熱灸對(duì)直結(jié)腸傷害性擴(kuò)張抑制效應(yīng)的脊髓機(jī)制研究*

李 亮，榮培晶，余玲玲，賁 卉，高昕妍，朱 兵

（中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院針灸研究所，北京 100700）

明代醫(yī)家李梴在其著作《醫(yī)學(xué)入門》中寫到：“凡藥之不及，針之不到，必須灸之?！庇纱丝梢姡樉寞煼ㄓ绕涫蔷姆ㄔ谥嗅t(yī)藥學(xué)中的地位。但是步入近代以來(lái)，隨著“重針輕灸”的趨勢(shì)，灸療的臨床陣地逐漸萎縮，同時(shí)灸療的科學(xué)研究滯后也是影響其在全世界推廣的重要因素。本項(xiàng)目利用可對(duì)分級(jí)強(qiáng)度和分級(jí)面積刺激發(fā)生規(guī)律性應(yīng)答反應(yīng)的脊髓背角會(huì)聚神經(jīng)元作為研究模型，來(lái)探討病理狀態(tài)下不同面積和不同強(qiáng)度溫度熱灸刺激對(duì)會(huì)聚神經(jīng)元的量-效激活反應(yīng)，以期闡明最佳熱灸刺激參數(shù)以及熱灸法作用的神經(jīng)科學(xué)調(diào)節(jié)機(jī)制，進(jìn)一步提高灸療療效，并為其理論的科學(xué)化提供一些實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)選用健康成年雄性 SD大鼠，體重220g～300g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。用10％烏拉坦（urethane，1.0～1.5g/kg體重）腹腔注射麻醉。

1.2 手術(shù)準(zhǔn)備

首先，動(dòng)物仰臥位腹腔注射阿托品100μg，行氣管插管術(shù)，然后移至立體定位儀，并腹腔注射三碘季胺酚，接通呼吸機(jī)進(jìn)行人工呼吸。于背中線切開腰部皮膚，暴露 L1～L3節(jié)段脊髓，并用38℃石蠟油覆蓋，以免干燥。

1.3 細(xì)胞記錄

采用充灌 5％NaCl和 Pontamine sky blue溶液的玻璃微電極（阻抗約10～15MΩ），在微電極操縱器控制下根據(jù)脊髓背角神經(jīng)元的坐標(biāo)定位（脊髓后正中裂旁開 0.5mm～1.5mm，脊髓表面下 500～1500μm）插入電極，尋找所需神經(jīng)元。細(xì)胞放電經(jīng)微電極引入8301微電極放大器及Power-Lab電生理記錄系統(tǒng)，進(jìn)行細(xì)胞放電的放大和信號(hào)處理。

1.4 實(shí)驗(yàn)程序

在找到放電穩(wěn)定的神經(jīng)元后，首先檢查神經(jīng)元對(duì)機(jī)械刺激（包括觸刺激和齒鑷夾皮刺激）的反應(yīng)，觀察外周感受野分布范圍、感受野大小、量化反應(yīng)的性質(zhì)及反應(yīng)的強(qiáng)度。隨后試驗(yàn)這些神經(jīng)元對(duì)CRD刺激（80mmHg）的反應(yīng)，只有對(duì)皮膚和 CRD刺激都發(fā)生反應(yīng)的神經(jīng)元才列入研究對(duì)象。當(dāng)確定記錄到的神經(jīng)元為我們的研究對(duì)象后，首先記錄2min的神經(jīng)元背景活動(dòng)，然后給予大鼠 50s的 CRD刺激，先觀察10s神經(jīng)元對(duì)單純 CRD刺激的反應(yīng)，之后在CRD的第10秒開始給予大鼠30s的熱灸，觀察神經(jīng)元的同時(shí)觀察CRD和熱灸時(shí)的反應(yīng)變化情況。停止熱灸后再觀察10s的 CRD反應(yīng)，停止 CRD后再記錄5s的背景活動(dòng)。此部分實(shí)驗(yàn)熱灸的施加部位以記錄部位對(duì)側(cè)非感受野的“承扶”穴（BL36）為中心。為了便于控制刺激參數(shù)，我們選用不同溫度的熱水作為模擬熱灸刺激，溫度分別為：40℃、42℃、44℃、46℃、48℃、50℃、52℃，刺激面積分別為：0.785cm2（直 徑 Φ1.0cm）、1.766cm2（直 徑Φ1.5cm）、3.14cm2（直徑 Φ2.0cm）、4.906cm2（直徑Φ2.5cm）、7.065cm2（直徑 Φ3.0cm）、9.616cm2（直徑 Φ3.5cm）、12.56cm2（直徑 Φ4.0cm），不同的刺激參數(shù)組合共有49種。

內(nèi)臟傷害性刺激采用直結(jié)腸擴(kuò)張法，將一長(zhǎng)約4cm～6cm的氣囊經(jīng)肛門插入直結(jié)腸，插入的深度約為5cm。內(nèi)臟傷害性傳入由插入直腸內(nèi)的氣囊充氣超過(guò)20s～50s造成 CRD，試驗(yàn)的直結(jié)腸壓力一般控制在80mmHg左右（≥40mmHg為傷害性刺激）。為避免出現(xiàn)過(guò)度刺激以及直結(jié)腸可能的敏感化，重復(fù) CRD刺激應(yīng)為間隔5min以上［1］。

1.5 記錄部位的組織學(xué)檢驗(yàn)

單細(xì)胞記錄結(jié)束后，通過(guò)玻璃微電極通以20μA的負(fù)向直流電 20min～30min，以標(biāo)記記錄位置。留取動(dòng)物心臟灌流固定，取脊髓組織切片做HE染色觀察，參考大鼠腦立體定位圖譜（Paxinos＆Watson，2007），確經(jīng) Pontamine sky blue標(biāo)定微電極的記錄位置。

1.6 數(shù)據(jù)采集與分析

Power-Lab計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)及Chart 5.0 for Windows分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理分析。刺激前、后及差值做描述性統(tǒng)計(jì)（Descriptives），表示為 珋x±s。采用配對(duì) t檢驗(yàn)，組間差異為有顯著性意義（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)中實(shí)時(shí)監(jiān)控心率和體溫。動(dòng)物體溫通過(guò)反饋型加熱儀控制并維持在36℃ ～38℃之間。

2 結(jié)果

2.1 記錄到的神經(jīng)元的一般特性

在脊髓水平的實(shí)驗(yàn)中，于43只 SD大鼠的腰1～3節(jié)段共記錄到137個(gè)神經(jīng)元，其中廣動(dòng)力型神經(jīng)元（wide dynamic range neuron［2］）115 個(gè)，該類神經(jīng)元為本實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象，其他類型的神經(jīng)元22個(gè)。本實(shí)驗(yàn)記錄到的廣動(dòng)力型神經(jīng)元的Pontamine sky blue標(biāo)記大部分位于脊髓 Rexed IV和V板層，小部分位于 I，VI板層。L1～3節(jié)段脊髓背角 WDR神經(jīng)元的外周感受野一般位于記錄部位同側(cè)，每個(gè)神經(jīng)元的感受范圍比較明確，面積從0.2cm2至數(shù)平方厘米不等。大多數(shù)WDR神經(jīng)元在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)沒(méi)有自發(fā)的背景活動(dòng)，偶見單個(gè)的或簇狀的放電，放電頻率很低；但在給予反復(fù)的軀體或內(nèi)臟傷害性刺激后的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，常出現(xiàn)持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)的放電反應(yīng)，有的甚至在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中都存在。這類神經(jīng)元對(duì)感受野的非傷害彎毛刺激、輕壓刺激發(fā)生輕微的激活反應(yīng)，也對(duì)各種傷害性強(qiáng)度的機(jī)械刺激如夾皮以及內(nèi)臟擴(kuò)張等發(fā)生明顯的激活反應(yīng)（見圖1）。

圖1 各種來(lái)自軀體和內(nèi)臟刺激引起的WDR神經(jīng)元的反應(yīng)

2.2 CRD對(duì)脊髓背角WDR神經(jīng)元的激活作用

相關(guān)文獻(xiàn)［1，3］證明，≥40 mmHg 的 CRD 為傷害性的內(nèi)臟刺激。我們的實(shí)驗(yàn)中在10個(gè) WDR神經(jīng)元觀察了80mmHg直結(jié)腸擴(kuò)張（CRD）刺激引起的神經(jīng)元的反應(yīng)，神經(jīng)元從背景活動(dòng)的4.95±1.86spikes/s增加到 17.67±2.41spikes/s，增加率是背景活動(dòng)的256.9％±9.12％。如圖2顯示，80mmHgCRD刺激后與刺激前的空白對(duì)照組相比有非常顯著的差異（P＜0.001），表明來(lái)自同神經(jīng)節(jié)段的內(nèi)臟傷害性強(qiáng)度的傳入能明顯激活背角神經(jīng)元。

圖3 當(dāng)刺激溫度為40℃和42℃，刺激面積直徑為2.5cm時(shí)，體表非感受野熱灸對(duì)CRD引起的WDR神經(jīng)元的激活反應(yīng)的影響示意圖

圖2 80mmHgCRD對(duì)脊髓背角WDR神經(jīng)元的激活作用

2.3 體表非感受野不同參數(shù)熱灸對(duì)CRD引起脊髓背角WDR神經(jīng)元激活反應(yīng)的影響的

在CRD引起脊髓WDR神經(jīng)元穩(wěn)定激活的基礎(chǔ)上，我們觀察了在體表非感受野（以對(duì)側(cè)非感受野的“承扶”BL36為中心）施加不同參數(shù)的熱灸對(duì)CRD引起的神經(jīng)元激活反應(yīng)的影響。本實(shí)驗(yàn)在記錄的WDR神經(jīng)元觀察到，非感受野的機(jī)械夾皮刺激對(duì)神經(jīng)元的自發(fā)性背景放電有較為明顯的抑制作用。之后我們?cè)贑RD引起脊髓背角 WDR神經(jīng)元穩(wěn)定激活的基礎(chǔ)上，分別觀察了體表非感受野的“承扶穴”（BL36）不同參數(shù)的熱灸對(duì)CRD引起的神經(jīng)元激活反應(yīng)的影響。如圖3顯示，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)刺激溫度為40℃和42℃時(shí)，無(wú)論刺激面積多大，熱灸對(duì)CRD引起的WDR神經(jīng)元的激活反應(yīng)都沒(méi)有產(chǎn)生任何影響。

圖4 44℃ ～Φ2.5cm熱灸對(duì) CRD引起的WDR神經(jīng)元的激活反應(yīng)的影響

圖4顯示，當(dāng)刺激溫度為 44℃時(shí)，大部分面積的熱灸刺激對(duì)CRD引起的WDR神經(jīng)元的激活反應(yīng)都沒(méi)有產(chǎn)生影響，只是在刺激面積直徑為3.5cm時(shí)，熱灸使得由CRD引起的 WDR神經(jīng)元的放電反應(yīng)從熱灸前的15.2±2.12spikes/s下降到熱灸后時(shí)13.51±3.52spikes/s，該熱灸組合對(duì) WDR神經(jīng)元CRD反應(yīng)的抑制率為22.12±3.42％。這一結(jié)果表明，44℃ ～Φ3.5cm組合對(duì) CRD引起的這類神經(jīng)元的興奮反應(yīng)有一定程度的抑制作用，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果表明具有顯著性差異（P＜0.05）。

圖5顯示，當(dāng)刺激溫度為 46℃，刺激面積直徑為1.0cm和1.5cm時(shí)，熱灸刺激對(duì)CRD引起的WDR神經(jīng)元的激活作用沒(méi)有影響。圖7的統(tǒng)計(jì)圖可以看出與對(duì)照組相比，46℃ ～Φ1.0cm和 46℃ ～Φ1.5cm組合熱灸刺激前后 CRD引起的WDR神經(jīng)元的激活反應(yīng)沒(méi)有差異。

圖5 當(dāng)刺激溫度為46℃，刺激面積直徑為1.0和1.5cm時(shí)，體表非感受野熱灸對(duì)CRD引起的WDR神經(jīng)元的激活反應(yīng)的影響示意圖

圖7顯示，當(dāng)刺激面積直徑為2.0cm時(shí)，在記錄到的12個(gè)神經(jīng)元觀察到CRD所引起的神經(jīng)元的激活反應(yīng)從熱灸刺激前的14.78±3.32spikes/s下降到熱灸時(shí)的11.82±2.13spikes/s，抑制率為20％±2.45％。由圖 6的統(tǒng)計(jì)圖可以看出，46℃ ～Φ2.0cm的熱灸組合與對(duì)照相比有差異（P＜0.05）。圖7顯示，而當(dāng)刺激面積直徑達(dá)到2.5cm時(shí)。我們發(fā)現(xiàn)在記錄到的16個(gè)神經(jīng)元觀察到CRD所引起的神經(jīng)元的激活反應(yīng)從熱灸刺激前的14.63±4.08spikes/s下降到熱灸時(shí)的 9.12±3.13spikes/s，抑制率為40％ ±3.56％。由圖6可以看出，46℃ ～Φ2.5cm的熱灸組合與對(duì)照相比有顯著差異（P＜0.01）。當(dāng)刺激面積直徑為 3.0cm時(shí)（圖 7），我們發(fā)現(xiàn)由CRD引起的神經(jīng)元激活反應(yīng)從熱灸刺激前的16.34±3.85spikes/s下降到熱灸時(shí)的9.04±3.96spikes/s，抑制率為 41.32％ ±2.36％。由圖 6可以看出，46℃ ～Φ3.0cm的熱灸組合與對(duì)照相比有顯著差異（P＜0.01）。

圖6 刺激溫度為46℃時(shí)，體表非感受野不同面積的熱灸對(duì)CRD引起的WDR神經(jīng)元激活反應(yīng)的影響

圖7 當(dāng)刺激溫度為46℃，刺激面積直徑為2.0、2.5、3.0、3.5和 4.0cm 時(shí)，體表非感受野熱

與前2種刺激組合類似，46℃ ～Φ3.5cm熱灸組合使得由CRD引起WDR神經(jīng)元的激活反應(yīng)從15.95±2.55spikes/s下降到熱灸時(shí)的8.64±4.86spikes/s，抑制率為 41.34％ ±3.35％。由圖 6可以看出，46℃ ～Φ3.5cm的熱灸組合與對(duì)照相比有顯著差異（P＜0.01）。最后，當(dāng)刺激面積直徑為4.0cm時(shí)，熱灸對(duì) CRD激活反應(yīng)也存在抑制作用，只是抑制的強(qiáng)度較前3個(gè)組合有所減弱，WDR神經(jīng)元的放電從17.01±1.55spikes/s下降到熱灸時(shí)的12.24±1.86spikes/s，抑制率為 28.14％ ±4.35％。由圖6的統(tǒng)計(jì)圖可以看出，46℃ ～Φ4.0cm的熱灸組合與對(duì)照相比有差異（P＜0.05）。

圖8 刺激溫度為48℃時(shí)，體表非感受野不同面積的熱灸對(duì)CRD引起的WDR神經(jīng)元激活反應(yīng)的影響

圖9 刺激溫度為48℃時(shí)，體表非感受野不同面積的熱灸對(duì)CRD引起的WDR神經(jīng)元激活反應(yīng)的影響示意圖

結(jié)合圖8和圖 9我們發(fā)現(xiàn)，當(dāng)刺激溫度為48℃，刺激面積直徑為1.0cm時(shí)，熱灸刺激對(duì) CRD引起的WDR神經(jīng)元的激活作用沒(méi)有影響。當(dāng)刺激面積直徑達(dá)到1.5cm時(shí)，48℃的熱灸刺激開始出現(xiàn)抑制作用。在記錄的18個(gè)細(xì)胞中我們發(fā)現(xiàn)，48℃ ～Φ1.5cm熱灸組合可以使CRD對(duì) WDR神經(jīng)元的激活反應(yīng)從17.89±5.12spikes/s下降到熱灸時(shí)的12.52±4.86spikes/s，抑制率為 31.15％ ±2.25％。由圖8的統(tǒng)計(jì)圖可以看出，48℃ ～Φ1.5cm的熱灸組合與對(duì)照相比有明顯差異（P＜0.05）。當(dāng)刺激面積直徑為 2.0、2.5、3.0、3.5cm 時(shí)，48℃ 的熱灸刺激分別使CRD對(duì)WDR神經(jīng)元的激活反應(yīng)從18.12±3.14spikes/s、16.35 ± 5.17spikes/s、15.46 ±4.31spikes/s、17.86±1.88spikes/s下降為 9.78±1.25spikes/s、7.85 ± 3.69spikes/s、7.68 ±4.12spikes/s、9.1 ± 2.38spikes/s，抑 制 率 分 別 為44.04％ ±1.35％、55±5.31％、53.54±1.56％和51.25％ ±1.56％。圖9顯示，這4個(gè)熱灸組合與對(duì)照相比均有極顯著的差異（P＜0.001），說(shuō)明在這幾種刺激參數(shù)下，熱灸有非常好的抑制內(nèi)臟疼痛的作用。而當(dāng)刺激面積直徑為4.0cm時(shí)，48℃的熱灸對(duì)CRD激活反應(yīng)的抑制作用有輕微的減弱，WDR神經(jīng)元的放電從19.23±5.31spikes/s下降為11.13±2.31spikes/s，抑制率為 43±3.35％，與對(duì)照組相比有顯著差異（P＜0.05）。

圖10 刺激溫度為50℃時(shí)，體表非感受野不同面積的熱灸對(duì)CRD引起的WDR神經(jīng)元激活反應(yīng)的影響

圖10顯示，在觀察50℃的熱灸對(duì) CRD引起的脊髓背角WDR神經(jīng)元激活反應(yīng)的影響實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)與48℃相同，當(dāng)刺激面積直徑為1.0cm時(shí)，熱灸刺激對(duì)CRD引起的WDR神經(jīng)元的激活作用沒(méi)有影響。當(dāng)刺激面積直徑為1.5cm時(shí)，在記錄的10個(gè)WDR神經(jīng)元中我們發(fā)現(xiàn)，50℃的熱灸刺激可以使CRD對(duì)WDR神經(jīng)元的激活反應(yīng)從14.85±1.18spikes/s下降到熱灸時(shí)的 9.25±1.86spikes/s，抑制率為40.51％±2.55％，由圖10的統(tǒng)計(jì)圖可以看出50℃ ～Φ1.5cm的熱灸組合與對(duì)照相比有明顯差異（P＜0.01）。當(dāng)刺激面積直徑達(dá)到2.0cm～4.0cm之后，我們發(fā)現(xiàn)50℃的熱灸對(duì)CRD的激活反應(yīng)都有非常明顯的抑制作用。50℃ ～Φ2.0cm熱灸組合使得CRD誘發(fā)的WDR的放電反應(yīng)從16.56±2.86spikes/s下降到8.35±1.43spikes/s；50℃ ～Φ2.5cm熱灸組合使得CRD誘發(fā)的WDR的放電反應(yīng)從 17.54±2.86spikes/s下降到 7.35±3.44spikes/s；50℃ ～Φ3.0cm熱灸組合使得 CRD誘發(fā)的WDR的放電反應(yīng)從16.76±1.96spikes/s下降到8.15±2.43spikes/s；50℃ ～Φ3.5cm熱灸組合使得CRD誘發(fā)的WDR的放電反應(yīng)從15.86±2.86spikes/s下降到7.15±2.43spikes/s；50℃ ～Φ4.0cm熱灸組合使得CRD誘發(fā)的WDR的放電反應(yīng)從 18.52±1.37spikes/s下降到 8.85±4.35spikes/s。圖10顯示，我們可以看到以上 5個(gè)刺激組合與對(duì)照組相比均存在非常顯著的差異（P＜0.001）。但是我們把 48℃ ～Φ2.0cm、48℃ ～Φ2.5cm、48℃ ～Φ3.0cm、48℃ ～Φ3.5cm 4個(gè)組合分別與 50℃ ～Φ2.0cm、50℃ ～Φ2.5cm、50℃ ～Φ3.0cm、50℃ ～Φ3.5cm 相對(duì)比發(fā)現(xiàn)，50℃ 的熱灸對(duì)CRD誘發(fā)的WDR的放電反應(yīng)的抑制作用并不比48℃的熱灸所產(chǎn)生的抑制作用更強(qiáng)，各組之間相比較均不存在顯著差異（P＞0.05）。

繼續(xù)升高刺激溫度，我們?cè)谟^察52℃的熱灸對(duì)CRD的這種激活反應(yīng)的抑制作用是發(fā)現(xiàn)，52℃ ～Φ1.0cm組合同樣未產(chǎn)生抑制作用。當(dāng)刺激面積直徑為1.5cm時(shí)，我們發(fā)現(xiàn) 52℃的熱灸刺激可以使CRD對(duì)WDR神經(jīng)元的激活反應(yīng)從16.75±3.18spikes/s下降到熱灸時(shí)的 9.58±3.21spikes/s，抑制率為39.21％±3.15％。由圖11的統(tǒng)計(jì)圖可以看出，52℃ ～Φ1.5cm的熱灸組合與對(duì)照相比有明顯差異（P＜0.01）。

圖11 刺激溫度為52℃時(shí)，體表非感受野不同面積的熱灸對(duì)CRD引起的WDR神經(jīng)元激活反應(yīng)的影響

當(dāng)刺激面積直徑達(dá)到2.0cm～4.0cm之后，我們發(fā)現(xiàn)52℃的熱灸對(duì)CRD的激活反應(yīng)與50℃的抑制作用類似，都有非常明顯的抑制作用。52℃ ～Φ2.0cm熱灸組合使得CRD誘發(fā)的 WDR的放電反應(yīng)從 19.56±1.76spikes/s下降到 8.82±3.13spikes/s，抑制率為 44.78±1.35％；52℃ ～Φ2.5cm熱灸組合使得CRD誘發(fā)的 WDR的放電反應(yīng)從 14.54±1.66spikes/s下降到7.35±2.53spikes/s，抑制率為 50.21％ ±3.15％；52℃ ～Φ3.0cm熱灸組合使得CRD誘發(fā)的 WDR的放電反應(yīng)從13.98±5.46spikes/s下降到7.15±3.53spikes/s，抑制率為 52.78％ ±5.35％；52℃ ～Φ3.5cm熱灸組合使得CRD誘發(fā)的 WDR的放電反應(yīng)從 17.84±3.26spikes/s下降到 9.17±3.65spikes/s，抑制率為 47.78％ ±5.35％；52℃ ～Φ4.0cm熱灸組合使得CRD誘發(fā)的 WDR的放電反應(yīng)從19.12±3.85spikes/s下降到8.98±2.35spikes/s，抑制率為51.78±5.35％。如圖 11顯示，我們可以看到以上5個(gè)刺激組合與對(duì)照組相比均存在非常顯著的差異（P＜0.001）。同樣，我們把52℃ ～Φ2.0cm、52℃ ～Φ2.5cm、52℃ ～Φ3.0cm、52℃ ～Φ3.5cm 4個(gè)組合分別與 50℃ ～Φ2.0cm、50℃ ～Φ2.5cm、50℃ ～Φ3.0cm、50℃ ～Φ3.5cm 相對(duì)比發(fā)現(xiàn)，52℃的熱灸對(duì) CRD誘發(fā)的 WDR的放電反應(yīng)的抑制作用也沒(méi)有比50℃的熱灸所產(chǎn)生的抑制作用更強(qiáng)，各組之間相比較均不存在顯著差異（P＞0.05）；而把 48℃ ～Φ2.0cm、48℃ ～Φ2.5cm、48℃ ～Φ3.0cm、48℃ ～Φ3.5cm 4個(gè)組合分別與52℃ ～Φ2.0cm、52℃ ～Φ2.5cm、52℃ ～ Φ3.0cm、52℃ ～Φ3.5cm相比較，也發(fā)現(xiàn)52℃的熱灸對(duì) CRD誘發(fā)的WDR的放電反應(yīng)的抑制作用也沒(méi)有比48℃的熱灸所產(chǎn)生的抑制作用更強(qiáng)，各組之間相比較均不存在顯著差異（P＞0.05）。

3 討論

以往的眾多研究已經(jīng)對(duì)針刺作用尤其是針刺鎮(zhèn)痛的機(jī)制有了較為詳盡的闡述，而對(duì)于灸法的作用機(jī)制以及灸法刺激參數(shù)的量化研究相對(duì)較少。我們實(shí)驗(yàn)室在以往的工作中發(fā)現(xiàn)針刺的傳入信息可分別經(jīng)外周A類或C類纖維的傳入到達(dá)脊髓背角。而傷害性范圍的熱刺激同樣可以激活 Aδ和 C類纖維［4］。另外的工作發(fā)現(xiàn)針刺和內(nèi)臟傷害性傳入信號(hào)在脊髓水平發(fā)生會(huì)聚和相互作用，針刺穴位能夠抑制內(nèi)臟傷害性傳入所激活的背角神經(jīng)元反應(yīng)，且這種作用需要脊髓上中樞參與［5］。提示脊髓水平對(duì)軀體和內(nèi)臟傳入信息有會(huì)聚和整合作用。

用遠(yuǎn)高于激活C類纖維的強(qiáng)電流刺激動(dòng)物脊髓背角和三叉神經(jīng)尾側(cè)核會(huì)聚神經(jīng)元的感受野，可引起最大的C類纖維的興奮反應(yīng)，此時(shí)用44～52℃的熱水浸燙尾巴或后肢，或用齒鑷重夾尾巴、腳爪和口鼻部等傷害性刺激、以及腹腔注射緩激肽作為內(nèi)臟傷害感受器的強(qiáng)刺激和用電刺激尾巴都能明顯抑制會(huì)聚神經(jīng)元對(duì)C類纖維傳入的反應(yīng)，最強(qiáng)的刺激可完全阻斷C類纖維的傳入活動(dòng)，停止刺激后還有明顯后效應(yīng)。而在尾巴等處用刷毛等非傷害性刺激則不能抑制會(huì)聚神經(jīng)元對(duì)C類纖維的傳入反應(yīng)。自然傷害性刺激如輻射熱照射、齒鑷夾皮激活的會(huì)聚神經(jīng)元反應(yīng)也可被異位的傷害性機(jī)械或熱的刺激所抑制。電刺激尾巴引起的大鼠嘶叫閾可被腹腔注射致痛劑苯基苯醌明顯升高。這種作用在機(jī)體任何一個(gè)部位的傷害性刺激都可抑制任何其它區(qū)域的傷害性反應(yīng)的效應(yīng)被稱為“彌漫性傷害抑制性控制”（diffuse noxious inhibitory controls，DNIC）［6～11］。由于DNIC僅影響會(huì)聚神經(jīng)元的活動(dòng)，因此認(rèn)為，會(huì)聚神經(jīng)元對(duì)正常疼痛的感知是必需的，會(huì)聚神經(jīng)元對(duì)傷害性熱刺激范圍內(nèi)的微小變化的反應(yīng)性比高閾值的神經(jīng)元敏感的多，因此有可能會(huì)聚神經(jīng)元在痛的感覺分辨過(guò)程中起的作用更大。

另外，DNIC需要脊髓上中樞調(diào)控，在脊髓動(dòng)物，會(huì)聚神經(jīng)元對(duì)外周感受野的刺激反應(yīng)不受影響。但多種傷害性刺激，如夾皮、熱水浸燙尾巴、輻射熱刺激、腹腔注射緩激肽或電刺激尾巴等，對(duì) C類纖維的傳入反應(yīng)無(wú)明顯抑制作用，或只產(chǎn)生很弱（＜30％）的抑制，這種抑制的持續(xù)時(shí)間一般很短，僅在施加條件刺激的最初10s左右出現(xiàn)。熱水浸燙尾巴、用齒鑷夾爪對(duì)C類纖維傳入活動(dòng)的抑制，也可被在脊髓 C2水平滴注局部麻醉劑利多卡因所阻斷［12～14］。

綜上所述，“彌漫性傷害抑制性控制”可能是神經(jīng)系統(tǒng)抗痛效應(yīng)的機(jī)能之一，構(gòu)成一個(gè)脊髓-脊髓上中樞-脊髓的神經(jīng)回路，整合來(lái)自外周的傷害性信號(hào)，通過(guò)DNIC系統(tǒng)發(fā)揮痛的負(fù)反饋調(diào)節(jié)。根據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，體表特定參數(shù)的熱灸能夠很好地抑制內(nèi)臟傷害性反應(yīng)，其作用機(jī)制很可能就是通過(guò)如上所述的DNIC系統(tǒng)。并且只有當(dāng)溫度和面積都達(dá)到一定的水平時(shí)，熱灸的這種抑制作用才最明顯，但是舌面積越大、溫度越高抑制作用就越好?根據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，刺激溫度在 46℃ ～48℃范圍內(nèi)，刺激面積直徑在2.0～3.5cm范圍內(nèi)就能夠取得良好的治療效果。

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△通訊作者：朱 兵，男，北京市東直門內(nèi)南小街16號(hào)，中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院理論研究所，Tel：010-64014411。