紅花酢漿草試管根莖誘導(dǎo)和快速繁殖研究

李春芳，羅吉鳳，程治英，楊俊波

（中國科學(xué)院昆明植物研究所，西南野生生物種質(zhì)資源庫，云南 昆明 650204）

紅花酢漿草（Oxalix rubra St.Hill）為酢漿草科（Oxalidaceae）無莖直立的多年生草本植物，地下塊狀根莖呈紡錘形。葉片叢生狀具長柄，掌狀復(fù)葉小葉3枚倒心臟形，昆明地區(qū)元旦前后開花，花大，每株有花8～12朵，深桃紅色。植株整齊，葉色青翠，覆蓋地面迅速，能抑制雜草生長，是一種良好的觀花地被植物。花期長，花色艷麗，可作花壇、盆栽或裝飾巖石隙縫等。該物種從美國引進(jìn)昆明只開花不結(jié)種子，主要繁殖方式為分株，即分植根莖，繁殖速度慢，不能滿足市場需求，而且長期用根莖進(jìn)行無性繁殖，生長在土中的根莖病毒逐年積累致使植株開出的花變小變少，品質(zhì)下降。因此我們采用組織培養(yǎng)方法，對其繁殖技術(shù)進(jìn)行探討，以求短期內(nèi)大批量生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)種苗，滿足市場需求。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試材料為地下紡錘形根莖，來源于昆明，經(jīng)常規(guī)無菌消毒后得到無菌材料供試驗用。

1.2 培養(yǎng)條件

基本培養(yǎng)基為MS，誘導(dǎo)根莖發(fā)芽的培養(yǎng)基：①MS+BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L，②MS+BA 1 mg/L+NAA 0.5 mg/L，③MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L；誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基：④1/2 MS+NAA 1 mg/L；誘導(dǎo)珠芽培養(yǎng)基：⑤MS+PP3331.5 mg/L；⑥MS+PP3332 mg/L，⑦M(jìn)S+PP3335 mg/L；誘導(dǎo)試管根莖的培養(yǎng)基：⑧MS+NAA 0.05 mg/L+AC 0.5 g/L+蔗糖8%，⑨MS+NAA 0.1 mg/L+蔗糖8%，⑩MS+NAA 0.2 mg/L+AC 0.5 g/L+蔗糖8%，?MS+NAA 0.5 mg/L+AC 0.5 g/L+蔗糖8%。培養(yǎng)基①～⑦均附加0.56%瓊脂固化，蔗糖濃度為3%。以上培養(yǎng)基pH值5.5～5.8，培養(yǎng)溫度（25±3）℃，光照強(qiáng)度為40 μmol/m2/s，光照時間為12 h/d。

2 結(jié)果與分析

2.1 微型扦插和叢生芽繁殖

將無菌塊莖接種在培養(yǎng)基①上，根莖培養(yǎng)約70 d長芽，平均6芽/塊，將生長出的芽割下，繼代在培養(yǎng)基①上的小芽經(jīng)過60 d培養(yǎng)，叢生芽增殖率為1∶10左右（見圖1）。這種叢生芽可反復(fù)切割繼代，用于叢生芽的增殖，也可切割成單個芽條在培養(yǎng)基④上培養(yǎng)，約20 d在長高的同時也長出帶根的可移栽的完整試管苗。當(dāng)小芽接種在培養(yǎng)基②上，經(jīng)過60 d培養(yǎng)，叢生芽增殖率約為1∶6。將從根莖上切割的小芽培養(yǎng)在培養(yǎng)基③上，經(jīng)過約3個月培養(yǎng)可一次成苗且生根，但無新芽產(chǎn)生，這種完整試管苗不僅可用于出瓶移栽，還可以將植株莖切為2個節(jié)1段，用于微型扦插，達(dá)到增殖目的。

圖1 珠芽誘導(dǎo)

2.2 珠芽繁殖

將切割的芽條接種在培養(yǎng)基⑤～⑦上培養(yǎng)，每種培養(yǎng)基作為1個處理，40個芽條/處理，重復(fù)3次。培養(yǎng)30 d后，培養(yǎng)基⑤上培養(yǎng)的材料100%長出珠芽，培養(yǎng)基⑥、⑦上培養(yǎng)的芽條長出的根有黑化現(xiàn)象，說明PPP333濃度太高對根有傷害。此外，在這2種培養(yǎng)基上培養(yǎng)的芽條培養(yǎng)30 d后，僅形成75%的珠芽。說明培養(yǎng)基⑤作為誘導(dǎo)珠芽的培養(yǎng)基較合適。在莖的葉腋處誘導(dǎo)出的珠芽呈白色，長×寬=0.5 cm×0.3 cm，隨著培養(yǎng)時間的延長變?yōu)榫G色。珠芽產(chǎn)生的部位在莖的葉腋處，在莖的基部也能形成叢生芽（見圖2）。珠芽形成后無生長跡象，取下珠芽放在培養(yǎng)基①～③上培養(yǎng)5 d后均能形成芽，恢復(fù)生長，長大成苗。筆者誘導(dǎo)出的珠芽是由芽條的腋芽肥大而形成的珠狀結(jié)構(gòu)。由珠芽發(fā)育的植株健壯，移栽成活率也高。

圖2 叢生芽

2.3 試管根莖的誘導(dǎo)

將高約4 cm的芽條接種在培養(yǎng)基⑧～?上，每瓶10個芽條，重復(fù)6次，培養(yǎng)90 d后統(tǒng)計芽條產(chǎn)生根莖數(shù)。結(jié)果顯示，培養(yǎng)基⑧～?上的芽條均產(chǎn)生了根莖，但培養(yǎng)基?最佳，表現(xiàn)為每個培養(yǎng)瓶平均結(jié)根莖數(shù)為28個，并且根莖較大（長在0.6 cm以上，寬在0.5 cm以上）（見圖3）。根莖產(chǎn)生的方式為每個芽條先生根然后根尖部分膨大，形成紡錘形的根莖（見圖4）。

圖3 試管根莖誘導(dǎo)

圖4 根莖的發(fā)生過程

圖5 移栽苗

圖6 試管苗規(guī)?；a(chǎn)

2.4 苗的生根和移植

將以上各種繁殖方法形成的試管芽條（除微型扦插一次成苗和試管根莖可直接種入土中外）切割成2～3 cm接種在培養(yǎng)基④上，培養(yǎng)20 d后開始生根，約30 d根誘導(dǎo)率在95%以上，平均每株長根3條左右，當(dāng)苗高6～7 cm時便可移栽，移栽基質(zhì)用腐葉土∶生黃土=1∶1，經(jīng)過5%甲醛水溶液消毒密封24 h后打開2～3 d便可移苗。試管苗從培養(yǎng)瓶中取出時不要傷及植株的葉片和根尖，移后注意保濕和通風(fēng)，待新葉長出后去掉保濕用塑料布，可以按常規(guī)管理，移栽成活率在90%以上（見圖5、圖6）。

3 討論

3.1 各種繁殖技術(shù)比較

本試驗得到組培快繁的紅花酢漿草試管苗近2萬株，并在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。利用短枝微型扦插培養(yǎng)90 d可一次成苗，方法簡便。若用此法快繁，60 d增殖速率為1∶8。利用叢生芽增殖，增殖速度快（約1∶10），繁殖量大，1個繁殖周期僅要80 d，可以作為規(guī)?；a(chǎn)的主要方式。珠芽繁殖和試管根莖誘導(dǎo)的技術(shù)也可以利用，此法為筆者的創(chuàng)新技術(shù)。優(yōu)點是移植成活率高，缺點是手續(xù)復(fù)雜、成本加大。

3.2 母瓶保存

筆者選擇紅花酢漿草的叢生芽和試管苗作為離體保存的培養(yǎng)物類型，于8月放入溫度為12℃、相對濕度為60%的條件下保存母瓶，為防止母瓶培養(yǎng)基干燥，在瓶蓋口用保鮮膜密封，保存10個月后培養(yǎng)物良好。次年5～6月取出母瓶用于快繁生產(chǎn)，6～7月供應(yīng)瓶苗移栽苗，當(dāng)年可以開花。本試驗為紅花酢漿草持續(xù)利用提供了技術(shù)支撐。關(guān)于紅花酢漿草的離體珠芽和試管根莖的誘導(dǎo)等繁殖技術(shù)和規(guī)?；a(chǎn)未見報道。

[1]李霖，宋宜穎，魯潤龍，等.紫葉酢漿草的組織培養(yǎng)[J].植物生理學(xué)通訊，2002，38（4）：360.

[2]王金剛，吳多，付慧娟，等.大花酢漿草的組織培養(yǎng)與快繁[J].植物學(xué)報，2010，45（2）：233～235.

[3]王連潤，楊松光，胡忠榮，等.草莓試管苗移栽基質(zhì)研究[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2010，23 （4）：1374～1376.

[4]孟靜靜，李慧，宋旭麗，等.紅莓組織培養(yǎng)及快速繁殖技術(shù)[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2010，23 （6）：2155～2157.

[5]陳麗靜，馬爽，李麗麗，等.東方百合“索蚌”離體培養(yǎng)快繁體系建立[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2010，23（5）：1652～1654.