硫化氫在急性腹膜炎患者血漿中的表達及意義

斯偉宏

（義烏市中心醫(yī)院 普外一科， 浙江 金華 322000）

硫化氫（H2S）是繼NO和CO之后的第三氣體信號分子，由關鍵酶CSE和CBS催化L-半胱氨酸代謝產(chǎn)生[1-2]，在心血管疾病[1]、腸缺血-再灌注損傷大鼠腸黏膜屏障、肝臟功能障礙中起保護作用[3-4]，具有抑制[1-5]、促進[6-7]炎癥反應效應。H2S在急性腹膜炎患者血漿中的表達水平及其意義，國內(nèi)外文獻鮮見報道。故我們加以探討，現(xiàn)闡述如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選擇本院2010年1月到2010年12間急性腹膜炎患者50例（設為A組），其中男30例，女20例，年齡37～60歲，平均（45.5±8.8）歲；體質(zhì)量45～67 kg，平均（57.12±9.46）kg；病程9～23 h，平均（15.48±6.23）h。急性胃潰瘍穿孔11例，急性十二指腸潰瘍穿孔7例，外傷性結(jié)腸破裂25例，絞窄性腸梗阻、腸壞死7例。均無高血壓、慢性阻塞性肺疾病、冠心病、糖尿病等基礎疾病。選擇同期健康體檢者50例為正常對照（設為B組），其中男28例，女22例，年齡34～58歲，平均（43.3±10.2）歲；體質(zhì)量48～72 kg，平均（60.34±10.27）kg。兩組對象的性別、年齡、體質(zhì)量比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑和儀器：敏感硫電極和PXS-270離子計購于上海雷磁儀器廠，TNF-α、IL-6、NO、CRP、內(nèi)毒素試劑盒購自南京建成生物工程研究所，ELx800酶標儀為美國Bio-TEK公司產(chǎn)品；5417R低溫高速離心機為德國Eppendorf公司產(chǎn)品。

1.2.2 標本采集：B組禁食12 h、A組入院時抽肘靜脈血6 mL，室溫靜止30 min后以3000 r/min離心15 min，分離血漿，取3 mL置于-80 ℃冰箱冷凍待測，所有血漿統(tǒng)一編號保存，各項指標均統(tǒng)一標準，一批完成檢測。

1.2.3 檢測指標及方法：酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法測定血漿中TNF-α、IL-6、CRP表達，敏感硫電極法[8]測定血漿H2S濃度；用動態(tài)濁度法檢測血漿中內(nèi)毒素的含量，化學法測定血漿NO含量。

1.3 統(tǒng)計學處理方法 用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計處理。計量資料以±s表示，內(nèi)毒素檢測結(jié)果呈偏態(tài)分布，取對數(shù)處理后呈正態(tài)分布，采用兩獨立樣本均數(shù)t檢驗，相關性采用直線相關分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組對象血漿TNF-α、IL-6、CRP、WBC、N、NO、內(nèi)毒素及H2S的檢測結(jié)果 A組TNF-α、IL-6、CRP、WBC、N、NO、內(nèi)毒素及H2S均顯著高于B組，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。具體見表1。

2.2 各檢測指標間的相關性 H2S與TNF-α、IL-6、CRP、WBC、N、NO、內(nèi)毒素呈正相關（r=0.735、0.683、0.837、0.748、0.842、0.872、0.764，P＜ 0.01）；NO與 TNF-α、IL-6、CRP、WBC、N、內(nèi)毒素呈正相關（r=0.893、0.712、0.698、0.647、0.709、0.723，P＜0.01）。

表1 兩組血漿TNF-α、IL-6、CRP、WBC、N、NO、內(nèi)毒素及H2S的水平變化比較（n=50±s）

表1 兩組血漿TNF-α、IL-6、CRP、WBC、N、NO、內(nèi)毒素及H2S的水平變化比較（n=50±s）

與B組比：aP＜0.01

組別 TNF-α IL-6 CRP 內(nèi)毒素 WBC N NO H2S（ng/L） （ng/L） （mg/L） （EU/L） （×109/L） （×109/L） （μmol/L） （μmol/L）A 49.02±2.62a 437.08±18.43a 66.99±4.86a 1.71±1.02a 16.88±0.94a 10.50±1.17a 119.19±9.93a 42.57±7.18a B 4.08±0.94 227.97±12.92 12.48±1.74 0.06±0.04 6.18±0.86 3.65±0.75 48.43±7.63 24.38±2.69

3 討論

H2S氣體信號分子在人體內(nèi)存在形式：1/3為氣體H2S，2/3為NaHS，主要通過形成硫酸鹽或硫代硫酸鹽而最終排出體外[1-4]。Zhang等[6]研究結(jié)果表明內(nèi)源性的H2S激活白細胞，介導炎癥因子的釋放，在盲腸穿孔膿毒血癥中起促進炎癥反應作用。本研究發(fā)現(xiàn)，A組患者血漿中內(nèi)毒素、CRP、WBC、N均顯著高于B組（P＜0.01），提示機體存在著膿毒血癥；A組H2S顯著高于B組（P＜0.01），與Zhang等[6]研究結(jié)果一致，提示內(nèi)源性H2S在急性腹膜炎所致的膿毒血癥中起重要作用。

TNF-α、IL-6、NO是炎癥因子[6-7]。內(nèi)源性NO可通過抑制血小板和白細胞聚集，清除氧自由基、抑制脂質(zhì)過氧化和改善微循環(huán)等多個環(huán)節(jié)發(fā)揮對腸黏膜屏障的保護作用[3]。過度表達的NO與O2-結(jié)合生成過

氧亞硝酸基，誘導細胞凋亡[9]。TNF家族成員及TNF死亡受體-核轉(zhuǎn)錄因子-кB信號通路在膿毒血癥中起重要作用[10]。本研究結(jié)果顯示A組患者血漿中TNF-α、IL-6、NO水平均顯著高于B組（P＜0.01），與Zhang等[6]研究結(jié)果一致；H2S與TNF-α、IL-6、NO、CRP、WBC、N、內(nèi)毒素呈正相關，提示內(nèi)源性的H2S可能也是一種炎癥因子，在急性腹膜炎所致的膿毒血癥中起重要作用。有研究表明H2S在心血管疾病[1]、腸缺血-再灌注損傷大鼠腸黏膜屏障、肝臟功能障礙中起保護作用[3-4]，具有抑制[1-5]、促進[6-7]炎癥反應效應。提示H2S氣體信號分子的生物活性效應及其機制可能具有細胞和疾病特異性。但內(nèi)源性H2S在急性腹膜炎所致的膿毒血癥中是否起促進炎癥反應作用，尚待進一步研究明確。

[1] Sodha NR, Clements RT, Feng J,et al. The effects of therapeutic sulfide on myocardial apoptosis in response to ischemia-reperfusion injury[J]. Eur J Cardiothorac Surg,2008,33(5):906-913.

[2] Kang K, Zhao M, Jiang H, et al. Role of hydrogen sulfide in hepatic ischemia-reperfusion-induced injury in rats[J].Liver Transpl,2009,15(10):1306-1314.

[3] 閆興軍,盧根林, 鄧勇,等.硫化氫在腸缺血-再灌注損傷大鼠腸黏膜屏障功能障礙中的作用[J].中華實驗外科雜志, 2010,27(1) :71-74.

[4] 盧根林, 閆興軍,鄧勇,等.硫化氫在腸缺血-再灌注損傷大鼠肝臟功能障礙中的作用[J].中華實驗外科雜志, 2010, 27(7) :907-910.

[5] Oh GS, Pae HO, Lee BS, et al.Hydrogen sulfide inhibits nitric oxide production and nuclear factor-kappa B via heme oxygenase-1 expression in RAW264.7 macrophages stimulated with lipopolysac-charide [J].Free Radic Biol Med,2006,41(1):106-119.

[6] Zhang H, Zhi L, Moochhala SM,et al. Endogenous hydrogen sulfide regulates leukocyte trafficking in cecal ligation and puncture-induced sepsis[J]. J Leukoc Biol,2007,82(4):894-905.

[7] Tamizhselvi R, Moore PK, Bhatia M. Hydrogen sulfide acts as a mediator of inflammation in acute pancreatitis:in vitro studies using isolated mouse pancreatic acinar cells[J].J Cell Mol Med,2007,11(2):315-326.

[8] 耿彬,杜軍保,唐朝樞.敏感硫電極法在測定心血管組織細胞及血漿胱硫醚-γ-裂解酶/硫化氫的應用[J].北京大學學報:醫(yī)學版,2005,37(5):545-548.

[9] 毛朝鳴,陳輝樂,王萬鐵,等.內(nèi)皮素-1和一氧化氮在腎缺血再灌注損傷時動態(tài)變化及川芎嗪的干預作用[J].溫州醫(yī)學院學報, 2009, 39(1) :35-38.

[10] 習建華,林麗娜,金立達,等.氯胺酮抗兔肺缺血-再灌注損傷的實驗研究[J].溫州醫(yī)學院學報, 2007, 37(4):337-340.