高效液相色譜法測定鹽酸萘替芬搽劑中鹽酸萘替芬的含量

王 璐

鹽酸萘替芬搽劑主要成分為鹽酸萘替芬（10 mg/ml）、甘油、95%的乙醇等。鹽酸萘替芬為苯甲胺衍生物，其作用機(jī)制為選擇性地抑制真菌角鯊烯環(huán)氧化酶，干擾真菌細(xì)胞壁的麥角固醇的生物合成，影響真菌的脂質(zhì)代謝，使真菌細(xì)胞損傷或死亡而起到殺菌和抑菌作用。

鹽酸萘替芬搽劑經(jīng)過臨床使用觀察，殺菌效果好，不良反應(yīng)小，使用方便，療效顯著。本文介紹筆者采用高效液相色譜法測定鹽酸萘替芬搽劑中的鹽酸萘替芬含量的方法。

1 儀器與試藥

Agilent1260系列高效液相色譜儀（G1314F VWD、G1316A TCC、G1329B ALS 、G1311C Quat Pump VL）；Agilent色譜工作站；鹽酸萘替芬對照品（中國藥品生物制品檢驗所，批號：100823-200501），甲醇為色譜純。其他試劑為分析純。鹽酸萘替芬搽劑由河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑室提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：ZORBAX Eclipse XDB C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相：醋酸銨溶液（取醋酸銨1.154 g，加水300 ml溶解，加冰醋酸0.2 ml，搖勻）-甲醇（20∶80），流速：1.0 ml/min，檢測波長：254 nm 柱溫：35 ℃，進(jìn)樣量 10 μl。

2.2 線性關(guān)系

2.2.1 對照品儲備液的制備 精密稱取鹽酸萘替芬對照品102.82 mg，置100 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密吸取對照品儲備液 1、2、3、4、5 ml，分別置 50 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。在2.1色譜條件下測定，以峰面積A與濃度C繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A=19.05 8C+3.465 7，r=0.999 9，本品濃度在20.6～102.8 μg/ml的范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備 取2.2.1項下對照品儲備液取2 ml置25 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備 精密量取本品2 ml（約相當(dāng)于鹽酸萘替芬20 mg），置50 ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。再精密量取2 ml，置10 ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻即得供試品溶液。

2.3.3 陰性對照溶液的制備 取不含鹽酸萘替芬的樣品溶液照2.3.2供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

2.4 精密度試驗 取2.3.2項下對照品溶液10 μl注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣5次，以峰面積考察，結(jié)果平均峰面積 1.570×103，RSD=0.47%（n=5）。

2.5 穩(wěn)定性試驗 取2.3.2項下供試品溶液置棕色容量瓶中，在自然光下，分別于 0、2、6、10、12、24 h測定，記錄主峰面積，考察溶液的穩(wěn)定性，平均峰面積1.534×103RSD=0.62%。結(jié)果表明24 h內(nèi)溶液穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性試驗 取同一批樣品5份，按照2.3.2及2.9項下樣品測定方法操作，分別測定，結(jié)果鹽酸萘替芬含量為 9.97 mg/ml，RSD=0.59%（n=5）。

2.7 加樣回收率試驗 采用加樣回收法，加樣回收率：精密量取已知含量的樣品1 ml（約相當(dāng)于鹽酸萘替芬10 mg），共6份，分別置50 ml量瓶中，分別加入對照品儲備液8、10、12 ml，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。再精密量取2 ml，置10 ml的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。按2.9項下樣品測定方法測定，結(jié)果見表1。

表1 回收率測定結(jié)果（n=3）

2.8 空白干擾試驗 分別取對照品溶液，供試品溶液，陰性對照溶液，在2.1色譜條件下進(jìn)行測試，在樣品譜圖中，與對照品譜圖相應(yīng)的波長（286 nm）有吸收峰，而陰性對照溶液在此波長無吸收干擾。見圖1。

2.9 樣品測定 按2.3.1制備對照品溶液，按2.3.2制備供試品溶液，在2.1色譜條件下測定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算其含量。結(jié)果見表2。

圖1 HPLC鹽酸萘替芬含量測定色譜圖

表2 鹽酸萘替芬搽劑中的鹽酸萘替芬含量測定結(jié)果（n=3）

3 討 論

鹽酸萘替芬對照品在200～400 nm波長內(nèi)掃描，結(jié)果在224、254 nm波長處有兩個強(qiáng)吸收峰。在282、292 nm波長處有兩個弱吸收峰。因224 nm處鹽酸萘替芬的吸收系數(shù)太大，故選擇254 nm作為測定波長。對鹽酸萘替芬主成分峰的純度分析，結(jié)果表明254 nm為鹽酸萘替芬的單一峰。

曾經(jīng)以醋酸銨溶液 （取醋酸銨1.154 g，加水300 ml溶解，加冰醋酸 0.2 ml，搖勻）-甲醇（30∶70）為流動相，實驗中發(fā)現(xiàn)鹽酸萘替芬的保留時間在25 min且峰形較寬，所以改變了流動相的比例，將醋酸銨溶液-甲醇 （30∶70）改為醋酸銨溶液-甲醇（20∶80）鹽酸萘替芬在 13.8 min出峰，峰形對稱。

鹽酸萘替芬含量測定有非水滴定法[1]，紫外分光光度法[2]，高效液相色譜法[3-6]，高效液相色譜法是現(xiàn)代分離測定的重要手段，鑒于其簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確，在醫(yī)藥衛(wèi)生、食品、環(huán)保等各個領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。筆者采用高效液相色譜法測定鹽酸萘替芬搽劑中鹽酸萘替芬的含量，測定準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。適合于醫(yī)院制劑室控制藥品質(zhì)量。

[1]于華生，李炳秀，沈 莉.非水滴定法測定鹽酸萘替芬含量[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報，1999，15(4)：55-56.

[2]黃春明，張 純，李淑琴，等.雙波長分光光度法測定復(fù)方萘替芬霜的含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，1999，16(2)：48-50.

[3]中華人民共和國藥典2010年版（二部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.775.

[4]孫惠芬，馬瑞蓉，于魁一.鹽酸萘替芬溶液劑的含量測定[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2000，20(12)：734-736.

[5]肖大偉，林愛友，趙立新，等.血漿中萘替芬的HPLC測定[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，1997，28(10)：458-459.

[6]馬瑞蓉，孫惠芬，于魁一.鹽酸萘替芬的含量測定[J].藥物分析雜志，2001，21（2）：136-137.