玫參膠囊對(duì)小鼠神經(jīng)系統(tǒng)影響的實(shí)驗(yàn)研究

王彩霞，程衛(wèi)東 ，李 健 ，楊 萍

（1.甘肅省衛(wèi)生學(xué)校，甘肅 蘭州 730000；2.蘭州大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究所，甘肅 蘭州 730000；3.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029）

婦女在絕經(jīng)前后，由于卵巢功能衰退，雌激素水平明顯下降，導(dǎo)致下丘腦-垂體-性腺軸功能失調(diào)，引起心血管、神經(jīng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)功能紊亂，導(dǎo)致功能性子宮出血、陣發(fā)性潮熱和出汗、外陰及陰道萎縮、骨質(zhì)疏松及失眠、記憶力明顯下降、情緒反常等精神和神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，即為圍絕經(jīng)期綜合征。目前該病發(fā)生率上升，發(fā)病年齡提前，嚴(yán)重影響了婦女生活質(zhì)量。激素替代治療雖然有效，但因副作用而受到限制，中醫(yī)藥以安全有效備受青睞。本研究選用BALB/C小鼠作為動(dòng)物模型，以觀察純中藥制劑玫參膠囊對(duì)BALB/C小鼠神經(jīng)系統(tǒng)的影響，揭示其治療圍絕經(jīng)期綜合征的機(jī)理，為臨床應(yīng)用及新藥開發(fā)提供藥理學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物

玫參膠囊：由玫瑰花、西洋參、熟地、白芍、女貞子、枸杞子、生牡蠣、決明子、酸棗仁、蓮子心、遠(yuǎn)志等中藥組成，并按一定工藝制成膠囊，由北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院方藥系制備。用蒸餾水制成水劑，低、中、高劑量分別為2.15 g/kg、4.30 g/kg、8.60 g/kg。更年欣膠囊：通化方大藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：050401，用蒸餾水制成水劑，給藥劑量為0.73 g/kg。

1.2 動(dòng)物

6周齡 BALB/C小鼠，雌性，體重（20 ±2）g；12月齡 BALB/C小鼠，雌性，體重（30 ±2）g。均由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)：SCXB（京）：2004-0003。

1.3 主要試劑與儀器

戊巴比妥鈉：廣州南方化玻公司進(jìn)口分裝，批號(hào)：961030。氫溴化東莨菪堿注射液：廣州明興制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)：040701。膽堿酯酶（AchE）試劑盒：購自南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20051029。超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒：購自南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20051108。丙二醛（MDA）試劑盒：購自南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20051103。T-D-L-5A型離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠。

2 方法

2.1 對(duì)小鼠自主活動(dòng)及睡眠時(shí)間影響的檢測(cè)

6周齡BALB/C小鼠90只，隨機(jī)分為6組：玫參膠囊低、中、高劑量組，更年欣膠囊組，正常對(duì)照組及模型對(duì)照組，每組15只。玫參膠囊低、中、高劑量組及更年欣膠囊組分別以相應(yīng)劑量藥物灌胃，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組以等量蒸餾水灌胃，各組小鼠每天灌胃1次，連續(xù)給藥30 d，末次給藥后1 h，將小鼠置于自主活動(dòng)測(cè)定儀中，適應(yīng)5 min 后，記錄小鼠10 min 內(nèi)的活動(dòng)次數(shù);休息10 min 后，除正常對(duì)照組小鼠腹腔注射1 ml 蒸餾水外，其余各組小鼠腹腔注射閾劑量戊巴比妥鈉50 mg/kg，以翻正反射消失為入睡時(shí)間，從翻正反射消失至恢復(fù)時(shí)間為睡眠持續(xù)時(shí)間。

2.2 對(duì)小鼠記憶功能影響的檢測(cè)

6周齡BALB/C小鼠90只，隨機(jī)分為6組：玫參膠囊低、中、高劑量組，更年欣膠囊組，正常對(duì)照組及模型對(duì)照組，每組15只。給藥方法同前，末次給藥后1 h，進(jìn)行Y型電迷宮測(cè)試，每鼠測(cè)試15次，記錄各組小鼠正確反應(yīng)次數(shù)。次日進(jìn)行造模[1]，記憶獲得障礙模型制造：腹腔注射東莨菪堿5 mg/kg；記憶鞏固障礙模型制造：皮下注射亞硝酸鈉120 mg/kg；記憶再現(xiàn)障礙模型制造：30%乙醇10 ml/kg 灌胃；正常對(duì)照組用等量生理鹽水代替造模藥。造模后1 h，再進(jìn)行測(cè)試，方法同前。

2.3 對(duì)老齡小鼠腦組織生化指標(biāo)的檢測(cè)[2]

12月齡BALB/C小鼠75只，隨機(jī)分為5組，玫參膠囊低、中、高劑量組，更年欣膠囊組及模型對(duì)照組，每組15只；6周齡BALB/C小鼠15只為正常對(duì)照組，各組給藥方法同前，末次給藥后1 h，將各組小鼠分別斷頭，冰盤上快速剖取全腦，棄去嗅球及小腦，其余大腦用冰生理鹽水沖洗血液，再用濾紙拭干，電子天平稱重后加入9倍冷生理鹽水，在玻璃勻漿器中研磨成10%勻漿，4℃、3600 r/min 離心 5 min，提取上清液，-20℃凍存。按試劑盒要求測(cè)定腦組織中SOD、MDA 及AchE 含量。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用 SPSS 13.0 軟件包，各指標(biāo)均以（x ±s）表示，組間比較采用方差分析。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)小鼠自主活動(dòng)及睡眠時(shí)間的影響（見表1）

表1 各組小鼠自主活動(dòng)及睡眠時(shí)間變化（±s）

表1 各組小鼠自主活動(dòng)及睡眠時(shí)間變化（±s）

注：與正常對(duì)照組比較，▲▲ P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 自主活動(dòng)次數(shù) 睡眠時(shí)間（min）正常對(duì)照組模型對(duì)照組玫參膠囊低劑量組玫參膠囊中劑量組玫參膠囊高劑量組更年欣膠囊組487.9 ±75.7488.1 ±74.2352.2 ±61.6*346.1 ±69.3*211.8 ±54.5**349.6 ±70.8*72.6 ±19.248.9 ±14.2▲▲85.7 ±18.7*128.4 ±25.0**143.1 ±24.7**141.9 ±22.5**

由表1可見，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠的自主活動(dòng)次數(shù)無顯著性差異；睡眠時(shí)間明顯延長(zhǎng)，有顯著性差異（P＜0.01）。與模型對(duì)照組比較，玫參膠囊各劑量組及更年欣膠囊組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)均減少，睡眠時(shí)間延長(zhǎng)，有顯著性差異（P＜0.05 或P＜0.01）。

3.2 對(duì)小鼠記憶功能的影響（見表2）

表2 各組小鼠正確反應(yīng)次數(shù)變化（±s，n=15）

表2 各組小鼠正確反應(yīng)次數(shù)變化（±s，n=15）

注：與正常對(duì)照組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01

組別 造模前 東莨菪堿造模 亞硝酸鈉造模 乙醇造模正常對(duì)照組模型對(duì)照組玫參膠囊低劑量組玫參膠囊中劑量組玫參膠囊高劑量組更年欣膠囊組9.2 ±2.29.3 ±2.49.3 ±1.99.6 ±2.49.7 ±2.09.3 ±1.79.3 ±2.15.4 ±1.9▲9.1 ±1.6*10.4 ±1.5*11.6 ±2.0*9.2 ±2.5*9.2 ±2.15.9 ±1.2▲10.4 ±2.7*12.8 ±2.5*13.9 ±2.1*9.2 ±1.7*9.2 ±2.36.7 ±1.6▲▲9.8 ±1.9*11.3 ±2.5*12.4 ±2.1**9.8 ±1.7**

由表2可見，造模前的Y型迷宮測(cè)試，各組小鼠正確反應(yīng)次數(shù)無顯著性差異。造模后，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組Y型迷宮測(cè)試小鼠正確反應(yīng)次數(shù)明顯減少；與模型對(duì)照組比較，玫參膠囊各劑量組及更年欣膠囊組小鼠正確反應(yīng)次數(shù)均有所增加，有顯著性差異（P＜0.05 或 P＜ 0.01）。

3.3 對(duì)小鼠腦組織生化指標(biāo)影響（見表3）

表3 各組小鼠腦組織生化指標(biāo)變化（±s，n=15）

表3 各組小鼠腦組織生化指標(biāo)變化（±s，n=15）

注：與正常對(duì)照組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別SOD（U/m gprot）MDA（nmol/m gprot）AchE（U/m gprot）正常對(duì)照組模型對(duì)照組玫參膠囊低劑量組玫參膠囊中劑量組玫參膠囊高劑量組更年欣膠囊組13.80 ±2.535.60 ±0.53▲▲8.68 ±3.05*12.15 ±3.16**13.77 ±3.02**9.54 ±4.13*1.32 ±0.120.52 ±0.12▲▲1.06 ±0.19*1.18 ±0.24*1.31 ±0.28*1.29 ±0.31*0.51 ±0.070.21 ±0.12▲0.26 ±0.130.44 ±0.12**0.58 ±0.14**0.24 ±0.08

由表3可見，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠腦組織中SOD、MDA、AchE 含量均降低，有顯著性差異（P＜0.05 或P＜0.01）。與模型對(duì)照組比較，玫參膠囊各劑量組及更年欣膠囊組小鼠腦組織中SOD、MDA、AchE 含量均增加，有顯著性差異（P＜0.05 或 P ＜0.01）。

4 討論

中醫(yī)認(rèn)為，腎藏精化血主生殖，既為生殖之本，又是臟腑生理活動(dòng)的先天之本。婦女絕經(jīng)期前后，腎氣漸衰，天葵將絕，沖任虧虛，精血不足，五臟失卻滋養(yǎng)與濡潤(rùn)，陰精虧虛不能制約浮陽，致心腎不交，故治宜滋水清肝，交通心腎。更年欣膠囊治療心腎不交型絕經(jīng)前后諸證臨床療效滿意[3]，另有報(bào)道補(bǔ)腎活血方可改善缺血再灌注腦損傷小鼠學(xué)習(xí)記憶功能[4]。而玫參膠囊中西洋參、熟地、枸杞子、女貞子滋陰補(bǔ)腎；玫瑰花、白芍、決明子清肝解郁；遠(yuǎn)志、蓮子心、酸棗仁寧心安神、交通心腎，眾藥合用，達(dá)標(biāo)本兼治之功效。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與模型對(duì)照組相比，玫參膠囊各劑量組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)減少，戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間延長(zhǎng)，提示玫參膠囊具有鎮(zhèn)靜作用，可以協(xié)同戊巴比妥鈉的作用；玫參膠囊能增加記憶功能障礙小鼠的正確反應(yīng)次數(shù)，對(duì)3種類型的記憶功能障礙均有效，對(duì)記憶再現(xiàn)障礙及記憶鞏固障礙模型療效顯著，其高劑量組有顯著性差異（P＜0.01）；玫參膠囊能增加老齡小鼠腦組織MDA 含量、SOD 活性、AchE活性，顯示玫參膠囊對(duì)膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)及神經(jīng)細(xì)胞有顯著保護(hù)作用。以上研究結(jié)果提示，玫參膠囊可治療圍絕經(jīng)期綜合征，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂有良好的調(diào)節(jié)作用，從而發(fā)揮其臨床藥理作用。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部.保健食品檢測(cè)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范[Z].2003.

[2]Dunbar G L，Rylett R J，Schnidt B M，et al.Hippcampal choline activity correlates with spatial learning in aged rats[J].Brain Res，2008（604）：267～272.

[3]周穎瑜，陳冠林，許仕杰.周福生教授辨治更年期綜合征經(jīng)驗(yàn)介紹[J].新中醫(yī)，2007，39（8）：12～13.

[4]田國慶，郭賽珊，盧賀起.補(bǔ)腎活血方對(duì)缺血再灌注腦損傷小鼠學(xué)習(xí)記憶功能及海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2003，23（2）:123～127.