RP-HPLC法測定婦炎凈膠囊中原兒茶酸的含量

楊仕林，舒海燕，王雨來（.湖北陽新縣人民醫(yī)院，湖北陽新 43500；.黃石市中心醫(yī)院，湖北黃石435000）

RP-HPLC法測定婦炎凈膠囊中原兒茶酸的含量

楊仕林1＊，舒海燕1，王雨來2（1.湖北陽新縣人民醫(yī)院，湖北陽新 435200；2.黃石市中心醫(yī)院，湖北黃石435000）

目的：建立測定婦炎凈膠囊中原兒茶酸含量的方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為Hypersil C18（250mm×4.6 mm，5μm），流動相為甲醇-0.05%磷酸水溶液（20∶80），流速為1.0m L·min－1，檢測波長為258 nm，柱溫為40℃，進樣量為20μL。結(jié)果：原兒茶酸的檢測濃度在0.903～18.060μg·m L－1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系（r＝0.999 8）；平均加樣回收率為98.7%，RSD＝1.8%（n＝9）。結(jié)論：該方法簡便、準確、重復(fù)性好，可用于婦炎凈膠囊的質(zhì)量控制。

婦炎凈膠囊；原兒茶酸；含量測定；反相高效液相色譜法

婦炎凈膠囊是2010年版《中國藥典》（一部）收錄的中藥制劑，以苦玄參、地膽草、當歸、雞血藤、兩面針等中藥為原料，經(jīng)加水煎煮、濃縮、干燥，粉碎，裝入膠囊制成。它具有清熱祛濕、調(diào)經(jīng)止帶的功能，用于濕熱蘊結(jié)所致的月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、附件炎、盆腔炎及子宮內(nèi)膜炎的治療。在其藥品標準中僅對苦玄參苷ⅠA進行了含量測定[1]，國內(nèi)還有文獻對該藥中氯化兩面針堿、綠原酸的含量測定進行了研究[2～5]，但對雞血藤中原兒茶酸的含量測定方法未見報道。因此，筆者采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法測定該藥中原兒茶酸的含量，該法簡便、快速、準確、重復(fù)性好，可用于婦炎凈膠囊的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

LC-10A型高效液相色譜（HPLC）儀（日本島津公司）；BS124S型天子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

原兒茶酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：0809-200102）；婦炎凈膠囊（廣西梧州制藥（集團）股份有限公司，規(guī)格：0.4 g，批號：091004、100208、100432）；甲醇（色譜純，天津市標準科技有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Hypersil C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-0.05%磷酸水溶液（20∶80）；流速：1.0m L·min－1；檢測波長：258 nm；柱溫：40℃；進樣量：20μL。在該色譜條件下，原兒茶酸峰與相鄰峰的分離度均＞1.5，理論板數(shù)按原兒茶酸峰計算為5 700。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品；C.陰性對照；1.原兒茶酸Fig 1 HPLC chromatogram sA.substance control；B.test samples；C.negative control；1.protocatechuic acid

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 取原兒茶酸對照品適量，精密稱定，置50 m L棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成原兒茶酸濃度為180.6μg·m L－1的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取本品內(nèi)容物，混勻，研細。取約0.8 g，精密稱定，加乙醇-醋酸（10∶1）50m L，置水浴上加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解并定容至10m L，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液 按本品處方配比及制備工藝制備除雞血藤外的陰性樣品，再按“2.2.2”項下方法制得陰性對照溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密量取原兒茶酸對照品溶液0.5、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0m L，置于100m L量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得系列對照品溶液。精密吸取系列對照品溶液各20μL，注入液相色譜儀。以對照品濃度（X，μg·m L－1）為橫坐標，峰面積積分值（A）為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程為A＝4 823.1X－751.6（r＝0.999 8，n＝7）。結(jié)果表明，原兒茶酸檢測濃度在0.903～18.060μg·m L－1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗

精密量取原兒茶酸對照品溶液（9.03μg·m L－1）20μL，注入液相色譜儀，重復(fù)進樣5次，測定峰面積。結(jié)果，RSD＝0.5%（n＝5），表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗

精密量取同一供試品溶液適量，分別于1、2、4、6、8 h測定峰面積。結(jié)果，RSD＝1.2%（n＝5），表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性試驗

精密稱取同一樣品（批號：091004）適量，按“2.2.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，依法測定峰面積。結(jié)果，RSD＝1.8%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗

取已測知含量的婦炎凈膠囊（批號：091004）20粒，傾取內(nèi)容物，混勻，研細，取0.4 g，精密稱定，分別精密加入原兒茶酸對照品溶液（9.03μg·m L－1）4.0、5.0、6.0m L，再加適量乙醇-醋酸（10∶1）溶液，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定樣品含量，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝9）Tab 1 Resultsof recovery tests（n＝9）

2.8 樣品含量測定

取3批樣品（091004、100208、100432）各適量，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，精密吸取20μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積；另取原兒茶酸對照品溶液（9.03μg·m L－1）適量，同法測定，按外標法以峰面積計算婦炎凈膠囊中原兒茶酸的含量。結(jié)果，3批樣品中原兒茶酸的平均含量分別為每粒0.046、0.053、0.059mg。

3 討論

3.1 色譜條件的優(yōu)化

將原兒茶酸的甲醇溶液在200～400 nm波長范圍內(nèi)進行紫外掃描，發(fā)現(xiàn)其在258 nm波長處有最大吸收，故選擇258 nm作為檢測波長。

原兒茶酸屬于酚酸類物質(zhì)，易解離，因而會導(dǎo)致色譜峰出現(xiàn)拖尾、變寬和不對稱現(xiàn)象，在流動相中加入酸性抑制劑可以抑制此類化合物的電離，改善峰形。試驗對比了甲醇-0.05%磷酸水溶液和甲醇-0.1%冰醋酸水溶液，發(fā)現(xiàn)前者的分離效果較佳、峰形對稱、干擾較少，故選其作為流動相。

3.2 提取方法的考察

筆者考察了加熱回流、超聲2種樣品提取方式，發(fā)現(xiàn)加熱回流較超聲法的提取率高出近10%，故選擇加熱回流提取法。再根據(jù)原兒茶酸易溶于水、甲醇、乙醇的性質(zhì)，對提取溶劑的組成、用量等進行了考察。結(jié)果顯示，以乙醇-醋酸（10∶1）為溶劑、用量50m L，提取效果最好。此外，還對加熱回流的時間和次數(shù)進行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加熱回流提取1次、時間1 h即可基本提盡樣品中的原兒茶酸。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：724.

[2] 唐秀玲，呂軼峰.HPLC法測定婦炎凈膠囊中苦玄參苷ⅠA的含量[J].中國藥師，2011，11（3）：429.

[3] 劉鵬翰，陸來祥，潘聲遣，等.HPLC法測定婦炎凈片中氯化兩面針堿的含量[J].食品與藥品，2005，7（10）：45.

[4] 陳軍霞，卞 凌，李 煒，等.HPLC法測定婦炎凈顆粒中綠原酸的含量[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2009，25（6）：459.

[5] 徐 玲，張繼芬，吳芳洲，等.HPLC法測定雙花顆粒中綠原酸的含量[J].中國藥房，2011，22（23）：2 156.

Determ ination of Protocatechuic Acid in Fuyanjing Capsules by RP-HPLC

YANG Shi-lin，SHU Hai-yan（Yangxin County People’s Hospital of Hubei Province，Hubei Yangxin 435200，China）
WANG Yu-lai（HuangshiMunicipal Central Hospital of Hubei Province，Hubei Huangshi435000，China）

OBJECTIVE：To establish the method for the determ ination of protocatechuic acid in Fuyanjing capsules.METHODS：HPLC method was adopted.The determ ination was performed on Hypersil C18（250 mm×4.6 mm，5μm）column w ith mobile phase consisted of methanol-0.05%phosphoric acid solution（20∶80）at the flow rate of 1.0 m L·m in－1.The detection wavelength was set at 258 nm and column temperature was 40℃.The injection volume was 20μL.RESULTS：The linear range of protocatechuic acid was 0.903～18.060μg·m L－1（r＝0.999 8）w ith an average recovery of 98.7%（RSD＝1.8%，n＝9）.CONCLUSION：Themethod is simple，accurate and reproducible，which can be used for the quality control of Fuyanjing capsules.

Fuyanjing capsules；Protocatechuic acid；Content determination；RP-HPLC

R283.65；R927.2

A

1001-0408（2012）23-2174-02

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.23.24

＊主管藥師。研究方向：臨床藥學(xué)。電話：0714-7393081。E-mail：119139247@qq.com

2011-12-26

2012-04-19）