清遠(yuǎn)市腫眼肉雞病原診斷和藥敏試驗(yàn)

許華

摘要：廣東省清遠(yuǎn)地區(qū)３群肉雞臨床表現(xiàn)不同程度的腫眼、流鼻水等癥狀，臨床治療處理效果不理想。在3群病雞中各取病雞鼻竇腔分泌液進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)、革蘭氏和瑞氏染色，并對(duì)分離菌株進(jìn)行了玻片凝集和生化試驗(yàn)。結(jié)果表明，革蘭氏染色呈陰性，瑞氏染色呈藍(lán)色，油鏡下可見細(xì)菌呈短桿菌或球桿菌，兩極著色，３群分離株均與副雞嗜血桿菌Ａ型血清完全凝集反應(yīng)，與Ｂ和Ｃ型血清無凝集反應(yīng)，確定腫眼肉雞病原為Ａ型副雞嗜血桿菌。同時(shí)選用多種藥物研究了該病原菌的藥敏性，結(jié)果顯示，Ａ型副雞嗜血桿菌對(duì)頭孢噻呋、氟苯尼考和青霉素３種藥物均表現(xiàn)極敏。

關(guān)鍵詞：副雞嗜血桿菌；病原診斷；藥敏試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：Ｓ８５２．６１文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０12）04－0782-03

副雞嗜血桿菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｇａｌｌｉｎａｒｕｍ，ＨＰＧ）是引起雞上呼吸道疾病的一種致病菌，俗稱雞傳染性鼻炎，以鼻腔和鼻竇發(fā)炎、流鼻汁、臉部腫脹和眼結(jié)膜炎為主要特征。１９２０年，Ｂｅａｃｈ首先報(bào)道該病，Ｄｅｂｌｉｅｋｃ于１９３１年首次分離到了該病的病原菌［１］。本病呈世界性分布，主要引起產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋量下降，育成雞的生長發(fā)育緩慢，給養(yǎng)禽業(yè)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。我國從１９８０年起就有許多疑似該病的病例出現(xiàn)，馮文達(dá)［２］于１９８７年首先在北京分離到１株病原菌。２０１０年１１月，廣東省清遠(yuǎn)市某肉雞養(yǎng)殖合作社３群肉雞表現(xiàn)不同程度的腫眼、流鼻水癥狀，并有嚴(yán)重的呼吸道疾病，病雞表現(xiàn)為精神沉郁、咳嗽、腫頭等癥狀，雞群經(jīng)治療處理，效果不理想，死淘較大，給肉雞合作社農(nóng)戶造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。筆者對(duì)這３群發(fā)病肉雞的病原菌進(jìn)行了分離鑒定，同時(shí)進(jìn)行了藥物敏感試驗(yàn)，旨在篩選出臨床上有效治療該致病菌株的敏感藥物，為防治該病提供一定的參考。

１材料與方法

１．１材料

病料采集于廣東省清遠(yuǎn)市某肉雞養(yǎng)殖合作社（３群，分群采集），副雞嗜血桿菌A、B、C 3種血清型的陽性血清均購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；常規(guī)培養(yǎng)基、生化試劑和藥敏紙片購于杭州天和微生物試劑有限公司。

１．２方法

１．２．１細(xì)菌分離培養(yǎng)在無菌操作條件下，用棉拭子蘸取病雞鼻竇腔內(nèi)分泌物，劃線接種于巧克力瓊脂培養(yǎng)基，置于３７ ℃恒溫箱燭缸培養(yǎng)２４ ｈ，之后挑取單個(gè)菌落進(jìn)行純培養(yǎng)。分群采集，培養(yǎng)。

１．２．２染色鏡檢挑取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色及瑞氏染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)菌的形態(tài)特征。

１．２．３血清學(xué)鑒定采用快速血清平板凝集試驗(yàn)方法，取所分離純培養(yǎng)的各菌株分別與副雞嗜血桿菌的Ａ、Ｂ、Ｃ 3種血清型的陽性血清分別進(jìn)行玻片凝集試驗(yàn)。

１．２．４生化試驗(yàn)對(duì)所分離的３株病原菌進(jìn)行葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和海藻糖發(fā)酵試驗(yàn)，并進(jìn)行接觸酶、吲哚試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)及Ｈ２Ｓ試驗(yàn)等生化指標(biāo)的測(cè)定。

１．２．５藥敏試驗(yàn)細(xì)菌純培養(yǎng)后，挑選分離的單個(gè)菌落，用無菌生理鹽水洗下混勻，?。埃?ｍＬ接種于巧克力培養(yǎng)基上涂布均勻，均勻貼上各藥敏紙片，置于３７ ℃恒溫箱燭缸培養(yǎng)２４ ｈ后觀察結(jié)果，并記錄抑菌圈直徑大小。

２結(jié)果與分析

２．１菌落形態(tài)、染色、鏡檢和血清學(xué)鑒定結(jié)果

對(duì)臨床的３群肉雞均分離到疑似副雞嗜血桿菌菌株，具體表現(xiàn)為在巧克力培養(yǎng)基上形成灰白色、邊緣整齊、光滑隆起、半透明、針尖大小、露珠樣的菌落。由表1可知，３群肉雞分離的菌株革蘭氏染色陰性，瑞氏染色藍(lán)色，油鏡下可見細(xì)菌呈短桿菌或球桿菌，兩極著色，３群肉雞病原分離株與副雞嗜血桿菌的Ａ型陽性血清均發(fā)生完全凝集反應(yīng)，而與其他兩種血清均無凝集反應(yīng)，故鑒定這３群分離菌株為Ａ型副雞嗜血桿菌。

２．２生化試驗(yàn)結(jié)果

生化試驗(yàn)結(jié)果見表2，３群肉雞病原分離菌株的生化特性完全一致，即細(xì)菌不發(fā)酵海藻糖，發(fā)酵葡萄糖、蔗糖和麥芽糖；能還原硝酸鹽，吲哚試驗(yàn)陰性，接觸酶陰性，不產(chǎn)生Ｈ２Ｓ。

２．３藥敏試驗(yàn)結(jié)果

由表3可見，該病原菌對(duì)頭孢噻呋、氟苯尼考和青霉素極敏，對(duì)丁胺卡那、阿莫西林高敏，對(duì)多西環(huán)素中敏，對(duì)泰樂菌素低敏，對(duì)磺胺嘧啶不敏感。

３小結(jié)與討論

本研究通過巧克力燭缸培養(yǎng)，Ａ型副雞嗜血桿菌分離率較高，屬于致病菌，由于該次培養(yǎng)未能完全達(dá)到５％ ＣＯ２培養(yǎng)箱的條件，導(dǎo)致菌株生長不良，出現(xiàn)菌落數(shù)偏少的現(xiàn)象。

本研究３群清遠(yuǎn)肉雞病原分離菌株在生化特性上表現(xiàn)為發(fā)酵葡萄糖、蔗糖和麥芽糖，而且分離菌株能還原硝酸鹽，接觸酶陰性，吲哚試驗(yàn)陰性，不產(chǎn)生Ｈ２Ｓ，這些結(jié)果與羅廷榮等［３］確定副雞嗜血桿菌的生物化學(xué)特性完全一致；３群肉雞病原菌分離株與副雞嗜血桿菌的Ａ型陽性血清產(chǎn)生均完全凝集反應(yīng)，而與其他兩種血清均無凝集反應(yīng)。由以上這些特性可鑒定這３群分離菌株均為Ａ型副雞嗜血桿菌，說明目前清遠(yuǎn)地區(qū)肉雞Ａ型副雞嗜血桿菌的流行占據(jù)主導(dǎo)地位［４］。但從近年的文獻(xiàn)報(bào)道來看，我國部分地區(qū)已經(jīng)有Ｂ、Ｃ型副雞嗜血桿菌的存在［５－７］，呈現(xiàn)為近年來我國雞傳染性鼻炎流行的新特點(diǎn)。因此，養(yǎng)殖過程中對(duì)肉雞進(jìn)行免疫時(shí)應(yīng)注意該流行病的這一特點(diǎn)，同時(shí)在疫苗研發(fā)時(shí)也應(yīng)注重多價(jià)苗或全價(jià)苗的研究與開發(fā)［８］。雖然，目前肉雞的鼻炎疫苗均有效，但菌苗的保護(hù)率一般不能達(dá)到１００％，所以肉雞養(yǎng)殖過程中需要增強(qiáng)雞群的抵抗力，做好環(huán)境的消毒及病雞的隔離。由于康復(fù)帶菌雞是主要的傳染源，所以肉雞合作社各存欄雞舍內(nèi)的動(dòng)物用具要做好隔離，以避免病原菌的群間傳播。

從藥敏試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Ａ型副雞嗜血桿菌對(duì)頭孢噻呋、氟苯尼考、青霉素、丁胺卡那和阿莫西林都表現(xiàn)出了很高的敏感性，其中對(duì)頭孢噻呋、氟苯尼考和青霉素這３種藥物的敏感性最高。根據(jù)本研究藥敏試驗(yàn)結(jié)果，筆者選用了頭孢噻呋、氟苯尼考和青霉素這３種極敏感藥物對(duì)該肉雞養(yǎng)殖合作社３個(gè)發(fā)病雞群進(jìn)行了注射治療，同時(shí)投服藥物輔助治療，并補(bǔ)充電解多維等增強(qiáng)肉雞機(jī)體抵抗力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)雞群采食量逐漸恢復(fù)，精神好轉(zhuǎn)，呆立、嗜睡雞明顯減少，４ ｄ后基本恢復(fù)正常。因此，肉雞感染Ａ型副雞嗜血桿菌后可以考慮選擇這３種藥物進(jìn)行臨床治療。治療時(shí)，除了注射給藥和口服給藥外，也可考慮滴鼻或者噴霧治療。

參考文獻(xiàn)：

［１］ ＰＯＥＲＮＯＭＯ Ｓ， ＳＵＴＡＲＭＡ， ＲＡＦＩＥＥ Ｍ，ｅｔ ａｌ． Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉzａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｇａｌｌｉｎａｒｕｍ ｆｒｏｍ Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ［Ｊ］． Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｊｏｕｒｎａｌ，２０００，７８（１１）：７５９－７６２．

［２］ 馮文達(dá)． 北京雞傳染性鼻炎病原菌分離及鑒定［Ｊ］． 微生物學(xué)通報(bào)，１９８７（５）：２１６－２１９．

［３］ 羅廷榮，艾博特，梁家權(quán)，等． 二株副雞嗜血桿菌分離株的生物學(xué)特性鑒定［Ｊ］． 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，２０００，２２（３）：１７０－１７３．

［４］ 馬艷平，張杰，陳豪泰，等． 副雞嗜血桿菌的分離鑒定［Ｊ］． 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，２００９，２２（３）：８３４－８３７．

［５］ 張培君，苗得園，龔玉梅，等． Ｂ型副雞嗜血桿菌的分離鑒定［Ｊ］． 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)， ２００３，２５（１）：５６－５８．

［６］ 孫慧玲，苗得園，王艷平，等． Ｂ型副雞嗜血桿菌北京株的分離與鑒定［Ｊ］． 中國獸醫(yī)雜志，２００５，４１（２）：２８－２９．

［７］ 張培君，陳小玲，苗得園． 雞傳染性鼻炎流行學(xué)調(diào)查（Ⅱ）［Ｊ］． 中國獸藥雜志，２００１，３５（１）：２１－２３．

［８］ 苗得園，孫惠玲，陳曉峰，等． 副雞嗜血桿菌的分離鑒定及我國雞傳染性鼻炎的流行狀況分析［Ｊ］． 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，２００６，２８（４）：３９２－３９５．