；C.ibuprofen control；1.sodium benzoate；2.ibuprofen

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取苯甲酸鈉對(duì)照品10.13mg，置于100mL棕色容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成苯甲酸鈉濃度為101.3mg·L－1的對(duì)照品溶液。精密稱取布洛芬對(duì)照品12.52mg，置于25mL棕色容量瓶中，加流動(dòng)相適量超聲10min并稀釋至刻度，搖勻，制成布洛芬濃度為500.8mg·L－1的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取樣品適量，置于100mL棕色容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得含布洛芬濃度為0.5mg·L－1的供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例取不含布洛芬和苯甲酸鈉的其他成分，制成陰性樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備得陰性對(duì)照溶液。

2.3 專屬性考察

按處方量的比例稱取輔料，依“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定。結(jié)果，在布洛芬、苯甲酸鈉主峰處，輔料不干擾結(jié)果的測定。

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取布洛芬對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成濃度為每1mL中含布洛芬1.547mg的標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液。再精密量取1、2、3、4、5、6、7mL，置于 10mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定。以濃度（C）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A＝1650096C+77979（r＝0.9998）。結(jié)果表明，布洛芬檢測濃度在154.7～1829.0mg·L－1范圍內(nèi)與其峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密稱取苯甲酸鈉對(duì)照品適量，加水溶解并稀釋制成濃度為每1mL中含苯甲酸鈉1.031mg的標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液。再精密量取1、2、3、4、5、6、7mL，置于 25mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定。以濃度（C）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A＝1120056C+61979（r＝0.9996）。結(jié)果表明，苯甲酸鈉檢測濃度在41.24～288.6mg·L－1范圍內(nèi)與其峰面積積分值線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

分別取“2.4”項(xiàng)下布洛芬和苯甲酸鈉的標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果，布洛芬、苯甲酸鈉RSD分別為0.16%、0.55%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)的樣品適量，共6份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定含量。結(jié)果，布洛芬、苯甲酸鈉RSD分別為0.33%、0.54%，表明方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取布洛芬口服溶液制劑1瓶，加流動(dòng)相制成每1mL中約含布洛芬0.5mg的溶液，室溫下放置，分別于0、2、4、6、8 h取樣，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。結(jié)果，布洛芬、苯甲酸鈉的RSD分別為0.44%和0.79%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

分別配制3份樣品，加入一定量的低、中、高濃度對(duì)照品溶液，置于100mL容量瓶中，加流動(dòng)相適量，充分振搖，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5mL，置于10mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取10μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。結(jié)果，本品中2種成分的平均加樣回收率分別為99.40%、100.01%、100.54%（RSD%＝0.10%、0.28%、0.12%）和98.97%、99.03%、100.61%（RSD＝0.17%、0.12%、0.18%），詳見表1。

2.9 樣品含量測定

按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定20批樣品含量，結(jié)果本品20批含量測定均符合要求，苯甲酸鈉百分量在0.07%～0.30%的范圍內(nèi)，詳見表2。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1 Results of recovery tests（n＝9）

表2 樣品含量測定結(jié)果（n＝3）Tab 2 Content determination of samples（n＝3）

3 討論

解熱鎮(zhèn)痛藥口服液體制劑上市品種很多，大多含有布洛芬，且大多數(shù)試驗(yàn)都是只測定其中的1種或多種主要成分，有紫外分光光度法[4]，以HPLC法居多[5-8]。苯甲酸鈉在2010年版《中國藥典》（二部）[9]中有收載，含量測定采用雙相滴定法，操作比較煩瑣，且取樣量大。本品中苯甲酸鈉含量較低，采用雙相滴定法干擾較大，結(jié)果易出現(xiàn)誤差。但是，對(duì)于其中的布洛芬及苯甲酸鈉的同時(shí)檢測暫未有報(bào)道。筆者采用HPLC法同時(shí)測定布洛芬口服液體制劑中布洛芬與防腐劑苯甲酸鈉的含量，操作簡單，結(jié)果可靠，專屬性強(qiáng)，可為控制布洛芬口服液體制劑的質(zhì)量提供重要依據(jù)。

由布洛芬、苯甲酸鈉的紫外吸收?qǐng)D譜可知，2種成分在210、262 nm波長左右都有吸收，在210 nm波長處吸收度較高，但210 nm波長靠近末尾吸收，許多物質(zhì)在此都有吸收，容易產(chǎn)生干擾，故選擇230 nm波長作為含量的檢測波長。布洛芬不溶于水，苯甲酸鈉為水溶性物質(zhì)，筆者采用了甲醇-水系統(tǒng)，按照不同配比的流動(dòng)相溶解。為增加布洛芬溶解性及減少其他雜質(zhì)包括溶劑峰的干擾，最終確定以乙腈-0.5%十二烷基磺酸鈉-磷酸（V/V/V）＝520∶480∶1為流動(dòng)相。

雖然本次檢測的苯甲酸鈉百分量（0.07%～0.30%）都在國家允許范圍內(nèi)，但是同一制劑不同廠家相差較大。而其對(duì)于兒童的含量是否在允許范圍內(nèi)還值得商榷。建議國家有關(guān)部門針對(duì)同一制劑將苯甲酸鈉含量標(biāo)準(zhǔn)具體量化并列為檢測項(xiàng)目。

[1]關(guān)倩明.頭孢泊肟酯口服干混懸劑中苯甲酸鈉的HPLC測定[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2005，36（1）:35.

[2]陳文秋，王貴華，李 田，等.銀黃口服液中苯甲酸鈉和羥苯乙酯的定量分析[J].中國藥業(yè)，2005，14（9）:56.

[3]毛桂福.反相高效液相色譜法測定呋喃西林溶液中2組分的含量[J].中國藥房，2005，16（8）:622.

[4]王 平，肖昌錄，袁訓(xùn)賢.布洛芬緩釋片的制備及其體外釋放度考察[J].中國藥房，2011，22（9）:829.

[5]柏學(xué)敏，文麗麗，尹傳明.紫外分光光度法測定布洛芬片含量[J].黑龍江醫(yī)藥，2007，20（1）:4.

[6]趙 燁，陳 云，李小敏.HPLC法同時(shí)測定復(fù)方鋅布顆粒中馬來酸氯苯那敏和布洛芬的含量[J].江蘇藥學(xué)與臨床研究，2006，14（5）:307.

[7]歐陽春.反相高效液相色譜法測定布洛芬混懸液中布洛芬含量[J].中國藥業(yè)，2005，14（2）:41.

[8]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:120-121.

[9]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:1201-1202.