豬肉中“瘦肉精”檢測方法研究進展

王 芳，馬艷梅，丁原春

（黑龍江職業(yè)學院，黑龍江 雙城市 150111）

“瘦肉精”--克倫特羅為一種β-受體激動劑，屬于擬腎上腺素類藥物?！笆萑饩笨墒关i等畜禽生長速率和胴體瘦肉率提高，但給消費者帶來了巨大的負面后果?！笆萑饩敝卸竞?，人們會出現(xiàn)心悸，面頸、四肢肌肉顫動，頭暈，乏力等癥狀，嚴重者會導致心律失常而猝死。雖然各國目前均已禁止在動物飼料中添加瘦肉精，但是“瘦肉精”中毒事件屢有發(fā)生，因此加強“瘦肉精”殘留的檢測和監(jiān)督工作十分重要，國內(nèi)外對于檢測克倫特羅殘留的研究未曾停止，現(xiàn)將近年來克倫特羅在肉制品檢測方面的研究進行綜述。

1 “瘦肉精”色譜分析技術(shù)

1.1 氣相色譜法

國外研究者通過毛細管氣相色譜檢測了尿液中的克倫特羅，他們先通過固相吸附法提取尿中的克倫特羅，再通過氣相色譜進行檢測，其檢測限為1.5ng/mL。謝維平等未對樣品進行衍生化，采用厚膜非極性柱直接分離，檢測限為0.03mg/L。崔曉明等采用固相萃取法對動物組織中克倫特羅進行提取，經(jīng)衍生后用ECD檢測器進行氣相檢測，其最低檢出限為1μg/kg。

1.2 高效液相色譜法

高效液相色譜法（HPLC）是近年來發(fā)展迅速的一項檢測技術(shù)，它靈敏性高、選擇性好。國外研究人員先用通過有機酸提取動物組織中的克倫特羅，再經(jīng)提取、凈化，最后采用HPLC測定克倫特羅的含量，效果良好。另有研究人員通過雙相透析法提取食品中的克倫特羅，通過HPLC（二極管陣列檢測器）測定其含量，其最低檢出限為1.26mg/kg。我國科研人員也采用高效液相色譜技術(shù)對克倫特羅的檢測進行了大量嘗試。黃士新等應(yīng)用HPLC技術(shù)檢測豬內(nèi)臟和肌肉組織中的克倫特羅殘留，最低檢測限可達2ng/g。方炳虎等應(yīng)用HPLC檢測豬血液中克倫特羅的濃度，其檢測限為0.05ug/ml。目前我國已將高效液相色譜技術(shù)確定為檢測克倫特羅的半確定性方法。HPLC用于檢測克倫特羅精確度較高，但缺點是需要大型專業(yè)儀器，無法實現(xiàn)現(xiàn)場采樣檢測。

1.3 毛細管電泳法

毛細管電泳法是一種高效的分離檢測方法，Gausepohl等采用毛細管電泳法檢測人尿液中的克倫特羅含量，檢出限為0.5μg/L，檢測時間不到15min。管月清等采用毛細管電泳-電化學法對肉制品中的克倫特羅含量進行檢測，經(jīng)優(yōu)化條件后8min內(nèi)即可實現(xiàn)分離。該檢測法樣品前處理簡單，檢測迅速，但是毛細管電泳儀并不是一般實驗室常備檢測儀器，限制了該技術(shù)在克倫特羅檢測的中廣泛應(yīng)用。

1.4 聯(lián)用技術(shù)分析法

（1）液相色譜－質(zhì)譜法（LC-MS）。Laurent Debranwer等對尿液中克倫特羅殘留作了檢測，研究者優(yōu)化了液相色譜-電噴霧質(zhì)譜法的實驗條件，取得了良好地效果。KaitaDeWach等應(yīng)用LC-MS檢測了克倫特羅等多種β受體激動劑，證實該檢測方法靈敏度高，能夠達到歐盟最高允許殘留限量（0.5ug/kg）的標準。余建新等采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定法檢測了尿樣及動物組織中克倫特羅等β-興奮劑的濃度，其檢出量為0.15~0.6ng/g，線性指標及回收率均較理想。

（2）氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。Wilson RT等人對豬等動物組織中克倫特羅含量進行了氣質(zhì)檢測(GC-MS)，其檢測限為0.25ug/kg。D.J.Smith同樣采用氣質(zhì)聯(lián)機檢測了豬肉組織中克倫特羅的含量，結(jié)果表明可檢出織中濃度小于2ug/kg的克倫特羅。蔣珊等人通過進行了GC-MS技術(shù)測定了豬肝、豬尿中鹽酸克倫特羅殘留，其檢出限：豬肝為0.30μg/kg，豬尿為0.25μg/L。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測克倫特羅靈敏度更高，并且假陽性率更低。在我國及歐盟等國家，GC-MS法已經(jīng)確定為檢測克倫特羅的確證性方法，但是GC-MS法同樣需要昂貴精密的儀器和專業(yè)操作人員，樣品前處理繁瑣，測定成本高[3]。

2 “瘦肉精”免疫分析技術(shù)

免疫分析技術(shù)是“邁向21世紀的醫(yī)學檢驗技術(shù)”之一，酶免法是克倫特羅殘留免疫檢測方法中最為常用的一種方法，此外放射免疫法、熒光免疫法也是免疫法分析克倫特羅常用的手段。免疫檢測法具有異性強，靈敏度高等特點，不需要特殊儀器，適合現(xiàn)場監(jiān)控。但是免疫法檢測費用昂貴，對實驗條件要求也較苛刻。

（1）酶免疫分析技術(shù)。酶免疫分析技術(shù)是將抗原和抗體親合反應(yīng)的特異性、高專一性與酶對底物的高效催化作用結(jié)合起來的固相免疫測定技術(shù)。目前，使用較普遍的是酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)方法。英國和德國公司都開發(fā)出了克倫特羅的酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒，可用于肉品、飼料中克倫特羅殘留的檢測。但檢測費用昂貴，單個樣品檢測費用就超過了千元。我國在研究酶免疫分析技術(shù)檢測克倫特羅方面的起步較晚，但發(fā)展迅速。陳繼明等用酶免疫分析法檢測了飼料、尿樣與臟器中克倫特羅含量，檢測結(jié)果顯示該方法與高效液相色譜法的結(jié)果大體一致?？卓埔灿妹该夥z測了豬肝中克倫特羅的殘留其檢測限為0.3ng/ml，證實了該法是一種較簡便可靠的快速檢測方法。另外史建國等采用國產(chǎn)酶聯(lián)免疫吸附試劑盒檢測了豬肉中的瘦肉精殘留，檢測限可達0.05ng/g，也證實了國產(chǎn)試劑盒已達到進口試劑盒的檢測水平。胥傳來等人建立了檢測豬尿樣品中克倫特羅殘留量的間接競爭化學發(fā)光酶免疫法，檢出限可達0.01μg/L，檢測范圍、回收率穩(wěn)定性等指標均優(yōu)于目前廣泛使用的酶聯(lián)免疫法。

目前，我國已有多個廠家生產(chǎn)出了商品化的克倫特羅ELISA檢測試劑盒，如由上海市畜牧獸醫(yī)站聯(lián)合上海市農(nóng)科院、上海普飛生物技術(shù)有限公司組成的攻關(guān)團隊開發(fā)出了國產(chǎn)克倫特羅ELISA檢測試劑盒，該試劑盒在靈敏度、準確性上與進口產(chǎn)品不相上下，但價格上低很多，顯示了極大地優(yōu)勢。

（2）放射免疫分析技術(shù)。Ropitar和Zimmer報道了采用放射免疫測定法測定包括克倫特羅在內(nèi)的β-腎上腺素能激動劑。隨后Delahaut等又建立了更為特異的檢測克倫特羅的放射免疫方法，用此方法克倫特羅與其他β-腎上腺素能激動劑的交叉反應(yīng)在10%以下，檢測限為0.5ng/g。目前國外已生產(chǎn)用于測定克倫特羅的放免試劑盒產(chǎn)品，檢測限可達到2.4ng/g，國內(nèi)也在進行此方面的研究。但是放射免疫分析同樣具有假陽性較高等弊端，并且放射性同位素對人體有一定傷害，從而限制了該法的廣泛應(yīng)用。

（3）膠體金免疫層析技術(shù)。膠體金免疫層析技術(shù)是將克倫特羅的抗體與膠體金結(jié)合成免疫金，制備成結(jié)果肉眼可見的檢測試紙條。該方法不僅特異性好，敏高度高，并且簡單，便捷，對操作者沒有太高的技術(shù)要求，適用于現(xiàn)場的快速檢測工作 [4]。張敏娟等也證實分別用該法和酶聯(lián)免疫法對豬尿樣檢測時，兩種方法陽性吻合率達到85%以上。

（4）熒光免疫分析法。熒光免疫分析法是用三價稀土離子及其螯合物作為示蹤物標記分析物，根據(jù)熒光強度和相對熒光強度比值，判斷反應(yīng)體系中分析物的濃度。我國學者時瑾等建立了的時間分辨熒光免疫法檢測豬尿樣品中克倫特羅的濃度，其檢出限為0.01μg/L，并證實這種檢測方法受其他干擾物影響較小。熒光免疫分析法靈敏度高，無放射性污染，是一種穩(wěn)定，理想的檢測方法。但該法對溫度的有較高要求和熒光強度取決于激發(fā)波長，也限制了其在瘦肉精檢測上的應(yīng)用。

（5）生物傳感技術(shù)。生物傳感器檢測法是近些年來發(fā)展起來的一項新型分析技術(shù)，它具有選擇性好、反應(yīng)速度快、操作簡易、價格低廉、定量準確，可以實現(xiàn)連續(xù)的在線檢測和反復(fù)使用等優(yōu)點。我國學者呂會田等構(gòu)建了基于量子點標記的ATP合酶分子馬達免疫旋轉(zhuǎn)生物傳感器，結(jié)合熒光技術(shù)實現(xiàn)了對瘦肉精快速、高靈敏度的檢測。。肖紅玉等同樣利用免疫生物傳感技術(shù)，檢測樣品中瘦肉精的殘留量，檢出限可達到0.1μg/L，該方法檢測時間短（20min內(nèi)），檢測費用低，可以實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測。

3 結(jié)語

“瘦肉精”等非法添加物的查處治理是一項長期、艱巨的工作，它需要多個部門的通力合作，上下齊心，標本兼治，才能共同維護好消費者的食品安全。綜上所述，各種“瘦肉精”的檢測技術(shù)均存在各自的優(yōu)勢和缺點，但我們相信，隨著國家相關(guān)法規(guī)政策的完善、各有關(guān)部門監(jiān)管力度的加強及“瘦肉精”檢測技術(shù)的進一步發(fā)展，“瘦肉精”不會再變成“害人精”。

[1]裴艷濤，孫繼國，林密等.動物性產(chǎn)品中“瘦肉精”殘留的檢測方法研究進展[J].動物科學與動物醫(yī)學，2004，21（1）:24-26.

[2]管月清，楚清脆，葉建農(nóng).肉制品中β-興奮劑的毛細管電泳-電化學檢測方法[J].華東師范大學學報(自然科學版)，2005，（2）:85-90.

[3]蔣珊，毛慧玲.GC-MS法測定豬肝、豬尿中鹽酸克倫特羅殘留量的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2007，35（33）:10711-10713.

[4]劉見.免疫金試紙法快速檢測鹽酸克倫特羅[J].上海交通大學學報(農(nóng)業(yè)科技版)，2009，22（4）:350-354.