Aβ誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激性凋亡通路的啟動(dòng)及二苯乙烯苷的影響

羅紅波，楊金升，石向群，李蕓，楊期東，張志強(qiáng)，尹榕

(1.蘭州軍區(qū)總醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，甘肅蘭州 730050;2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科，湖南 長沙 410003)

阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一種神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，其主要的病理學(xué)特征之一是腦組織中出現(xiàn)大量老年斑［1］。β-淀粉樣蛋白(β-amyloid peptide，Aβ)是老年斑的主要成分，因此Aβ的神經(jīng)毒性是AD形成和發(fā)展的關(guān)鍵因素，其誘發(fā)的神經(jīng)元變性和凋亡與AD患者認(rèn)知功能、行為學(xué)障礙密切相關(guān)。近來又發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能改變?nèi)鐑?nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子構(gòu)象功能障礙，使蛋白質(zhì)無法與輸送機(jī)制耦聯(lián)，從而引發(fā)疾?。?］;同時(shí)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)Caspase12活化，由于Caspase12是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)中特異性關(guān)鍵蛋白酶［3］，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)Caspase12活化是否參與AD發(fā)病中細(xì)胞凋亡的發(fā)生國內(nèi)外少見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過建立AD動(dòng)物模型，研究在Aβ1-42誘導(dǎo)大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙發(fā)生發(fā)展中海馬神經(jīng)元Caspase12表達(dá)水平的變化及其在介導(dǎo)神經(jīng)元凋亡中的作用。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用健康4月齡Wistar大鼠80只(中南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，雌雄各半，體重250～350 g。

1.1.2 主要試劑和藥物

Caspase12一抗、Aβ 1-42購于Santa Cruz公司;引物自行設(shè)計(jì)，由上海華大基因有限公司合成;Trizol、Taq酶、逆轉(zhuǎn)錄酶購自MBI公司。TSG為從何首烏中提取分離的干粉，含量為68%(湖南中醫(yī)藥研究所提供)，實(shí)驗(yàn)時(shí)用水溶解為100 mg·kg－1的濃縮液。

1.2 方法

1.2.1 大鼠分組、模型建立及干預(yù)

將選擇好的動(dòng)物應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表進(jìn)行分組，分為對(duì)照組、假手術(shù)組、模型組、TSG組各20只。模型組:水合氯醛按2.5 ml·kg－1腹腔麻醉，立體定向儀下固定頭部，參考大鼠圖譜，確定前囟后3.0 mm、中線旁2.5 mm為海馬所在部位，鉆破顱骨，微量注射器進(jìn)針約2.9 mm，左右兩側(cè)各緩慢均勻注入 Aβ 1-42各5 μg，術(shù)后縫合皮膚，正常飼養(yǎng)大鼠，灌胃液為生理鹽水。對(duì)照組:正常飼養(yǎng)大鼠，灌胃液為生理鹽水;假手術(shù)組:注射液為等量生理鹽水，灌胃液為生理鹽水;TSG組:注射液為Aβ 1-42，灌胃液為TSG懸液。各組于制模前及注射后3、21 d 3個(gè)時(shí)間點(diǎn)宰殺取材，每組6只取海馬組織，一側(cè)供提取內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白，另一側(cè)供提取RNA。以上各組動(dòng)物于造模前3 d開始給藥，每天灌胃1次，動(dòng)物灌胃量按5 ml·kg－1計(jì)算。

1.2.2 行為學(xué)檢測

1.2.2.1 Y-電迷宮學(xué)習(xí)記憶實(shí)驗(yàn) 電擊次數(shù)表示其學(xué)習(xí)記憶的獲得能力，記錄每只大鼠學(xué)會(huì)逃避電刺激次數(shù)，以30次為最大值計(jì)數(shù)。行為學(xué)測試分別于制模前3 d、制模后3 d及21 d進(jìn)行。

1.2.2.2 Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn) 每天8:00到11:00之間對(duì)每只大鼠進(jìn)行訓(xùn)練，不選平臺(tái)所在象限作為入水點(diǎn)，按順時(shí)針方向把大鼠面向池壁放入水中，檢測大鼠隱匿平臺(tái)潛伏期。如果在規(guī)定的最長時(shí)間120 s內(nèi)未到達(dá)平臺(tái)，則由實(shí)驗(yàn)者將其引至平臺(tái)，逃避潛伏期記為120 s，大鼠在平臺(tái)休息20 s后進(jìn)行下一次測試。觀察并記錄動(dòng)物找到并爬上平臺(tái)的潛伏期、游泳路程及游泳軌跡。3 d訓(xùn)練結(jié)束后將大鼠按組別進(jìn)行造模，分別于制模前3 d、制模后3 d及21 d進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2.2.3 Morris水迷宮空間探索試驗(yàn) 各組大鼠最后一次定位航行實(shí)驗(yàn)后撤除平臺(tái)，將大鼠從最后1次入水點(diǎn)面向池壁放入水中，使大鼠在水迷宮中連續(xù)游泳，記錄大鼠120 s內(nèi)穿越原平臺(tái)平面的次數(shù)。

1.2.3 海馬部位神經(jīng)元凋亡率測定

采用羅氏公司原位凋亡檢測試劑盒檢測，方法為TUNEL法。用Olympus顯微鏡觀察各組細(xì)胞凋亡變化趨勢，棕黃色細(xì)胞為陽性凋亡細(xì)胞，無顯色為陰性，隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)視野中陽性、陰性細(xì)胞。光鏡下計(jì)算凋亡指數(shù)(apoptosis index，AI)。計(jì)算方法:每只動(dòng)物隨機(jī)兩張切片，每張切片分別在海馬CA1區(qū)觀察大小為1 mm的2個(gè)區(qū)域，分別計(jì)算各區(qū)凋亡細(xì)胞數(shù)和總細(xì)胞數(shù)，AI=凋亡細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100/%。

1.2.4 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測 mRNA表達(dá)

依據(jù)Medline基因文庫自行設(shè)計(jì)引物，目的基因Caspase12(363 bp)，正義鏈:5'-CAATTCTAACTGTC CGAGTCTGAG-3'，反義鏈:5'-CTATCGGTGACGAC TATGTCTACT-3';內(nèi)參照β-actin(100 bp)，正義鏈:5'-CGTTGACATCCGTAAAGACCTCTA-3'，反義鏈:5'-TAAAACGCAGCTCAGTAACAGTCCG-3'。產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，于紫外投射燈下觀察結(jié)果并拍照。

1.2.5 免疫印跡法(Western blotting)測蛋白表達(dá)

密度梯度離心法提取內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白，將海馬組織轉(zhuǎn)移到勻漿器中，加裂解液勻漿，離心(2 400 r·min－1，10 min)，取上清，繼續(xù)離心(12 000 r·min－1，15 min)，取上清，再離心(15 000 r·min－1，30 min)，加入裂解液和蛋白酶抑制劑，用BCA蛋白測定試劑盒測定蛋白質(zhì)濃度。樣品與等體積的上樣緩沖液混勻，煮沸變性，用10%SDS-PAGE分離，轉(zhuǎn)移蛋白至硝酸纖維素膜，5%脫脂奶粉封閉，與一抗孵育，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗孵育，ECL試劑盒進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測，JS-300凝膠圖像儀掃描分析處理。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 Y-電迷宮檢測

制模前各組間大鼠學(xué)會(huì)躲避所需的電刺激次數(shù)比較，F(xiàn)=0.860，P=0.429，說明各組間大鼠學(xué)習(xí)記憶能力差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，有可比性。制模后各組間大鼠學(xué)會(huì)躲避所需的電刺激次數(shù)比較，F(xiàn)=13.866，P=0.000，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明制模成功。經(jīng)TSG干預(yù)，TSG組制模后21 d學(xué)會(huì)躲避所需的電刺激次數(shù)減少，與模型組比較，t=13.126 3，P=0.000 0，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 Y-電迷宮測試比較大鼠學(xué)習(xí)記憶能力±s)Tab 1 Learning capacity of rats by Y-maze±s)

表1 Y-電迷宮測試比較大鼠學(xué)習(xí)記憶能力±s)Tab 1 Learning capacity of rats by Y-maze±s)

與對(duì)照組比較，a P＜0.05;與模型組比較，b P＜0.05

組 別 n 大鼠學(xué)會(huì)躲避所需的電刺激次數(shù)制模前 制模后3 d 制模后21 d對(duì)照組20 17.95±3.66 17.85±3.96 18.13±4.15假手術(shù)組 20 17.15±4.20 17.10±3.82 17.98±1.73模型組 20 16.15±5.07 24.10±4.63 29.53±2.28a TSG組 20 17.10±4.02 23.12±2.01 19.13±2.47ab

2.2 Morris水迷宮檢測

與對(duì)照組相比，模型組和TSG組大鼠造模后3 d及21 d的Morris水迷宮測試游泳潛伏期及路程均增加(P＜0.01)，穿越平臺(tái)次數(shù)下降明顯(P＞0.05)，差別隨時(shí)間的延長而加大，以21 d差別最明顯(P＜0.01);與模型組比較，TSG組3 d及21 d的潛伏期縮短(P＜0.05)，游泳路程縮短(P＜0.05)，穿越平臺(tái)次數(shù)增加(P＜0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。假手術(shù)組與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，排除手術(shù)因素干擾。見表2～4。

表2 水迷宮潛伏期測試比較大鼠空間分辨能力(±s)Tab 2 Space capacity of rats by Morris water maze'latency±s) s

表2 水迷宮潛伏期測試比較大鼠空間分辨能力(±s)Tab 2 Space capacity of rats by Morris water maze'latency±s) s

與對(duì)照組比較，a P＜0.01;與模型組比較，b P＜0.05

組 別 n 造模后不同時(shí)間游泳潛伏期0 d 3 d 21 d對(duì)照組20 17.81±1.09 18.05±1.96 17.03±1.23假手術(shù)組 20 18.10±1.16 17.93±1.32 17.87±1.07模型組 20 17.05±1.03 26.23±3.45a32.15±4.51a TSG組 20 18.03±1.12 22.06±2.52ab25.26±3.76ab

表3 水迷宮路程測試比較大鼠空間記憶能力±s)Tab 3 Space capacity of rats by Morris water maze'swimming distanc(±s) 米

表3 水迷宮路程測試比較大鼠空間記憶能力±s)Tab 3 Space capacity of rats by Morris water maze'swimming distanc(±s) 米

與對(duì)照組比較，a P＜0.01;與模型組比較，b P＜0.05

組 別 n 造模后不同時(shí)間游泳路程0 d 3 d 21 d對(duì)照組20 4.12±1.46 4.06±1.07 3.96±1.05假手術(shù)組 20 3.97±1.01 3.90±1.28 3.98±1.71模型組 20 4.03±0.95 6.21±3.52a 8.30±3.02a TSG組 20 3.86±1.13 5.13±4.02ab 6.08±3.26ab

表4 水迷宮穿越平臺(tái)次數(shù)測試比較大鼠工作記憶能力±s)Tab 4 Work capacity of rats by Morris water maze'crossing the exact former platform±s)

表4 水迷宮穿越平臺(tái)次數(shù)測試比較大鼠工作記憶能力±s)Tab 4 Work capacity of rats by Morris water maze'crossing the exact former platform±s)

與對(duì)照組比較，a P＜0.05;與模型組比較，b P＜0.05

組 別 n 造模后不同時(shí)間穿越平臺(tái)次數(shù)0 d 3 d 21 d對(duì)照組20 6.05±2.13 6.15±2.35 18.13±4.15假手術(shù)組 20 5.95±3.17 6.01±1.91 17.98±1.73模型組 20 6.12±1.09 4.34±1.21a 3.09±1.18a TSG組 20 6.06±2.06 5.14±1.03ab 4.82±1.09ab

2.3 大鼠海馬CA1區(qū)的凋亡率測定

光鏡下觀察，Tunel染色陽性凋亡細(xì)胞胞核呈深棕色，細(xì)胞體積變小，成三角形或扇形，尼氏小體消失，核固縮深染，陰性的細(xì)胞核則不顯示棕色，細(xì)胞形態(tài)正常，較易區(qū)別。對(duì)照組大鼠海馬CA1區(qū)只有零星的凋亡細(xì)胞，而模型組大鼠CA1區(qū)可見大量的凋亡細(xì)胞，TSG組凋亡細(xì)胞較模型組明顯減少(圖1)。對(duì)照組、模型組、TSG組細(xì)胞凋亡率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)(表5)。假手術(shù)組與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，排除手術(shù)因素干擾。

圖1 光鏡下大鼠海馬CA1區(qū)Tunel法陽性凋亡細(xì)胞Fig 1 Positive cells of CA1 region in rats hippocampus by Tunnel under light microscope

表5 大鼠海馬CA1區(qū)凋亡率比較±s)Tab 5 Apoptosis rates of CA1 region in rats hippocampus±s)

表5 大鼠海馬CA1區(qū)凋亡率比較±s)Tab 5 Apoptosis rates of CA1 region in rats hippocampus±s)

與對(duì)照組比較，a P＜0.01，與模型組比較，b P＜0.05

組 別 n CA1區(qū)凋亡率/%對(duì)照組20 2.46±1.12假手術(shù)組 20 2.39±1.08模型組 20 18.42±2.18a TSG組 20 12.97±1.24b

2.4 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡因子 Caspase12的 mRNA及蛋白表達(dá)

模型組的Caspase12 mRNA與其蛋白的表達(dá)趨勢一致，Caspase12在3 d表達(dá)增加，然后逐漸下降，21 d但仍有少量表達(dá);0、3、21 d的Caspase12的蛋白表達(dá)分別為對(duì)照組的99.3%、133.3%和118.6%，各時(shí)間點(diǎn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=54.00，P=0.00)。TSG組Caspase12在3 d的表達(dá)強(qiáng)度明顯較弱，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.717 5，P=0.021 7);假手術(shù)組與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.679 4，P=0.512 3)，排除手術(shù)因素干擾。見表6，圖2、3。

3 討 論

AD作為老年常見疾病之一，以早期出現(xiàn)記憶力下降為主要表現(xiàn)，其中老年斑是AD的主要病理特征之一，而纖維化的Aβ是構(gòu)成老年斑的主要成分［4］。目前發(fā)現(xiàn)Aβ形成過程中的神經(jīng)毒性可引起神經(jīng)元的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)發(fā)生變性，細(xì)胞的凋亡最終導(dǎo)致腦萎縮等腦組織形態(tài)學(xué)改變［5-6］。因此，我們?cè)诖笫竽X內(nèi)雙側(cè)海馬區(qū)注入Aβ 1-42，觀察Aβ 1-42神經(jīng)毒性對(duì)大鼠行為學(xué)及細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能的影響及TSG的干預(yù)作用。

我們對(duì)何首烏的相關(guān)研究表明，何首烏能改善AD模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，對(duì)膽堿能神經(jīng)投射纖維有保護(hù)作用，可提高乙酰膽堿酯酶活性，可通過調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因Bax/Bcl-2通路抑制細(xì)胞凋亡［7-11］。因此，我們對(duì)何首烏的主要有效成分TSG進(jìn)行研究，進(jìn)一步揭示其治療AD的主要作用機(jī)制及藥物靶點(diǎn)。Y電迷宮實(shí)驗(yàn)主要考察大鼠學(xué)習(xí)記憶保持能力，水迷宮實(shí)驗(yàn)中，定位航行實(shí)驗(yàn)主要考察大鼠的空間分辨學(xué)習(xí)能力，空間探索實(shí)驗(yàn)主要測量大鼠的工作記憶能力。通過本實(shí)驗(yàn)可以看出，在Aβ毒性作用下，模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶、空間定向、工作記憶能力明顯下降，表現(xiàn)為Y電迷宮躲避所需的電刺激次數(shù)增加，Morris水迷宮測試中潛伏期延長，游泳路程增加及穿越平臺(tái)次數(shù)減少;從時(shí)間上來看，這種損害隨著Aβ暴露時(shí)間的延長而加重，說明Aβ對(duì)大鼠的學(xué)習(xí)記憶、空間記憶及工作記憶的損害呈逐漸增強(qiáng)的累加效應(yīng)。經(jīng)TSG干預(yù)后，大鼠躲避所需的電刺激次數(shù)減少，潛伏期縮短，游泳路程縮短，穿越平臺(tái)次數(shù)增加，說明TSG可改善模型大鼠學(xué)習(xí)記憶、空間定向、工作學(xué)習(xí)能力，具有腦保護(hù)作用。

表6 及蛋白相對(duì)表達(dá)量(Caspase 12/β-actin) (±s)Tab 6 The mRNA and protein expression of Caspase12±s)

表6 及蛋白相對(duì)表達(dá)量(Caspase 12/β-actin) (±s)Tab 6 The mRNA and protein expression of Caspase12±s)

與對(duì)照組比較，a P ＜0.05，b P ＞0.05，c P＜0.01;與模型組比較，d P ＜0.05

組 別 n mRNA相對(duì)表達(dá)/%蛋白相對(duì)表達(dá)量/%.24±0.02 0.20±0.02假手術(shù)組 20 0.20±0.02 0.21±0.03b 0.19±0.01 0.24±0.02 0.25±0.03b 0.21±0.01模型組 20 0.19±0.01 0.27±0.02c 0.24±0.02 0.23±0.02 0.32±0.02c 0.26±0.02 TSG組 20 0.20±0.02 0.22±0.03d 0.21±0.02 0.23±0.02 0.26±0.03d 0 d 3 d 21 d對(duì)照組 20 0.21±0.01 0.19±0.02 0.20±0.02 0.23±0.01 0 0 d 3 d 21 d 0.23±0.02

圖2 Caspase12的mRNA表達(dá)Fig 2 The mRNA expression of Caspase12

圖3 Caspase12/β-actin的蛋白表達(dá)Fig 3 The protein expression of Caspase12 and β-actin

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是蛋白質(zhì)合成、加工和轉(zhuǎn)運(yùn)的主要場所，在真核細(xì)胞的生長發(fā)育中起著關(guān)鍵作用。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)有大量的“分子伴侶”，輔助和監(jiān)控蛋白質(zhì)的正確折疊并裝配成天然構(gòu)象。在某些刺激因素下，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的功能受到影響，造成大量未折疊或錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)堆積，由此引起一系列“分子伴侶”表達(dá)上調(diào)，以幫助蛋白進(jìn)一步正確折疊、裝配，使受損細(xì)胞在應(yīng)激情況下存活，這個(gè)應(yīng)答過程稱為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激［11］。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)性細(xì)胞凋亡是不同于受體介導(dǎo)或經(jīng)線粒體介導(dǎo)的一種新的細(xì)胞凋亡途徑。Caspase12作為凋亡起始因子發(fā)揮了關(guān)鍵作用［13］。Caspase12酶原位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜側(cè)，活化后可獨(dú)立地誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性的細(xì)胞凋亡［14］。

既往報(bào)道認(rèn)為在AD發(fā)病機(jī)制中，Aβ可破壞細(xì)胞膜，形成大量自由基，啟動(dòng)死亡受體及線粒體途徑導(dǎo)致神經(jīng)元的凋亡［15-17］。本研究發(fā)現(xiàn)模型鼠海馬組織有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異的Caspase12基因和蛋白高表達(dá)，說明Aβ還可以引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激活化Caspase12，啟動(dòng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡信號(hào)通路，導(dǎo)致神經(jīng)元死亡，發(fā)生學(xué)習(xí)記憶障礙。當(dāng)Aβ給藥3 d后，Caspase12的表達(dá)升高，推測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)為保護(hù)受損細(xì)胞而首先選擇程序性細(xì)胞死亡，啟動(dòng)了特異性的Caspase12凋亡通路;Caspase12在21 d表達(dá)下降可能與以下因素有關(guān):內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激后ATF6信號(hào)傳導(dǎo)通路激活，GRP78表達(dá)增多，減少錯(cuò)誤折疊的蛋白使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的程度下降［18］，同時(shí)，GRP78可與 Caspase7形成復(fù)合物，阻止Caspase12激活并阻止其從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放［19］;隨著時(shí)間的延長，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激程度逐漸下降，至21 d后消失，相應(yīng)的凋亡途徑也被抑制，但已經(jīng)造成的組織損害仍持續(xù)存在(如老年斑)，可能對(duì)誘發(fā)神經(jīng)元凋亡起一定的作用［20］。假手術(shù)組各時(shí)間段與對(duì)照組比較無顯著性差異，表明手術(shù)作為一過性短暫的干擾因素，對(duì)本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果不產(chǎn)生影響。

因此，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及相關(guān)的凋亡通路可能參與Aβ神經(jīng)毒性對(duì)腦的神經(jīng)元損傷。在AD的發(fā)病中，當(dāng)Aβ被細(xì)胞分泌至細(xì)胞外形成纖維化的過程中，所表現(xiàn)的神經(jīng)毒性開始起作用，細(xì)胞外的Aβ可破壞細(xì)胞膜誘發(fā)氧化應(yīng)激，氧化應(yīng)激又會(huì)破壞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，應(yīng)激過度導(dǎo)致通過特異性的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Caspase12凋亡途徑發(fā)生死亡;同時(shí)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的應(yīng)激也使細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的Aβ在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中錯(cuò)誤折疊的幾率增加，既導(dǎo)致了Aβ的異常剪切和積聚，又加劇了氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能障礙。在上述諸因素的相互作用下，形成一種惡性循環(huán)，使損害效應(yīng)不斷擴(kuò)大，最終導(dǎo)致神經(jīng)元凋亡，出現(xiàn)AD的病理學(xué)改變及進(jìn)行性加重的行為學(xué)障礙。

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