赤水撐綠竹根腐病菌室內(nèi)藥劑篩選

任春光，劉曼，倪云躍，向準(zhǔn)，桑維鈞，方洪剛

(1.貴州科學(xué)院生物研究所，貴陽 550009;2.貴州大學(xué)，貴陽 550025;3.貴州赤天化紙業(yè)公司，赤水 564700)

撐綠竹是赤水市引進(jìn)的優(yōu)良雜交種，出筍多，生長快，產(chǎn)量高，無性繁殖力強(qiáng)，既是紙漿材、紡織材，又是優(yōu)良的筍用竹種。隨著竹業(yè)生產(chǎn)集約化程度的逐漸提高，撐綠竹種植面積不斷擴(kuò)大，病害種類、發(fā)病程度也隨之增多。2008年10月—2010年3月對赤水撐綠竹根腐病進(jìn)行了調(diào)查和鑒定，結(jié)果表明撐綠竹根腐病是撐綠竹的重要病害，病原是尖孢鐮孢菌Fusarium oxysporum Schlecht，主要危害根系，嚴(yán)重時引起整株枯死［1］。為了有效控制該病的發(fā)生和蔓延，作者采用生長速率法和懸滴法室內(nèi)測定了8種常用殺菌劑對該病原菌菌絲生長和孢子萌發(fā)的抑制作用，篩選出控制效果較好的殺菌劑，以為田間防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥劑對病菌菌絲生長的抑制試驗(yàn)［1－4］

1.1.1 供試藥劑 藥劑共8種。每種藥劑先配制好比供試濃度高10倍的母液，測定時按系列稀釋法再配制成所需濃度。各種藥劑劑型、生產(chǎn)廠家及稀釋倍數(shù)見表1。

表1 供試殺菌劑及使用濃度

1.1.2 抑菌試驗(yàn) 用8種藥劑配成不同濃度的PDA平板，用打孔器將病菌菌落打成直徑5 mm的菌餅，移到含藥PDA平板上，25℃恒溫培養(yǎng)。另設(shè)清水空白對照。每個處理重復(fù)3次，7 d后，用十字交叉法測量菌落直徑，計算相對抑制率。

相對抑制率(%)=(對照菌落直徑－0.5)－(處理菌落直徑－0.5)/(對照菌落直徑－0.5)×100

1.1.3 藥劑對病原菌孢子萌發(fā)的抑制試驗(yàn)［1－7］供試菌株在PDA培養(yǎng)基上25℃恒溫黑暗培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待有大量分生孢子產(chǎn)生時，加入4%蔗糖溶液使孢子充分懸浮并稀釋(在16×40倍顯微鏡下每視野中有80～100個分生孢子)。分別吸取50 mL孢子懸浮液及等量的農(nóng)藥稀釋液混合，滴在潔凈的凹玻片上，將玻片放入有濕濾紙的保濕培養(yǎng)皿內(nèi)，置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中，以無菌水替代農(nóng)藥作對照，8 h后定時在顯微鏡下觀察對照孢子萌發(fā)情況。當(dāng)對照孢子萌發(fā)率達(dá)到最大時，檢查各處理孢子萌發(fā)率，每處理重復(fù)3次，每個重復(fù)檢測300個孢子。按下式計算孢子萌發(fā)率和藥劑對孢子萌發(fā)的抑制率。

孢子萌發(fā)率(%)=(萌發(fā)的孢子數(shù)量/300)×100

抑菌率(%)=(對照孢子萌發(fā)率－處理孢子萌發(fā)率)/對照孢子萌發(fā)率×100

1.1.4 毒力測定 將抑制率換算成抑制機(jī)率值，以設(shè)定藥劑濃度的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，以抑制機(jī)率值為縱坐標(biāo)，做回歸直線，分別求出各種藥劑對撐綠竹根腐病病原菌的毒力回歸方程及EC50。

2 結(jié)果與分析

2.1 殺菌劑對尖孢鐮孢菌絲生長的影響 以第7天的菌落直徑作檢驗(yàn)，結(jié)果表明，在供試的8種殺菌劑中，以70%敵磺鈉WP、3%廣枯靈AS的抑菌作用最強(qiáng)，其次為70%甲基硫菌靈WP、10%苯醚甲環(huán)唑WG，其余4種殺菌劑抑菌效果相對較差，詳見表2。

2.2 殺菌劑對尖孢鐮孢菌孢子萌發(fā)的影響 顯微鏡觀察表明，在25℃黑暗條件下培養(yǎng)16 h后，對照分生孢子萌發(fā)率為100%;藥劑處理的8種殺菌劑對孢子萌發(fā)均有不同程度的抑制作用。其中70%敵磺鈉WP對孢子萌發(fā)的抑制率95%以上，3%廣枯靈 AS、70%甲基硫菌靈 WP、10%苯醚甲環(huán)唑WG對孢子萌發(fā)的抑制率都在80%以上，剩余幾種相對較差，詳見表3。

2.3 8種藥劑對尖孢鐮孢菌的毒力 在8種藥劑中以70%敵磺鈉WP對尖孢鐮孢菌的毒力最高，其EC50值最小，僅為0.072 5 μg/mL;其次為3%廣枯靈 AS，EC50值為0.112 6 μg/mL，50%代森錳鋅 WP 毒力最低，EC50值為2 395.521 7 μg/mL，詳見表4。

表2 不同藥劑對病菌菌絲生長的抑制作用

3 小結(jié)與討論

殺菌劑室內(nèi)抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，供試的8種殺菌劑在不同濃度下對尖孢鐮孢菌的孢子萌發(fā)和菌絲生長均有不同程度的抑制作用。其中，70%敵磺鈉WP、3%廣枯靈 AS對菌絲生長與孢子萌發(fā)的抑制效果都很明顯;而70%甲基硫菌靈 WP、10%苯醚甲環(huán)唑 WG能影響孢子的萌發(fā)但不同時抑制菌絲的生長，這可能是病原菌在PDA平板上獲得了比蔗糖溶液更好的營養(yǎng)，使菌絲能夠生長伸長。經(jīng)過進(jìn)一步室內(nèi)毒力測定表明，供試8種殺菌劑在一定濃度內(nèi)對尖孢鐮孢菌都有不同程度的抑制作用，并且隨著濃度增加抑制作用加強(qiáng)。至于篩選的藥劑對野外竹林的防效如何，有關(guān)試驗(yàn)正在進(jìn)行中。

表3 不同藥劑對病菌孢子萌發(fā)的影響

表4 藥劑對根腐病病菌的毒力測定

［1］ 任春光，桑維鈞，劉曼，等．撐綠竹雜交竹根腐病的病原鑒定［J］．中國森林病蟲，2011，30(6):5 －7．

［2］ 任春光，劉曼，桑維鈞，等．撐綠竹赤霉病的病原菌鑒定及殺菌劑毒力測定［J］．中國森林病蟲，2009，28(4):5 －7．

［3］ 呂康生，陸小妹．撐×綠雜交竹枯死原因研究初報［J］．廣西植保，2004(2):3－6．

［4］ 胡國良，余采珠，樓君芳，等．高節(jié)竹梢枯病發(fā)生規(guī)律及防治試驗(yàn)［J］．中國森林病蟲，2005，24(5):38 －41．