冬凌草分散片溶出度測(cè)定方法的研究

李其鳳， 馮柏康， 李衛(wèi)民， 肖 飛

(廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東廣州 510405)

冬凌草分散片是由冬凌草片經(jīng)改劑型而來(lái)，原 劑型收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》［1］中藥成方制劑第3冊(cè)，功能主治:清熱消腫，用于急慢性扁桃體炎、咽炎、喉炎、口腔炎，試用于抗癌。大量的實(shí)驗(yàn)與文獻(xiàn)證明［2-5］，冬凌草中的有效活性成分為二萜類，其中以冬凌草甲素、冬凌草乙素抗癌作用最為突出。由于冬凌草甲素、冬凌草乙素在水中的溶解度極低，冬凌草片在服用后很難被身體消化吸收、發(fā)揮作用，因此開(kāi)發(fā)其為適用于難溶性成分的分散片劑型。本文以HPLC法測(cè)定冬凌草甲素的含量［6-7］，對(duì)冬凌草分散片的體外溶出度進(jìn)行了研究，為冬凌草分散片的快崩速溶作用提供試驗(yàn)依據(jù)，也為進(jìn)一步臨床研究提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 ZRS-8G智能溶出試驗(yàn)儀(天津市天大天發(fā)科技有限公司 );Waters 2695泵(美國(guó)Waters);Waters 2996二極管陣列檢測(cè)器(美國(guó)Waters);EMPOWER數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)(美國(guó)Waters)。

1.2 試藥 冬凌草分散片(自制，批號(hào):090703、090707、090711)。

1.3 對(duì)照品 冬凌草甲素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所)。

1.4 試劑 甲醇為色譜純(德國(guó)默克)，水為制備純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 RP-18e(5 μm)LiChroCART 250-4色譜柱，200 mm ×4.6 mm，5 μm;流動(dòng)相:甲醇-水(50∶50);檢測(cè)波長(zhǎng):240 nm;按冬凌草甲素色譜峰計(jì)算，理論塔板數(shù)不低于3 500。

2.2 線性關(guān)系的考察 稱取冬凌草甲素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，精密量取1 mL至10 mL量瓶中，加0.1 mol/L的鹽酸溶液定容至刻度，搖勻，微濾，精密吸取上述對(duì)照品溶液 1、2、5、10、15、20 μL，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣量

X(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積值Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果冬凌草甲素對(duì)照品在0.019 64～0.392 8 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，回歸方程為:Y=1 375 484.31X－19 258.69，r=0.999 9。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 取冬凌草甲素對(duì)照品溶液、供試品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，可見(jiàn)供試品中冬凌草甲素與其他組分能達(dá)到基線分離，見(jiàn)圖1、2。

圖1 冬凌草甲素對(duì)照品HPLC圖

圖2 供試品HPLC圖

2.4 溶出方法的選擇［8-9］

2.4.1 溶出方法的選擇

諸暨市的檢調(diào)對(duì)接工作不僅成效顯著，也得到學(xué)界的肯定。有研究者指出，諸暨市人民調(diào)解組織介入刑事和解的探索表明，檢察機(jī)關(guān)與人民調(diào)解組織相互發(fā)力、優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，凝聚成推動(dòng)刑事和解內(nèi)在推動(dòng)力，不僅避免了檢察機(jī)關(guān)在調(diào)解過(guò)程中既當(dāng)裁判員又當(dāng)運(yùn)動(dòng)員的尷尬局面，而且一定程度上緩解了檢察機(jī)關(guān)的“人案矛盾”，提高了刑事訴訟效率。[7]

根據(jù)藥典要求，溶出方法分為轉(zhuǎn)籃法與槳法，取冬凌草分散片分別以轉(zhuǎn)籃法與槳法進(jìn)行溶出度的測(cè)定，溶出介質(zhì)為0.1 mol/L的鹽酸900 mL，轉(zhuǎn)速為100轉(zhuǎn)，分別于45 min取樣，微濾，依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。轉(zhuǎn)籃法測(cè)定的溶出度較槳法低，且相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)平均偏差較大。

表1溶出方法的選擇

結(jié)論:試驗(yàn)結(jié)果表明，選擇《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄X C溶出測(cè)定法第二法槳法作為溶出測(cè)定方法。

2.4.2 轉(zhuǎn)速的選擇

取冬凌草分散片按照《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄X C溶出測(cè)定法第二法槳法分別以60、80、100、120 r/min進(jìn)行溶出度的測(cè)定，溶出介質(zhì)為0.1 mol/L的鹽酸900 mL，分別于45 min取樣，微濾，依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2、圖3。轉(zhuǎn)速越大，溶出度越高，當(dāng)轉(zhuǎn)速達(dá)到100 r/min后，溶出度基本不再增加。選擇100 r/min作為溶出測(cè)定的轉(zhuǎn)速。測(cè)定，溶出介質(zhì)為0.1 mol/L的鹽酸900 mL，轉(zhuǎn)速為100 r/min，分別于 5、10、15、30、45、60、90、120 min取樣1 mL，微濾，依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表3。冬凌草分散片隨時(shí)間的增加，溶出量亦相應(yīng)增加，但在45 min后，溶出度增加很少，因此，確定溶出時(shí)間為45 min。

表2 不同轉(zhuǎn)速下溶出度的比較/%

圖3 不同轉(zhuǎn)速下溶出度的比較

2.4.3 溶出曲線

取冬凌草分散片按照《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄XC溶出測(cè)定法第二法槳法進(jìn)行溶出度的

表3 不同取樣時(shí)間的溶出度測(cè)定/%

2.5 空白試驗(yàn) 精密稱取缺冬凌草的陰性樣品，按溶出供試品溶液制備方法操作，依法進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果在與冬凌草甲素對(duì)照品相同保留時(shí)間處無(wú)吸收峰。表明樣品中無(wú)干擾冬凌草甲素的成分存在。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取一批樣品，按上述溶出度測(cè)定方法，測(cè)定6次，計(jì)算溶出度，求得冬凌草甲素平均溶出度為96.10%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.14%。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液，在室溫下，分別于配制后 0、2、4、6、8、12 h 進(jìn)行冬凌草甲素峰面積測(cè)定，每次進(jìn)樣10 μL，測(cè)得供試品中冬凌草甲素的平均峰面積值為238 214，RSD為1.99%。試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 回收率測(cè)定 取已知含量的同一批號(hào)樣品，除去包衣，研細(xì)，取約16 mg，精密稱定，精密加入冬凌草甲素對(duì)照品溶液(0.196 4 mg/mL)2 mL，置50 mL量瓶中，加入0.1 mol/L鹽酸溶液約20 mL，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)10 min，放冷，加0.1 mol/L鹽酸溶液定容至刻度，搖勻，微濾，取續(xù)濾液。吸取10 μL，按色譜條件方法，進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算，求得冬凌草甲素平均回收率為100.49%，RSD為1.73%。

2.10 樣品溶出度測(cè)定 取本品，照溶出度測(cè)定法(《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄X C第二法)，以0.1 mol/L的鹽酸溶液900 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min，依法操作，經(jīng)45 min時(shí)，取溶液5 mL，微濾，作為供試品溶液。另稱取冬凌草甲素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，精密量取 1 mL至 10 mL量瓶中，加 0.1 mol/L的鹽酸溶液定容至刻度，搖勻，微濾，作為對(duì)照品溶液。吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算每片的溶出量。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 樣品含量測(cè)定

本品3批樣品，平均溶出度為95.74%。

3 討論

3.1 分別選用蒸餾水、0.1 mol/L HCl為溶出介質(zhì)，試驗(yàn)結(jié)果表明以0.1 mol/L HCl為溶出介質(zhì)的溶出度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于水，可能是由于冬凌草甲素在水中的溶解度極低。

3.2 分別以轉(zhuǎn)籃法與槳法進(jìn)行溶出度的測(cè)定，轉(zhuǎn)籃法測(cè)定的溶出度較槳法低，且相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)平均偏差較大。

3.3 采用槳法，以0.1 mol/L HCl為溶出介質(zhì)，分別以60、80、100、120 r/min 進(jìn)行溶出度的測(cè)定，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)速越大，溶出度越高，當(dāng)轉(zhuǎn)速達(dá)到100 r/min后，溶出度基本不再增加。

3.4 分別于 5、10、15、30、45、60、90、120 min 進(jìn)行溶出度的測(cè)定，結(jié)果顯示冬凌草分散片隨時(shí)間的增加，溶出量亦相應(yīng)增加，但在45 min后，溶出度增加很少，因此，確定溶出時(shí)間為45 min。

3.5 制劑中其它成份對(duì)冬凌草甲素的溶出度測(cè)定無(wú)干擾，本方法較為準(zhǔn)確可靠，可作為冬凌草分散片的質(zhì)量控制的方法。

3.6 體外溶出試驗(yàn)結(jié)果表明，冬凌草分散片不僅崩解速度快，而且溶出迅速，為進(jìn)一步的臨床研究提供了理論依據(jù)。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑［S］.第3冊(cè).1991:59.

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