復(fù)方魚腥草軟膠囊中（R，S）-告依春含量測定方法的研究

黃舒麗

廣東仙樂制藥有限公司，廣東汕頭 515041

復(fù)方魚腥草軟膠囊是由復(fù)方魚腥草片改變劑型而來的。本方由魚腥草、黃芩、板藍(lán)根、連翹和金銀花等藥味和基質(zhì)組成，具有清熱解毒的功效，用于外感風(fēng)熱所致的急喉痹、急乳蛾，癥見咽部紅腫、咽痛；急性咽炎、扁桃體炎見上述癥候者[1-3]。復(fù)方魚腥草片已收載于《中國藥典》2010年版中[4]，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅有黃芩苷含量的測定方法，為了更有效地控制和提高復(fù)方魚腥草軟膠囊的質(zhì)量，針對復(fù)方魚腥草軟膠囊中的另一主要有效成分（R，S）-告依春，建立HPLC法進(jìn)行定量測定。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，為復(fù)方魚腥草軟膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters e2695高液相色譜儀（美國沃特斯公司），配有梯度洗脫泵、在線脫氣機(jī)、自動進(jìn)樣器、UV-2487紫外檢測器、Empower 2色譜工作站；DS-7510DTH型超聲清洗器（上海生析超聲儀器有限公司）；CP225D型電子天平（賽多利斯中國有限公司）。

1.2 試藥

（R，S）-告依春對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111753-201103）；復(fù)方魚腥草軟膠囊（廣東仙樂制藥有限公司提供，批號：20110201、20110202、20110203）；甲醇為色譜純（美國TEDIA“天地”試劑公司）；超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為 Hypersil ODS C18柱（4.6 mm×200 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.02%磷酸溶液（7∶93）；流速：1.0 ml/min；柱溫：35℃；檢測波長：245 nm；進(jìn)樣量：20 μl。 理論板數(shù)按（R，S）-告依春峰計(jì)不低于4000。

2.2 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物約0.75 g，精密稱定，置25 ml量瓶中，精密加入50%乙醇20 ml，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）45 min，放冷至室溫，加50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取（R，S）-告依春對照品 5 mg，置 100 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，再精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每毫升含 5 μg（R，S）-告依春對照品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備

按處方比例及工藝自制除去板藍(lán)根的陰性對照品，再按“2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

2.5 方法專屬性考察

按上述色譜條件分別進(jìn)樣供試品溶液、對照品溶液和缺板藍(lán)根的陰性對照溶液進(jìn)行分析，結(jié)果陰性對照無干擾。見圖1。

圖1 復(fù)方魚腥草軟膠囊樣品、（R，S）-告依春對照品、缺板藍(lán)根的陰性對照溶液HPLC色譜

2.6 線性關(guān)系考察

精密稱?。≧，S）-告依春對照品 5.13 mg，置 100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品儲備液。分別精密吸取儲備液 1、2、4、6、8、10 ml置 50 ml量瓶中， 加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得（R，S）-告依春質(zhì)量濃度分別為1.026、2.052、4.104、6.156、8.208、10.260 μg/ml的系列對照品溶液。分別進(jìn)樣20 μl，記錄峰面積。以對照品溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)X，與其相應(yīng)的峰面積積分值為縱坐標(biāo)Y，得回歸方程：Y=386900X+21780，r=0.9996， 表明 （R，S）-告依 春 在1.026～10.260 μg/ml的線性關(guān)系良好。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取質(zhì)量濃度為5 μg/ml的 （R，S）-告依春對照品溶液20 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，依法測定，計(jì)算得其峰面積RSD為0.84%。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

分別精密稱取復(fù)方魚腥草軟膠囊（批號：20110201）6份，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測定，計(jì)算得樣品中（R，S）-告依春質(zhì)量含量（n=6）分別為 44.3、45.9、45.8、45.6、45.3、44.7 mg/粒， 平均每粒 45.3 mg/粒，RSD 為 1.42%，測定結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取同一批樣品（批號：20110201）的供試品溶液，分別在 0、2、4、8、12、16 h 進(jìn)行測定，計(jì)算得（R，S）-告依春峰面積的RSD為1.29%，表明供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

取已測定的復(fù)方魚腥草軟膠囊（批號：20110201）內(nèi)容物6份，每份 0.75 g，精密稱定，分別精密加入（R，S）-告依春對照品溶液（5 μg/ml）10 ml，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測定，計(jì)算回收率，結(jié)果（R，S）-告依春平均回收率為96.2%，RSD為1.13%。見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.11 樣品含量測定

分別取批號為 20110201、20110202、20110203的樣品，制備供試品溶液，依法測定，用外標(biāo)法計(jì)算，得樣品中（R，S）-告依春的含量。見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（n=3）

3 討論

3.1 流動相的選擇

曾考察過乙腈-0.05%磷酸溶液，甲醇-0.02%磷酸溶液為流動相測定（R，S）-告依春，結(jié)果均能達(dá)到滿意的分離效果，（R，S）-告依春峰達(dá)到基線分離，峰形對稱，但前者（R，S）-告依春峰略有拖尾，因此選用甲醇-0.02%磷酸溶液為流動相。

3.2 提取條件的考察

對（R，S）-告依春的提取方法進(jìn)行了考察，分別比較了超聲處理與加熱回流兩種提取方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這兩種方法的提取結(jié)果中（R，S）-告依春的含量幾乎無差異。由于超聲處理簡便、快捷，因此選用超聲處理作為提取方法，并對提取時(shí)間15、30、45、60 min進(jìn)行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲處理45 min后（R，S）-告依春提取率幾乎無變化，因此選擇提取時(shí)間為45 min。

3.3 色譜條件的選擇

取（R，S）-告依春對照品溶液在波長 200～400 nm 范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果（R，S）-告依春色譜峰在245 nm波長處有最大吸收，故選擇245 nm作為檢測波長。

[1]王瑞,楊海英,楊琪偉.板藍(lán)根的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中草藥,2010,41(3):478.

[2]羅璇,李小芩,楊岳隆,等.復(fù)方魚腥草軟膠囊的鑒別和含量測定方法研究[J].中國中藥雜志,2004,29(7):702-703.

[3]王鋼力,聶黎行,遲玉明,等.HPLC法測定板藍(lán)根和板藍(lán)根顆粒中RS-告伊春和腺苷[J].中草藥,2009,40(10):1587-1589.

[4]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:916-917.