大鼠原位腸－肝灌流模型研究小補心湯總黃酮體內(nèi)效應(yīng)物質(zhì)

王素軍，阮金秀，張振清，張有志，于能江，王桂香，莫李立

(1.廣東藥學(xué)院藥科學(xué)院藥理系，廣東廣州 510006;2.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所，北京 100850)

抗抑郁作用經(jīng)典古方小補心湯由代赭石、旋復(fù)花、竹葉和淡豆豉4味中藥組成，含有大量的黃酮類化合物。張有志等［1－2］研究結(jié)果表明，小補心湯乙醇提取物總黃酮(BX-2)具有良好的抗抑郁活性，且BX-2抗抑郁作用的效價強度比小補心湯明顯提高，由于BX-2所含成分多，含量低，目前動物體內(nèi)物質(zhì)基礎(chǔ)研究無法開展，為了研究其體內(nèi)效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)，本實驗嘗試用大鼠原位腸肝循環(huán)灌流模型對BX-2的體內(nèi)效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)進行初步研究。

1 材料與方法

1.1儀器和試劑Agilent 1100 LC/MS，小補心湯總黃酮和13個黃酮單體(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院植化室于能江博士提供，HPLC含量＞98%)，甲醇、乙腈(Fisher公司，色譜純)。

1.2大鼠原位腸-肝血管灌流模型和給藥方案參照我們過去建立的模型條件稍加改進［3］，灌流液中含5%牛血清白蛋白?！嵝許PF級SD大鼠5只，體質(zhì)量(200±20)g。BX-2以5%二甲亞砜配制成0.2 g·ml－1，每只大鼠十二指腸給藥1 ml，即 0.2 g BX-2/只大鼠。

1.3樣品采集與處理與文獻報道的方法相同［3］。

1.4分析測定條件Agilent 1100 LC/MS，Intersil C8-3色譜柱(250 mm ×2.1 mm，5 μm)，流動相為5 mmol·L－1甲酸銨水溶液(A)－乙腈(B)，梯度洗脫，乙腈(B)梯度:0～10 min，20% ～25%;10～15 min，25% ～40%;15～20 min，40% ～55%;20～25 min，55% ～20%;25～40 min，20% ～20%。流速 0.2 ml·min－1，質(zhì)譜檢測條件與文獻報道相同［3］。

1.5數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)用±s表示，吸收程度=化合物進入灌流液中量/化合物腸道給量×100%。

2 結(jié)果

2.1色譜及質(zhì)譜條件采用選擇性離子檢測(SIM)，檢測離子為負(fù)離子，方法的專屬性強，靈敏度高，灌流液中雜質(zhì)不干擾樣品的測定，檢測離子和色譜保留時間見Tab 1。

Tab 1 SIM，retention time，contents and absorption extent of 13 flavonoids in BX-2(n=5)

2.213個黃酮類化合物在BX-2中的含量及灌流2 h后于大鼠腸道的吸收程度BX-2大鼠十二指腸給藥后2 h，13個黃酮類化合物在灌流液中檢測到8個化合物，他們的含量、吸收量和吸收程度，見Tab 1。

3 討論

許多試驗研究表明［4－5］，一些天然的黃酮類化合物具有明顯的抗抑郁作用。BX-2給藥后，4號化合物吸收程度最高(44.8%)，11號化合物為4號化合物的吡喃葡萄糖苷，在灌流液中未被發(fā)現(xiàn)，其可能轉(zhuǎn)化為4號化合物而吸收;10號化合物在黃酮苷類化合物中吸收較好(11.1%)，與文獻報道相似［6］，其在腸道較穩(wěn)定，更容易以苷的形式吸收?？傊嗔饕褐邪l(fā)現(xiàn)的8 個黃酮類化合物(1、2、3、4、5、6、8、10 號)的藥理活性值得深入研究。另外，本文BX-2采用十二指腸給藥，未考慮胃液影響，各個化合物的真實吸收程度尚需要結(jié)合體內(nèi)試驗進一步驗證。通過本實驗的初步研究認(rèn)為大鼠原位腸-肝灌流模型是研究中藥尤其是中藥復(fù)方吸收的一個較為理想的工具。

［1］張有志，于能江，袁 莉，等.小補心湯總黃酮對強迫游泳和獲得性無助模型動物的抗抑郁作用［J］.中國藥理學(xué)與毒理學(xué)，2008，22(1):1 －8.

［1］Zhang Y Z，Yu N J，Yuan L，et al.Antidepressant effect of total flavonoids extracted from Xiaobuxin-Tang in forced swimm ing tests and learned helplessness in rats and mice［J］.Chin J Pharmacol Toxicol，2008，22(1):1 －8.

［2］安 磊，張有志，于能江，等.小補心湯總黃酮提取物對慢性應(yīng)激模型大鼠的抗抑郁作用［J］.中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2008，22(2):102 －7.

［2］An L，Zhang Y Z，Yu N J，et al.Antidepressant effect of total flavonoids extracted from Xiaobuxin-Tang on chronically mildly stressed model rats［J］.Chin J Pharmacol Toxicol，2008，22(2):102－7.

［3］王素軍，張志偉，趙艷紅，等.建立大鼠原位腸－肝灌流模型評價綠原酸的代謝［J］.中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2006，11(12):1340－4.

［3］Wang S J，Zhang Z W，Zhao Y H，et al.Establishment of in situ perfused rat intestine-liver model for evaluation on chlorogenic acid metabolism［J］.Chin J Clin Pharmacol Ther，2006，11(12):1340－4.

［4］蘭嘉琦，張陸軍，邢東明，等.黃芩總黃酮對大鼠腦核團單胺類遞質(zhì)的影響［J］.中國藥理學(xué)通報，2007，23(7):855－9.

［4］Lan J Q Zhang L J，Xing D M，et al.Effects of total flavonoids from scutellariae radix on monoamine neurotransmitters in different cerebral nuclei［J］.Chin Pharmacol Bull，2007，23(7):855 － 9.

［5］張黎明，李云峰，劉艷芹，等.槲皮素-3-O-芹菜糖基蘆丁糖苷對新生大鼠海馬神經(jīng)前體細(xì)胞增殖的影響［J］.中國藥理學(xué)通報，2006，22(2):168－71.

［5］Zhang L M，Li Y F，Liu Y Q，et al.Effect of［quercetin 3-O-apiosy1(1→2)］-rhamnosy1(1→6)-glucoside on the proliferation of neural progenitor cells from neonatal rat hippocampus［J］.Chin Pharmacol Bull，2006，22(2):168 －71.

［6］King R A.Daidzein conjugates are more bioavailable than genistein conjugates in rats［J］.Am J Clin Nutr，1998，68(6 Suppl):1496S－9.