低滲液固定液對(duì)外周血淋巴細(xì)胞染色體制作質(zhì)量影響的分析

黃金林 陳碧艷

【中圖分類號(hào)】R245.81 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1672－3783(2011)07－0020－02

外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)染色體具有時(shí)間短、技術(shù)簡(jiǎn)便、可重復(fù)取材等優(yōu)點(diǎn)，已在臨床染色體檢查中廣泛使用。成為許多細(xì)胞遺傳室檢查染色體基本項(xiàng)目，而且量也越來越大。然而，在基層單位，由于人們的意識(shí)不足和宣傳不夠廣泛，要求做染色體的患者不多，使染色體檢查往往得不到連續(xù)性和常態(tài)化，從而造成染色體培養(yǎng)制作的質(zhì)量不是很穩(wěn)定，時(shí)好時(shí)壞，主要表現(xiàn)在染色體分散不好、形態(tài)及著色較差的現(xiàn)象。在實(shí)際工作中，我們發(fā)現(xiàn)造成這種原因可能與低滲液、固定液有關(guān)。由于平時(shí)標(biāo)本量不多，有時(shí)一個(gè)星期只有一個(gè)標(biāo)本，一個(gè)月也才有3～5個(gè)，因此造成配制的低滲液，冰乙酸、甲醇按1:3配制成固定液后，開啟的冰乙酸、甲醇一次性使用不完，在室內(nèi)放置留下一次培養(yǎng)制作時(shí)用。為了探討低滲液，冰乙酸、甲醇開啟后放置時(shí)間的長(zhǎng)短是否對(duì)染色體培養(yǎng)制作的質(zhì)量有影響，分別做檢測(cè)。

資料與方法

低滲液是指稱取5.59g的氯化鉀加入1000ml去離子水即成0.075MOL/L氯化鉀低滲液。固定液是指冰乙酸、甲醇按1:3配制而成，通常是現(xiàn)配現(xiàn)用。本文所檢測(cè)主要是指開啟的冰乙酸、甲醇及配制0.075MOL/L氯化鉀一次性使用不完，在室內(nèi)放置時(shí)間10天內(nèi)、30天以上各為一組，每組檢測(cè)5個(gè)標(biāo)本。

使用同一批號(hào)的培養(yǎng)基，在確定培養(yǎng)效果良好，加秋水仙堿量及作用時(shí)間，低滲時(shí)間，現(xiàn)配現(xiàn)用固定液，固定三次，每標(biāo)本滴片兩張，每片一滴，在油鏡下進(jìn)行染色體核型分析。

每組各計(jì)染色體分裂相500個(gè)，選擇分裂相形態(tài)好，條帶在300以上，著色均勻的核型進(jìn)行分析。結(jié)果見表1

討論

外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)染色體制作包括培養(yǎng)基，外周血標(biāo)本，秋水仙素，低滲，固定，滴片，烤片，顯帶，染色等一系列過程。每個(gè)環(huán)節(jié)緊密相關(guān)，是獲得高質(zhì)量染色體片的根本。高質(zhì)量染色體片應(yīng)該是染色體長(zhǎng)度適中，分散均勻，相互纏繞、重疊少，無(wú)扭曲、形態(tài)好，著色均勻，深淺帶界線分明。這其中與低滲技術(shù)處理是否得當(dāng)，低滲液、固定液的品質(zhì)起關(guān)鍵作用。細(xì)胞培養(yǎng)低滲技術(shù)1952年美籍華人徐道覺首先建立的。經(jīng)過應(yīng)用0.075MOL/L氯化鉀低滲處理分裂細(xì)胞時(shí)，可使細(xì)胞膜膨脹，擴(kuò)大細(xì)胞的空間，改善細(xì)胞內(nèi)染色體相互纏繞、重疊現(xiàn)象，有利于染色體的準(zhǔn)確辨認(rèn)和計(jì)數(shù)，具有使染色體輪廓清楚，染色性增強(qiáng)，帶型特征更清楚的優(yōu)點(diǎn)。固定液是由冰乙酸、甲醇按1:3配制而成，固定液質(zhì)量的好壞直接影響染色體形態(tài)和著色，固定液能使細(xì)胞分散良好，形態(tài)清晰而易識(shí)別，因而強(qiáng)調(diào)固定液現(xiàn)配現(xiàn)用。由于冰乙酸成分較重容易沉淀，同時(shí)反復(fù)開啟冰乙酸及甲醇容易揮發(fā)和吸收空氣中的水分使其中成分改變，從而影響固定液質(zhì)量。由于我室標(biāo)本量少，使用配制好的低滲液及反復(fù)開啟冰乙酸、甲醇放置的時(shí)間長(zhǎng)，反復(fù)重復(fù)使用，而出現(xiàn)染色體片質(zhì)量不穩(wěn)定的現(xiàn)象。從表1中的兩組對(duì)比表明，在10天內(nèi)使用制作染色體可分析核型明顯高于30天以上使用制作染色體可分析核型，為了確保制作染色體片質(zhì)量的穩(wěn)定，應(yīng)用新配制的低滲液、固定液。

作者單位：533000 廣西百色市婦幼保健院