諾麗果肉化學(xué)成分研究

何其偉，吳培云，梁益敏，項(xiàng)晨，杜子偉，王剛

(安徽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院現(xiàn)代中藥安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥230031)

諾麗(Noni)為茜草科Rubiaceae巴戟天屬M(fèi)orinda植物，學(xué)名海巴戟Morinda citrifolia Linn.，又名海巴戟天、四季果、印度桑葚等［1］。國外主要分布在南太平洋諸島嶼，菲律賓、澳大利亞、柬埔寨［2］，在我國海南島、西沙群島和臺灣島也有分布［3］。在南太平洋一帶素有“仙果”之美稱，其作為保健及藥用飲料已有上千年歷史，果實(shí)、葉子、枝干、根部均可入藥［4］。因其具有良好的醫(yī)療效果和美容效果，而在國內(nèi)外市場越來越走俏，目前市場對Noni產(chǎn)品需求以每年約50%速度增加，是全球最暢銷的健康產(chǎn)品之一［5］;又因其含有的化學(xué)結(jié)構(gòu)多變，生物活性顯著，越來越受到有機(jī)化學(xué)家和生物學(xué)家的青睞。近二十多年來，國內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)從諾麗中提取分離得到了幾百種化合物，其中有一部分具有良好的抗腫瘤、抗HIV等活性，一些已經(jīng)成功開發(fā)成為藥物和保健品上市，起到了一個很好的社會和經(jīng)濟(jì)效果。盡管目前對諾麗化學(xué)成分研究報道很多，但未見諾麗果肉化學(xué)成分報道，同時由于植物的不同部位其化學(xué)成分往往差異較大，本實(shí)驗(yàn)對越南謝氏公司提供的諾麗果肉進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究。

1 儀器和材料

日本產(chǎn)JASCODIP—370型數(shù)字式旋光儀;瑞士Brucker公司Bio-rad FTS型紅外光譜儀，溴化鉀壓片;UV—210A型紫外光譜儀測定;英國Micromass公司的Autospec—3000質(zhì)譜儀;核磁共振譜由Brucker AM—400 MHz和Brucker DRX—500 MHz測定，內(nèi)標(biāo)為TMS;Sephadex-20為瑞士Amershan Biosciences公司生產(chǎn);薄層硅膠板和各種規(guī)格的層析柱硅膠均來自青島海洋化工廠。

諾麗果肉由越南謝氏公司提供。

2 提取與分離

諾麗果肉干品1.1 kg，用95%乙醇1 000 mL提取4次，減壓濃縮，得到浸膏，加水懸浮，分別用乙酸乙酯(3×500 mL)和正丁醇(3×500 mL)萃取，減壓濃縮，分別得到乙酸乙酯部位浸膏21.2 g、正丁醇部分61.3 g。

乙酸乙酯部位21.2 g經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-丙酮，100∶0，98∶2，95∶5，90∶10，80∶20，50∶50)梯度洗脫得6個部分(A～F)。C部分析出無色針晶，經(jīng)丙酮結(jié)晶得出化合物1(183 mg)。D部分分為Ⅰ、Ⅱ部分，其中Ⅰ部分析出白色粉末，略帶黃色，經(jīng)甲醇多次洗滌后得到化合物2(175 mg)，Ⅱ部分經(jīng)Sephadex LH-20(三氯甲烷-甲醇，1∶1)和反復(fù)硅膠柱層析(石油醚-丙酮，15∶1)得到化合物3(6 mg)、化合物4(7 mg)、和化合物5(6 mg)。E部分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析和Sephadex LH-20(三氯甲烷-甲醇，1∶1)得到化合物6(11 mg)。F部分經(jīng)過反復(fù)硅膠柱層析(石油醚-丙酮，5∶1)得到化合物7(7 mg)。

正丁醇部位61.3 g經(jīng)硅膠柱層析(三氯甲烷-甲醇，98∶2，95∶5，90∶10，80∶20，50∶50)梯度洗脫得到5個部分(A-E)。C部分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析、Sephadex LH-20(三氯甲烷-甲醇，1∶1)和Rp-18(甲醇-水)得化合物8(26 mg)、化合物9(21 mg)。D部分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析、Sephadex LH-20(三氯甲烷-甲醇，1∶1)和Rp-18(甲醇-水)得到化合物10(15 mg)。E部分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析、Sephadex LH-20(三氯甲烷-甲醇，1∶1)和Rp-18(甲醇-水)得到化合物11(7.2 mg)和化合物12(11 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:白色針晶，mp 207～209℃，Libermann-burchard反應(yīng)陽性。1H-NMR:(400 MHz，CDCl3)δ:5.32(1H，brd，J=5.1 Hz，H-6)，3.50(1H，m，H-3)，0.66(3H，s，H-18)，1.00(3H，s，H-19)，0.92(3H，d，J=8.0 Hz，H-21)，0.82(3H，d，J=7.6 Hz，H-26)，0.80(3H，d，J=7.6 Hz，H-27)，0.83(3H，t，J=8.0 Hz，H-29)。13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ:37.3(t，C-1)，31.7(t，C-2)，71.8(d，C-3)，42.4(t，C-4)，140.8(s，C-5)，121.7(d，C-6)，32.0(t，C-7)，32.1(d，C-8)，50.2(d，C-9)，36.6(s，C-10)，21.1(t，C-11)，39.9(t，C-12)，42.4(s，C-13)，56.8(d，C-14)，24.3(t，C-15)，28.3(t，C-16)，56.2(d，C-17)，11.9(q，C-18)，19.1(q，C-19)，36.2(d，C-20)，18.8(q，C-21)，34.0(t，C-22)，26.3(t，C-23)，46.0(d，C-24)，29.3(d，C-25)，19.8(q，C-26)，19.4(q，C-27)，23.2(t，C-28)，12.0(q，C-29)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］報道一致，故鑒別為β-sitosterol。

化合物2:白色粉末;結(jié)合質(zhì)譜可推測化合物的分子式為C30H48O3。1H-NMR(400 MHz，CDCl3/CD3OD)δ:5.19(1H，d，J=3.5 Hz，H-12)，3.16(1H，dd，J=9.8，5.5 Hz，H-3)。13C-NMR(100 MHz，CDCl3/CD3OD)δ:38.5(t，C-1)，26.9(t，C-2)，78.9(d，C-3)，38.6(s，C-4)，55.1(d，C-5)，18.2(t，C-6)，32.9(t，C-7)，39.4(s，C-8)，47.5(d，C-9)，36.9(s，C-10)，23.2(t，C-11)，125.4(d，C-12)，138.1(s，C-13)，42.0(s，C-14)，27.9(t，C-15)，24.1(t，C-16)，47.7(s，C-17)，52.7(d，C-18)，39.0(d，C-19)，38.8(d，C-20)，30.6(t，C-21)，36.7(t，C-22)，28.0(q，C-23)，15.5(q，C-24)，15.3(q，C-25)，16.9(q，C-26)，23.4(q，C-27)，180.6(s，C-28)，16.8(q，C-29)，21.1(q，C-30)。EI-MS m/z(%):456［M］+(1)，248(100)，203(45)，133(35)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］報道一致，故鑒別為烏蘇酸。

化合物3:白色針晶(甲醇);mp 207～209℃;紅外光譜顯示有酚羥基(3 363 cm－1)，羰基(1 720 cm－1)，苯環(huán)骨架(1 580，1 520 cm－1);1H－NMR(400 MHz，pyridine-d5)δ:6.30(1H，d，J=9.4 Hz，H-3)，7.68(1H，d，J=9.4 Hz，H-4)，7.03(1H，s，H-5)，7.10(1H，s，H-8)，3.88(3H，s，6-OCH3)。13C-NMR(100 MHz，pyridine-d5)δ:161.6(s，C-2)，112.4(d，C-3)，144.2(d，C-4)，109.5(d，C-5)，146.3(s，C-6)，151.1(s，C-7)，104.2(d，C-8)，153.1(s，C-9)，111.1(s，C-10)，56.3(q，6-OCH3)。Negative FAB-MS m/z(%):191［M-H］－(41)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報道一致，故鑒別為scopoletin。

化合物4:黃色油狀液體，C10H10O4，1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ:7.78(2H，m，H-3，H-4)，7.57(2H，m，H-2，H-5)，3.92(6H，s，OCH3)。EI-MS m/z(%):194［M］+(25)，149(100)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報道一致，故鑒別為鄰苯二甲酸二甲酯。

化合物5:無色針晶(丙酮)，mp 178～180℃;1H-NMR(400 MHz，acetone-d6)δ:5.34(1H，d，J=7.2 Hz，H-1)，3.68(2H，m，H-3)，2.94(1H，m，H-4)，3.66(1H，m，H-5)，5.77(1H，dd，J=2.5，5.6 Hz，H-6)，5.59(1H，dd，J=1.6，5.6 Hz，H-7)，2.43(1H，t，J=7.6 Hz，H-9)，3.81(1H，d，J=9.2 Hz，H-10a)，3.49(1H，d，J=9.2 Hz，H-10b)，3.72(3H，s，OCH3)。13CNMR(100 MHz，acetone-d6)δ:100.9(d，C-1)，56.8(t，C-3)，41.5(d，C-4)，43.1(d，C-5)，138.3(d，C-6)，134.7(d，C-7)，92.9(s，C-8)，46.5(d，C-9)，71.7(t，C-10)，172.9(s，C-11)，51.8(q，OCH3)。ESI-MS(+)m/z(%):249［M+Na］+。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報道一致，故鑒別為4-epi-dunnisinin。

化合物6:無色針晶(丙酮);1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ:6.16(1H，m，H-7)，3.60(1H，m，H-3)，0.53(3H，s，H-18)，0.80(3H，s，H-19)，0.93(3H，d，J=6.3 Hz，H-21)，0.79(3H，d，J=6.9 Hz，H-26)，0.86(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.78(3H，d，J=6.8 Hz，H-28)。13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ:37.3(t，C-1)，31.5(t，C-2)，71.1(d，C-3)，38.1(d，C-4)，39.6(d，C-5)，29.7(t，C-6)，117.5(d，C-7)，139.6(s，55.2(d，C-14)，23.0(t，C-15)，28.1(t，C-16)，56.2(d，C-17)，11.9(q，C-18)，13.0(q，C-19)，36.6(d，C-20)，19.0(q，C-21)，33.7(t，C-22)，30.8(t，C-23)，39.1(d，C-24)，31.5(d，C-25)，17.6(q，C-26)，20.5(q，C-27)，15.5(q，C-28)。EI-MS m/z(%):400［M］+(100)，382［M-H2O］+(7)，273(41)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報道一致，故鑒別為(24S)-ergost-7-en-3β-ol。

化合物7:C30H48O4，白色粉末;1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ:5.24(1H，brs，H-12)，3.10(1H，dd，J=9.8，5.5 Hz，H-3)。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:38.5(t，C-1)，26.9(t，C-2)，79.8(d，C-3)，38.6(s，C-4)，55.1(d，C-5)，18.2(t，C-6)，32.9(t，C-7)，39.4(s，C-8)，47.5(d，C-9)，36.9(s，C-10)，23.2(t，C-11)，125.4(d，C-12)，138.1(s，C-13)，42.0(s，C-14)，27.9(t，C-15)，24.1(t，C-16)，47.7(s，C-17)，52.7(d，C-18)，73.6(s，C-19)，39.0(d，C-20)，30.6(t，C-21)，36.7(t，C-22)，28.0(q，C-23)，15.5(q，C-24)，15.3(q，C-25)，16.9(q，C-26)，23.4(q，C-27)，180.6(s，C-28)，16.8(q，C-29)，21.1(q，C-30)。EIMS m/z(%):472［M］+(3)，454(5)，426(25)，146(100)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報道一致，故鑒別為19-hydroxyl-ursolic acid。

化合物8:白色粉末;mp 296～298℃，Libermann-burchard反應(yīng)陽性。易溶于吡啶，難溶于一般有機(jī)溶劑。1H-NMR(400 MHz，pyridine-d5)δ:5.53(1H，t，J=2.5 Hz，H-6)，3.98(1H，m，H-3)，0.66(3H，s，H-18)，0.94(3H，s，H-19)，0.98(3H，d，J=6.5 Hz，H-21)，0.84(3H，d，J=7.0 Hz，H-26)，0.86(3H，d，J=7.0 Hz，H-27)，0.83(3H，t，J=7.5 Hz，H-29)，5.04(1H，d，J=7.7 Hz，H-1')，4.04(1H，dd，J=7.7，7.5 Hz，H-2')，4.27(1H，t，J=7.5 Hz，H-3')，4.28(1H，t，J=7.5 Hz，H-4')，3.96(1H，m，H-5')，4.55(1H，dd，J=2.5，11.8 Hz，H-6'a)，4.40(1H，dd，J=2.5，11.8 Hz，H-6'b)。13C-NMR(100 MHz，pyridine-d5)δ:37.5(t，C-1)，30.2(t，C-2)，78.4(d，C-3)，39.3(t，C-4)，141.0(s，C-5)，121.9(d，C-6)，32.2(t，C-7)，32.0(d，C-8)，50.3(d，C-9)，36.1(s，C-10)，21.3(t，C-11)，40.0(t，C-12)，42.5(s，C-13)，56.8(d，C-14)，24.5(t，C-15)，29.0(t，C-16)，56.3(d，C-17)，12.0(q，C-18)，19.4(q，C-19)，36.4(d，C-20)，19.0(q，C-21)，34.2(t，C-22)，26.4(t，C-23)，46.0(d，C-24)，29.5(d，C-25)，19.9(q，C-26)，19.2(q，C-27)，23.4(t，C-28)，12.1(q，C-29)，102.6(d，C-1')，75.3(d，C-2')，78.5(d，C-3')，71.7(d，C-4')，78.1(d，C-5')，62.8(t，C-6')。EI-MS m/z(%):576［M］+(15)，414(7)，396(25)，381(12)，273(23)，255(52)，213(43)，107(100)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報道一致，鑒別為胡蘿卜苷。

化合物9:C4H6O4，無色方晶(甲醇)，mp 184～186℃;1H-NMR顯示除了溶劑信號外，只有一個信號峰且呈t峰，再結(jié)合13C-NMR和DEPT顯示兩個信號，175、30.3，極性也比較大，推測含有羧基。NegativeFAB-MSm/z(%):117［MH］－。1H-NMR(400 MHz，pyridine-d5)δ:3.02(4H，CH2×2)。13C-NMR(100 MHz，pyridine-d5):30.3(t，CH2)，175.4(s，COOH)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報道一致，故鑒別為丁二酸。

化合物10:白色粉末;ESI-MS m/z(%):247［M-H］－;1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ:4.03(1H，m，H-1a)，3.69(1H，m，H-1b)，2.38(2H，t，J=7.6 Hz，H-2)，4.77(2H，d，J=6.0 Hz，H-4)，1.78(3H，s，H-5)，4.30(1H，d，J=7.7 Hz，H-1')，3.20(1H，m，H-2')，3.38(1H，m，H-3')，3.31(1H，m，H-4')，3.31(1H，m，H-5')，3.89(1H，d，J=12 Hz，H-6a')，3.68(1H，m，H-6b')。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:68.1(t，C-1)，37.6(t，C-2)，142.4(s，C-3)，110.7(t，C-4)，22.0(q，C-5)，102.9(d，C-1')，73.8(d，C-2')，76.8(d，C-3')，70.4(d，C-4')，76.6(d，C-5')，61.6(t，C-6')。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］報道一致，故鑒別為1-O-(3-methylbut-3-enyl)-β-D-glucopyranose。

化合物11:無色針晶;ESI-MS m/z(%):214［M］。1H-NMR(400 MHz，acetone-d6)δ:3.85(1H，m，H-1a)，3.78(1H，m，H-1b)，3.91(1H，m，H-3a)，3.87(1H，m，H-3b)2.98(1H，m，H-4)，3.35(1H，m，H-5)，5.42(1H，d，J=7.6 Hz，H-6)，5.86(1H，brs，H-7)，2.98(1H，m，H-9)，4.72(1H，m，H-10a)，4.20(1H，m，H-10b)。13C-NMR(100 MHz，acetone-d6)δ:60.8(t，C-1)，62.8(t，C-3)，45.9(d，C-4)，44.1(d，C-5)，88.2(d，C-6)，125.1(d，C-7)，153.4(s，C-8)，48.5(d，C-9)，60.5(t，C-10)，181.0(s，C-11)。EI-MS m/z(%):214［M］+(2)，166(50)，136(100)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］報道一致，故鑒別為borreriagenin。

化合物12:C17H30O11，黃色油狀物;Negative FAB-MS m/z(%):409［M-H］－;1H-NMR(500 MHz，CD3OD)δ:4.00(1H，m，H-1a)，3.65(1H，m，H-1b)，2.35(2H，t，J=7.1 Hz，H-2)，4.73(1H，m，H-4a)，4.75(1H，m，H-4b)，1.75(3H，s，H-5)，4.27(1H，d，J=7.7 Hz，H-1')，3.17(1H，m，H-2')，3.35(1H，m，H-3')，3.33(1H，m，H-4')，3.45(1H，m，H-5')，3.78(1H，d，J=11.5 Hz，H-6a')，4.41(1H，m，H-6b')，4.37(1H，d，J=7.8 Hz，H-1″)，3.21(1H，m，H-2″)，3.34(1H，m，H-3″)，3.28(1H，m，H-4″)，3.26(1H，m，H-5″)，3.66(1H，d，J=11.9 Hz，H-6a″)，3.86(1H，m，H-6b″)。13C-NMR(125 MHz，CD3OD)δ:69.2(t，C-1)，38.6(t，C-2)，143.8(s，C-3)，112.0(t，C-4)，23.0(q，C-5)，102.5(d，C-1')，75.0(d，C-2')，77.8(d，C-3')，71.4(d，C-4')，77.1(d，C-5')，69.7(t，C-6')，104.1(d，C-1″)，74.8(d，C-2″)，79.4(d，C-3″)，71.4(d，C-4″)，77.9(d，C-5″)，62.2(t，C-6″)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］報道一致，故鑒別為3-methylbut-3-enyl-6-O-β-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranoside。

4 討論

本次在1.1 kg諾麗果肉化學(xué)成分研究中，首次分得了7 mg的鄰苯二甲酸二甲酯。經(jīng)與本實(shí)驗(yàn)室其他課題組人員檢查，大家在近階段使用相同的實(shí)驗(yàn)器皿和同批的化學(xué)試劑，均未發(fā)現(xiàn)鄰苯二甲酸二甲酯成分。該化合物過去只在某些中藥中微量出現(xiàn)［17－18］，現(xiàn)已被普遍認(rèn)為危及人類健康，歐盟及美國都嚴(yán)格限制其在市場出現(xiàn)［19］。目前在南方，食用諾麗果肉十分普遍，有人甚至把其奉為“仙果”。這應(yīng)引起有關(guān)部門重視。

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