復(fù)方氨溴索氯雷他定膠囊溶出度測(cè)定方法的研究*

毛秀梅，韓 蕊，楊金榮3,

(1.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300192； 2.天津市人民醫(yī)院，天津 300121； 3．天津醫(yī)科大學(xué),天津 300070)

復(fù)方氨溴索氯雷他定膠囊用于呼吸道感染引起的咳嗽，同時(shí)具有稀釋痰液、降低痰液黏稠性作用，可降低氣道阻力，保持呼吸順暢。復(fù)方氨溴索氯雷他定膠囊由鹽酸氨溴索和氯雷他定組成，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法對(duì)該制劑中鹽酸氨溴索和氯雷他定的溶出度進(jìn)行測(cè)定，方法準(zhǔn)確可靠。

1 儀器與試藥

1.1儀器 高效液相色譜儀(SPD-10A PLUS，日本島津)；色譜柱(Kromasil C18，150 mm×4.6 mm，5 μm，天津市色譜科學(xué)技術(shù)公司)；智能溶出試驗(yàn)儀(ZRS-8，天津大學(xué)無線電廠)。

1.2試藥 復(fù)方氨溴索氯雷他定膠囊(自制，每粒膠囊含鹽酸氨溴索30 mg和氯雷他定5 mg)；鹽酸氨溴索對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)100599-200502)、氯雷他定對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)100615-200401)；乙腈色譜純(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院天津協(xié)和公司)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1溶出量測(cè)定方法的建立

2.1.1溶液的配制

2.1.1.1對(duì)照品溶液 精密稱取約鹽酸氨溴索對(duì)照品15 mg，置50 ml量瓶中，加鹽酸溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，得溶液濃度為300 mg/L的鹽酸氨溴索對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密量取上述溶液5 ml，置50 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為30 mg/L的鹽酸氨溴索對(duì)照品溶液。

精密稱取氯雷他定對(duì)照品10 mg，置200 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，得溶液濃度為50 mg/L的氯雷他定對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密量取上述儲(chǔ)備液5 ml，置50 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為5 mg/L的氯雷他定對(duì)照品溶液。

精密量取氯雷他定對(duì)照品儲(chǔ)備液和鹽酸氨溴索對(duì)照品儲(chǔ)備液各1 ml，置10 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成混合對(duì)照品溶液。

2.1.1.2供試品溶液 取30 min時(shí)的溶出液，微孔濾膜過濾，續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.1.1.3陰性對(duì)照 精密稱取按處方配比的輔料(包括空膠囊)，置100 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液適量，超聲10 min使充分溶解，冷卻至室溫以流動(dòng)相定容，搖勻，濾過。取續(xù)濾液5 ml，置50 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為陰性對(duì)照溶液。

2.1.2色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)[1-3]色譜柱為Kromasil C18(50 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鉀6.3 g，加0.1 mol/L 氫氧化鈉溶液 600 ml溶解，加水至1 000 ml)-乙腈(50∶50)，pH為7.3；波長247 nm，靈敏度為0.01，流速1 ml/min，進(jìn)樣量20 μl。

在上述色譜條件下分別取陰性對(duì)照溶液、混合對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，見圖1，輔料對(duì)測(cè)定無干擾，主成分與雜質(zhì)應(yīng)能完全分離，分離度大于2.0。在考察了流動(dòng)相比例變化(±5%)、流動(dòng)相pH值變化(±0.2)、流速相對(duì)值變化(±20%)時(shí)等色譜條件變化，主峰的拖尾因子不大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰皆達(dá)到基線分離，見圖1。

2.1.3線性與范圍 分別精密稱取1、2、3、4、5和6 ml的鹽酸氨溴索和氯雷他定的儲(chǔ)備液，依次各置50 ml的量瓶中混合，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，配制成相當(dāng)于對(duì)照品混合溶液濃度20%、40%、60%、80%、100%和120%的系列對(duì)照品溶液。依“2.1.2”項(xiàng)下方法分別進(jìn)行測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行線性回歸分析。鹽酸氨溴索回歸方程：Y=1.4×106X-2.298×104(r=0.999 7)，表明鹽酸氨溴索在6～36 mg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系均良好。氯雷他定回歸方程：Y=2.2×106X-9 278.9(r=0.999 9)，表明氯雷他定在1～6 mg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系均良好。

2.1.4精密度 取“2.1.1”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果鹽酸氨溴索RSD為0.32%，氯雷他定RSD為1.60%。

2.1.5回收率 精密量取氯雷他定和鹽酸氨溴索的儲(chǔ)備液3、4和5 ml各3份，置50 ml量瓶中，加入精密量取的5 ml全輔料溶液混合，再加0.1 mol/L鹽酸溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別測(cè)定其含量，將實(shí)測(cè)值與理論值比較，計(jì)算回收率。結(jié)果鹽酸氨溴索平均回收率為100.34%，RSD為0.39%；氯雷他定平均回收率為100.53%，RSD為1.51%。表明該方法用于復(fù)方氨溴氯雷片中鹽酸氨溴索和氯雷他定的定量，準(zhǔn)確可靠，見表1。

表1 鹽酸氨溴索和氯雷他定回收率測(cè)定結(jié)果

2.1.6溶液的穩(wěn)定性 將混合對(duì)照品溶液配制后依次放置0、1、2、4、6、8、10和24 h取樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果鹽酸氨溴索RSD為0.59%，氯雷他定RSD為1.62%，表明供試品溶液在常溫下放置24 h比較穩(wěn)定。

2.2溶出度方法的建立[4，5]

2.2.1溶出介質(zhì)的選擇 分別以水、0.1 mol/L鹽酸、磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)作為溶出介質(zhì)，取膠囊置沉降籃中，采用槳法，轉(zhuǎn)速為50 r/min，介質(zhì)體積為900 ml，進(jìn)行測(cè)定。分別在5、10、15、20、30和45 min取樣，取樣量為10 ml，濾過，取續(xù)濾液作為供試液。以氯雷他定濃度為5 μg/ml和鹽酸氨溴索濃度為30 μg/ml的混合作為對(duì)照品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算累積溶出百分率(Q)。結(jié)果鹽酸氨溴索在三種溶劑中溶出速度均較快，而氯雷他定在水中溶出不完全，其余兩種介質(zhì)中均能完全溶出，見圖2和圖3。

圖2 鹽酸氨溴索在不同介質(zhì)中的溶出曲線

圖3 氯雷他定在不同介質(zhì)中的溶出曲線

2.2.2籃法和槳法的比較 以0.1 mol/L鹽酸為溶出介質(zhì)，分別采用籃法(轉(zhuǎn)速為100 r/min)和槳法(轉(zhuǎn)速為50 r/min)進(jìn)行試驗(yàn)。其溶出曲線基本相似，但籃法溶出量的RSD較大，均一性不好，故選擇槳法，見表2和表3。

表2 不同溶出方法和轉(zhuǎn)速氯雷他定累積溶出百分率

表3 不同溶出方法和轉(zhuǎn)速

2.2.3均一性試驗(yàn) 取膠囊6粒，置沉降籃中，以0.1 mol/L鹽酸為溶出介質(zhì)，照“2.2.1”項(xiàng)下的方法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明溶出均一性良好， RSD均<5%，見表4。

表4 同一批樣品累積溶出百分率均一性試驗(yàn)結(jié)果

3 樣品溶出度測(cè)定結(jié)果

取本品6粒，置沉降籃中，采用槳法，以0.1 mol/L的鹽酸溶液900 ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r/min，在20 min取樣，取樣量為10 ml，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣測(cè)定峰面積。計(jì)算樣品的溶出度。結(jié)果三批樣品中氨溴索和氯雷他定的溶出度均>80%，符合規(guī)定，且RSD均<5%，見表5。

4 討論

4.1測(cè)定波長的選擇 紫外掃描圖顯示，全輔料在197 nm處有最大吸收峰；鹽酸氨溴索在200～400 nm有3個(gè)吸收峰，209 nm處吸光度最高，但與輔料的最大吸收波長相近，對(duì)含量測(cè)定有影響，308 nm處吸收峰較平坦，吸光度小，靈敏度低，亦不適合含量測(cè)定；氯雷他定的最大吸收波長處輔料也有吸收。氨溴索和氯雷他定分別在246.5 nm和247 nm有吸收峰，且無輔料的干擾，故選擇247 nm作為檢測(cè)波長。

4.2溶出方法的選擇 通過溶出介質(zhì)的選擇，由于氯雷他定在0.1 mil/L鹽酸中溶出速度適中，可控性較好，且溶出完全，因此確定以0.1 mil/L鹽酸為溶出介質(zhì)；由于籃法測(cè)定時(shí)膠囊殼容易黏附在轉(zhuǎn)籃的網(wǎng)壁上而使溶出的結(jié)果差異性較大，故選擇槳法測(cè)定。由于槳法的常用轉(zhuǎn)速為50 r/min，本實(shí)驗(yàn)的溶出曲線顯示溶出速度適中，故未增加轉(zhuǎn)速的試驗(yàn)。

1 湯南，張丹，孫文霞，等．HPLC測(cè)定鹽酸氨溴索口腔崩解片的含量及有關(guān)物質(zhì).華西藥學(xué)雜志，2005，20(6)：538

2 趙亞萍．HPLC法檢查氯雷他定及其制劑的有關(guān)物質(zhì)．中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2003，4(3):56

3 柏學(xué)東，崔志紅，王兆欽．高效液相色譜法測(cè)定氯雷他定顆粒劑的含量.中國藥業(yè)， 2008，17(9)：27

4 崔飆，楊新建，王雷，等．不同廠家氯雷他定片的溶出度考查．天津藥學(xué)，2007，19(5):24

5 王亞敏．淺談溶出度檢查方法的研究．藥物分析雜志， 2007，27(10)：1667