不同加工方法對(duì)厚樸主要化學(xué)成分的影響研究

胡慧玲， 衛(wèi)瑩芳， 馬雪瑋， 潘 拉， 閆 婕， 盧君蓉

(成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川成都 611137)

厚樸為木蘭科植物厚樸Magnolia officinalisRehd.et Wils.或凹葉厚樸Magnolia officinalisRehd.et Wils.var.bilobaRehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮。具有燥濕消痰、下氣除滿的功能，主要用于濕滯傷中，脘痞吐瀉，食積氣滯，腹脹便秘，痰飲喘咳，是治療胃腸道疾病的良藥，又是多種中成藥，如半夏厚樸湯、厚樸三物湯的主要原料和出口創(chuàng)匯的重要品種［1-2］。厚樸主要含木脂素類成分［3］(厚樸酚與和厚樸酚)、揮發(fā)油［4-5］(主要為桉葉油)、生物堿［6］(主要為厚樸堿)等。為了保證厚樸的質(zhì)量，歷版《中國藥典》均規(guī)定采收后的厚樸干皮應(yīng)置沸水中微煮后，堆置陰濕處，“發(fā)汗”至內(nèi)表面變紫褐色或棕褐色時(shí)，蒸軟，取出，卷成筒狀，干燥，方能使其達(dá)到“油性大，氣味濃厚，斷面紫紅色，嘴嚼后殘?jiān)佟保?］的目的。但目前在厚樸的產(chǎn)地加工中，除了按《中國藥典》規(guī)定的“發(fā)汗”方法加工外，不少產(chǎn)地采用不經(jīng)“發(fā)汗”直接干燥的方法。而采用“發(fā)汗”加工的，其“發(fā)汗”方法亦有所不同，如文獻(xiàn)中報(bào)道的還有蒸后“發(fā)汗”［8］、切絲置厚型包裝袋中密封“發(fā)汗”［9］等多種“發(fā)汗”方法，且目前還存在厚樸是否需要“發(fā)汗”的分歧［10］。針對(duì)以上問題，本文對(duì)不同加工方法的厚樸中主要有效成分厚樸酚、和厚樸酚及揮發(fā)油和生物堿進(jìn)行了比較研究，為尋找厚樸適宜的產(chǎn)地加工方法提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Shimadzu LC-20AT高效液相色譜儀(SPDM20AT檢測(cè)器，LC-Solution工作站);德國Sartorius公司BP121S電子分析天平(萬分之一);德國Sartorius公司BP211D電子分析天平(十萬分之一);DL-720超聲波清洗機(jī)(上海之信儀器有限公司)。

1.2 試藥

厚樸酚與和厚樸酚對(duì)照品均購自成都曼思特生物科技有限公司(純度均大于98%);甲醇(色譜純，美國天地公司);水為重蒸水;基準(zhǔn)鄰苯二甲酸氫鉀;其他試劑均為分析純。

1.3 藥材

厚樸新鮮樹皮由作者2010年6月采收于四川都江堰市虹口鄉(xiāng)虹口村，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室衛(wèi)瑩芳教授鑒定為木蘭科植物厚樸Mag-nolia officinalisRehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮。

2 方法與結(jié)果

《中國藥典》規(guī)定厚樸根皮及枝皮直接陰干，故本實(shí)驗(yàn)僅對(duì)干皮進(jìn)行不同加工方法的研究。

2.1 未“發(fā)汗”品與不同“發(fā)汗”品的制備

將4棵樹齡均為20年的厚樸整株的干皮平均分為8份，分別按下述方法進(jìn)行加工處理，備用。

2.1.1 直接陰干品 將厚樸新鮮干皮放于陰涼通風(fēng)處，攤開陰干。

2.1.2 鮮品切絲后陰干品 將厚樸切絲后的鮮厚樸絲(5～10 mm)放于陰涼通風(fēng)處，攤開陰干。

2.1.3 煮后“發(fā)汗”品［1］將厚樸新鮮干皮置沸水中微煮后，堆置陰濕處，“發(fā)汗”至內(nèi)表面變紫褐色或棕褐色時(shí)，蒸軟，取出，卷成筒狀，干燥。此方法是歷版《中國藥典》所規(guī)定的方法。

2.1.4 蒸后“發(fā)汗”品 將厚樸新鮮干皮置沸水中微蒸后，堆置陰濕處，“發(fā)汗”至內(nèi)表面變紫褐色或棕褐色時(shí)，蒸軟，取出，卷成筒狀，干燥。

2.1.5 直接堆置“發(fā)汗”品［8］將厚樸新鮮干皮置通風(fēng)處或早晚太陽弱光下曬1 d，堆置陰濕處，上部和四周用青草覆蓋“發(fā)汗”至內(nèi)皮呈紫褐色，即可取出。陰干或早晚弱光太陽下曬干。

2.1.6 煮后切絲厚型包裝袋中“發(fā)汗”品［9］將厚樸新鮮干皮置沸水中微煮后，切制成厚5～10 mm的厚樸絲，用厚型復(fù)合膜包裝袋密封“發(fā)汗”至內(nèi)表面變紫褐色或棕褐色時(shí)，取出，干燥。

2.1.7 蒸后切絲厚型包裝袋中“發(fā)汗”品 將厚樸新鮮干皮置沸水中微蒸后，切制成厚5～10 mm的厚樸絲，用厚型復(fù)合膜包裝袋密封“發(fā)汗”至內(nèi)表面變紫褐色或棕褐色時(shí)，取出，干燥。

2.1.8 鮮品切絲厚型包裝袋中“發(fā)汗”品 將厚樸新鮮干皮切制成厚5～10 mm的厚樸絲，用厚型復(fù)合膜包裝袋密封“發(fā)汗”至內(nèi)表面變紫褐色或棕褐色時(shí)，取出，干燥。

2.2 厚樸酚與和厚樸酚測(cè)定

厚樸酚與和厚樸酚是厚樸的主要有效成分，也是《中國藥典》厚樸質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分，故本文將其總質(zhì)量分?jǐn)?shù)作為重要的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)，按照《中國藥典》2010年版一部厚樸項(xiàng)下所規(guī)定的方法對(duì)不同加工方法的厚樸藥材進(jìn)行HPLC測(cè)定。

2.2.1 色譜條件:色譜柱為 Amethyst C18柱(250 mm ×4.6mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇-水(78 ∶22)，體積流量為1 mL/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長294 nm。理論板數(shù)按厚樸酚峰計(jì)算應(yīng)不低于3800。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備:取厚樸酚對(duì)照品、和厚樸酚對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成質(zhì)量濃度為 40、24 μg/mL 的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備:取本品粉末(過三號(hào)篩)約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25 mL，搖勻，密塞，浸漬24 h，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 線性關(guān)系的考察:分別取厚樸酚與和厚樸酚混合對(duì)照品溶液 0.5、1、2、4、8 mL，加甲醇定容至 10 mL，重復(fù)進(jìn)樣2次，每次5 μL。以峰面積值Y為縱坐標(biāo)，以質(zhì)量濃度X(μg/mL)為橫坐標(biāo)，得線性方程。厚樸酚:Y=8310.7X－6982.6，r=0.999 9，線性范圍:19.965 ～ 319.44 μg/mL;和厚樸酚:Y=8549.7X－4062.5，r=0.999 9，線性范圍:12.01 ～192.16 μg/mL。

2.2.5 樣品測(cè)定:精密吸取供試品溶液5 μL，注入液相色譜儀，測(cè)得峰面積值，代入線性方程，計(jì)算樣品中厚樸酚與和厚樸酚的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見表1。

2.3 生物堿測(cè)定

厚樸主治胸腹脹滿與所含的季銨生物堿，如厚樸堿(木蘭箭毒堿)等相關(guān)。故本實(shí)驗(yàn)將生物堿(以木蘭箭毒堿計(jì))亦作為重要的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)，按照《中國藥典》2010年版一部附錄114非水溶液滴定法進(jìn)行測(cè)定。

2.3.1 0.02 mol/L 高氯酸滴定液的配制與標(biāo)定:按照中國藥典2010年版一部附錄“0.1 mol/L高氯酸滴定液”項(xiàng)下進(jìn)行配制與標(biāo)定，得實(shí)驗(yàn)所用高氯酸濃度為0.019 mol/L。

2.3.2 樣品的制備［11］:取待測(cè)樣品粉末(通過四號(hào)篩)約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇40 mL，稱定質(zhì)量，搖勻，室溫放置過夜(16 h以上)，再稱定質(zhì)量，補(bǔ)足損失的溶劑量，振搖后放置，用濾紙濾過。精密量取續(xù)濾液10 mL，置水浴上蒸干。

2.3.3 生物堿的測(cè)定:殘?jiān)訜o水冰醋酸15 mL使溶解，加結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液(0.02 mol/L)滴定至藍(lán)色，即得。樣品含生物堿以木蘭箭毒堿(C19H24NO3)(314)計(jì)算。

2.3.4 空白試驗(yàn):取供試品測(cè)定時(shí)所用的試劑，在同條件下做空白試驗(yàn)，用高氯酸滴定液(0.02 mol/L)滴定至規(guī)定的突變顏色為終點(diǎn)，其讀數(shù)用于校正供試品滴定的讀數(shù)結(jié)果。

2.4 揮發(fā)油測(cè)定

按照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅩD揮發(fā)油測(cè)定項(xiàng)下測(cè)定。

每份樣品分別取200 g，稱定質(zhì)量(準(zhǔn)確至小數(shù)點(diǎn)后3位)，置2 000 mL燒瓶中，加水1 200 mL，搖勻后，連接揮發(fā)油測(cè)定器與冷凝管。自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測(cè)定器的刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止。置電熱套中緩緩加熱至沸，并保持微沸約5 h，至測(cè)定器中油量不再增加，停止加熱，放置片刻，開啟測(cè)定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達(dá)刻度0線上面5 mm處為止。放置1 h以上，再開啟活塞使油層下降至其上端恰與刻度0線平齊，讀取揮發(fā)油量，并計(jì)算供試品中揮發(fā)油的量(%)。結(jié)果見表1。

表1 厚樸不同加工樣品厚樸酚與和厚樸酚、生物堿、揮發(fā)油質(zhì)量分?jǐn)?shù)(n=3)Tab.1 The contents of magnolol，honokior，alkaloidal and the volatile oil by different processing methods(n=3)

2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

以上結(jié)果表明，在不同的加工方法中，以歷版《中國藥典》所述的厚樸加工方法制得的厚樸藥材(即煮后“發(fā)汗”品，以及相似的蒸后“發(fā)汗”品)中主要的藥效成分厚樸酚與和厚樸酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高。

3 討論

3.1 厚樸“發(fā)汗”之后，厚樸酚與和厚樸酚總量增加，本實(shí)驗(yàn)中最高增加了15%，有報(bào)道［12-13］指發(fā)汗能使厚樸酚與和厚樸酚大幅度提高，最高可達(dá)40%［13］，提高了厚樸的質(zhì)量。發(fā)汗后為什么酚類成分增加，其機(jī)制是什么尚需進(jìn)行進(jìn)一步的研究。同時(shí)，發(fā)汗后可使揮發(fā)油、生物堿降低，但其降低對(duì)厚樸質(zhì)量有何影響?亦需進(jìn)一步結(jié)合GC-MS，藥理試驗(yàn)等進(jìn)行探討。

3.2 與直接陰干品相比，煮后“發(fā)汗”品、蒸后“發(fā)汗”品其主要的藥效成分厚樸酚與和厚樸酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)增加;同樣，與鮮品切絲后陰干品相比，煮后切絲厚型包裝袋“發(fā)汗”品、蒸后切絲厚型包裝袋“發(fā)汗”品總酚亦增加，初步說明在“發(fā)汗”過程中，“微煮”、“微蒸”等加熱過程是影響其主要成分變化的一個(gè)重要因素。

3.3 在采用非水滴定法測(cè)定生物堿時(shí)，按照中國藥典所述方法采用0.1 mol/L的高氯酸滴定液進(jìn)行滴定，但向待測(cè)樣品中滴入1滴即變色，無法準(zhǔn)確計(jì)算樣品中生物堿，將0.1 mol/L的高氯酸滴定液稀釋成0.02 mol/L后，重新進(jìn)行試驗(yàn)，效果較好。另外，在測(cè)定過程中，空氣的相對(duì)濕度影響滴定終點(diǎn)的判定，進(jìn)而影響測(cè)定結(jié)果，故應(yīng)注意工作環(huán)境中水分的干擾。

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