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    ELISA一步法和二步法檢測乙肝HBsAg的結(jié)果比較

    2011-06-07 02:21:36楊劍
    關(guān)鍵詞:表面抗原步法乙肝

    楊劍

    (江西省萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,江西萍鄉(xiāng) 337000)

    依據(jù) 《中華人民共和國藥典》2010年版三部規(guī)定反應(yīng)時(shí)間的設(shè)置:檢測過程中加入檢測樣本后反應(yīng)時(shí)間應(yīng)不低于60min,加入酶結(jié)合物后反應(yīng)時(shí)間應(yīng)不低于30min,加入顯色液后顯色時(shí)間應(yīng)不低于30min[1]。江西省萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)由一步法換為二步法,均由上??迫A生物工程股份有限公司生產(chǎn)。筆者在使用過程中發(fā)現(xiàn)一步法試劑盒假陽性率明顯高于二步法試劑盒,而且一步法試劑盒在檢測某些高滴度標(biāo)本時(shí)存在嚴(yán)重的鉤狀效應(yīng),造成假陰性;二步法試劑盒在檢測某些低濃度標(biāo)本時(shí)存在檢測OD值較低的現(xiàn)象,很容易造成漏檢現(xiàn)象的發(fā)生。

    1 材料與方法

    1.1 樣本 2724份血清標(biāo)本均來自江西省萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院2011年6月份及7月份上旬的肝病門診和住院患者,年齡在20~60歲之間,其中有1315份攜帶乙肝病毒 (因主要是肝病患者,故陽性率偏高),1409份未攜帶乙肝病毒。患者攜帶乙肝病毒是指一步法與二步法HBsAg同為陽性或一者為陽性時(shí)經(jīng)PCR定量檢測出HBV病毒量確認(rèn)的。

    1.2 試劑和儀器 1)乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法),購自上??迫A生物工程股份有限公司;2)伯樂680酶標(biāo)儀,購自美國伯樂公司;3)安圖fluido2010洗板機(jī),購自奧地利安托斯公司。

    1.3 方法 兩種方法均嚴(yán)格按照對(duì)應(yīng)試劑盒內(nèi)使用說明書操作,每批試驗(yàn)均做室內(nèi)質(zhì)控。同時(shí)采用上??迫A試劑檢測 HBsAb,HBeAg,HBeAb,HBcAb。

    2 結(jié)果

    對(duì)2724份血清標(biāo)本檢測后的結(jié)果進(jìn)行處理后,發(fā)現(xiàn)其中有3例一步法HBsAg檢測為陰性,但HBeAg,HBcAb為陽性,經(jīng)標(biāo)本稀釋后重測,結(jié)果HBsAg陽性;而二步法檢測出HBsAg為陽性。同時(shí),兩種方法對(duì)乙肝HBsAg陽性標(biāo)本1319例檢測出的OD值比較發(fā)現(xiàn):一步法OD值(OD1)大于二步法OD值(OD2)有1047例,而OD1<OD2僅272例。并且二步法檢測的HBsAg陽性O(shè)D值有574例低于HBeAgOD值。另外一步法和二步法兩者假陽性率采用χ2檢驗(yàn),比較有顯著性差異(P<0.01),結(jié)果見表1。

    表1 兩種方法對(duì)2724份血清標(biāo)本HBsAg的檢測情況

    3 討論

    一步法操作簡單省時(shí),能夠滿足臨床快速、簡便的要求。與二步法的主要區(qū)別在于一步法測定體系中同時(shí)加入待測標(biāo)本(含抗原)和酶標(biāo)抗體進(jìn)行競爭反應(yīng),當(dāng)待測標(biāo)本抗原濃度很高時(shí),會(huì)形成競爭抑制作用,導(dǎo)致顯色反應(yīng)降低甚至不顯色,出現(xiàn)假陰性,這種現(xiàn)象又被稱為鉤狀效應(yīng)(hook effect)。鉤狀效應(yīng)是ELISA一步法檢測抗原(抗體)存在的普遍現(xiàn)象,曾有實(shí)例報(bào)道[2]。另有報(bào)道[3],ELISA法檢查HBsAg二步法操作可以避免檢測試劑對(duì)待測成分的稀釋,以及檢測試劑中的酶標(biāo)抗-HBs抗體相對(duì)過剩產(chǎn)生的HOOK效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)中有3例一步法HBsAg檢測為陰性,但HBeAg,HBcAb為陽性,經(jīng)標(biāo)本稀釋后重測得出HBsAg陽性;而二步法檢測出的HBsAg為陽性,筆者認(rèn)為是因鉤狀效應(yīng)而發(fā)生的。

    從本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,一步法OD值(OD1)大于二步法OD值(OD2)有1047例,而OD1<OD2僅272例,說明二步法檢測的OD值較一步法偏低。筆者認(rèn)為可能二步法由于其特異性稍差[4]造成的。近年來,抗病毒藥物在臨床廣泛應(yīng)用,乙肝表面抗原弱陽性結(jié)果的比率也在隨之增高。因此二步法雖然可以避免鉤狀效應(yīng)的發(fā)生,但由于對(duì)于低濃度標(biāo)本因OD值較低的現(xiàn)象,假陰性率稍高,容易造成漏檢現(xiàn)象的發(fā)生,因而也存在一定的缺點(diǎn)。筆者在有關(guān)文獻(xiàn)[5]中看到:溶血標(biāo)本對(duì)ELISA一步法干擾明顯高于二步法,由于實(shí)驗(yàn)條件的限制,本研究有待以后完善??偟恼f來,二步法雖然操作上增加了一步,檢測時(shí)間稍長,也存在漏檢現(xiàn)象的可能,但綜合效果優(yōu)于一步法,更適合于HBsAg的檢測。

    乙肝表面抗原假陰性結(jié)果造成臨床誤判,延誤患者病情;乙肝表面抗原假陽性結(jié)果對(duì)被檢者造成巨大的心理壓力,造成治療藥物的濫用及浪費(fèi),并且可能對(duì)被檢者造成身體傷害。因此,對(duì)乙肝表面抗原進(jìn)行確認(rèn)是必需的[6]。但由于一步法與二步法各有優(yōu)缺點(diǎn),筆者認(rèn)為必要時(shí),也需要將一步法與二步法結(jié)合考慮使用,甚至采用更先進(jìn)的方法,比如化學(xué)發(fā)光法和實(shí)時(shí)熒光PCR定量檢測。

    [1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典((三部).[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:355.

    [2]陳仁杰,胡海燕,嚴(yán)銀燕.ELISA一步法檢測梅毒抗體鉤狀效應(yīng)三例[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2008,26(2):215-216.

    [3]雷 震,謝 楠,敖琴芳,等.加酶時(shí)間對(duì)ELISA定性測定HBsAg的影響[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2007,22(5):20-22.

    [4]王火生,李麗雄,林 萍,等.一步法ELISA在HIV初篩中的應(yīng)用探討[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2006,10(5):501-503.

    [5]薛俊太,鄧翠華,王 惟,等.溶血標(biāo)本在ELISA一步法和二步法中隊(duì)HBVM測定結(jié)果的影響[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2009,6(14):1126-1127.

    [6]雷 震,謝 南.抗-HBs抗體陽性血清中和確認(rèn)HBsAg方法的建立[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2008,26(6):677-678.

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