乳腺癌組織中MCL1的表達(dá)及臨床意義

朱華云， 錢志英， 徐 霞

MCL1(myeloid cell leukemia-1)屬于Bcl-2家族成員之一，大量的文獻(xiàn)研究表明MCL1參與多種細(xì)胞的存活［1-2］。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，MCL1在多種腫瘤中表達(dá)升高，并與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。其主要通過(guò)干擾信號(hào)通路的早期分子事件促使線粒體釋放細(xì)胞色素C，從而維持細(xì)胞的增殖，是控制細(xì)胞凋亡的一個(gè)重要分子［3］，因此MCL1已成為針對(duì)腫瘤治療的有效靶點(diǎn)之一。本研究通過(guò)檢測(cè)78例乳腺癌組織中MCL1的表達(dá)水平，初步探討MCL1與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院乳腺外科2009年1月至2009年12月行乳腺癌手術(shù)的組織標(biāo)本78例，另選取其中的40例乳腺癌組織旁的正常乳腺組織作為對(duì)照組。78例均為女性，年齡25～79歲，平均年齡50歲。其中絕經(jīng)前56例，絕經(jīng)后22例。所有患者術(shù)前經(jīng)病理診斷證實(shí)，術(shù)后病理診斷為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌74例，浸潤(rùn)性小葉癌3例，黏液腺癌1例。臨床分期(AJCC 2002年)Ⅰ期17例，Ⅱ期53例，Ⅲ期8例。所有患者手術(shù)前均未接受過(guò)放療、化療或其他抗腫瘤治療。

1.2 試劑和方法 MCL1多克隆抗體購(gòu)于ABCAM公司，二抗購(gòu)于北京中衫生物技術(shù)有限公司。收集的全部標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛液固定，梯度脫水、浸蠟和包埋。所取蠟塊行5 μm連續(xù)切片、烘烤、脫蠟、HE染色、透明和封片。所有標(biāo)本均經(jīng)本院病理科兩位副主任醫(yī)師以上職稱的病理醫(yī)師診斷證實(shí)，并有完整的臨床和病理資料。

應(yīng)用兔抗人MCL1多克隆抗體對(duì)乳腺癌及癌旁正常乳腺組織中MCL1蛋白進(jìn)行免疫組化DAB法檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)步驟如下:(1)石蠟片常規(guī)脫蠟。二甲苯洗滌后，分別用100%、95% 、85%乙醇、自來(lái)水及蒸餾水按梯度脫水。(2)阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。3%雙氧水孵育10 min。(3)抗原修復(fù)。利用微波修復(fù)抗原10 min。(4)封閉。滴加非免疫血清，室溫孵育1.5 h。(5)加一抗工作液。加入1∶100兔抗人MCL1多克隆抗體4℃過(guò)夜。(6)加二抗工作液。加入生物素標(biāo)記的二抗工作液，37℃孵育30 min。(7)DAB染色。(8)蘇木素復(fù)染。(9)封片。(10)鏡下觀察。

1.3 結(jié)果判斷 細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核上存在棕黃色顆粒判為陽(yáng)性細(xì)胞，選背景清晰、陽(yáng)性表達(dá)效果好的切片作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。每張切片隨機(jī)選擇5～10個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)1 000個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞，取其平均數(shù)計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩樣本均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)采用t'檢驗(yàn)，多個(gè)樣本均數(shù)的資料采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MCL1蛋白在乳腺癌及癌旁正常乳腺組織中的表達(dá) MCL1在乳腺癌旁正常乳腺組織中幾乎不表達(dá)(圖A)，但是在乳腺癌腺上皮細(xì)胞中呈高表達(dá)(圖B)，MCL1平均陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率為49.11%，同時(shí)表達(dá)存在異質(zhì)性。兩組MCL1陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率存在明顯區(qū)別，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，提示乳腺癌組織存在MCL1異常高表達(dá)現(xiàn)象。此外，MCL1在腫瘤組織中的表達(dá)也存在異質(zhì)性，在分化差的腫瘤組織中MCL1表達(dá)水平更高。

圖B MCL1在乳腺癌組織中的表達(dá) ×200

2.2 MCL1蛋白表達(dá)與乳腺癌臨床病理因素的關(guān)系 由表1可見，臨床病理Ⅲ期組織中MCL1表達(dá)明顯高于Ⅰ期和Ⅱ期(P＜0.05)，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤組織中MCL1表達(dá)明顯高于未轉(zhuǎn)移者(P＜0.05)，而MCL1蛋白的表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小、是否絕經(jīng)均無(wú)關(guān)。

3 討論

乳腺癌是最常見的女性惡性腫瘤之一，近年來(lái)其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。研究乳腺癌的病理機(jī)制不僅可為其預(yù)后判定提供獨(dú)立的新指標(biāo)，也為臨床治療提供新的手段。

已知細(xì)胞凋亡過(guò)程中的調(diào)控環(huán)節(jié)異?？墒笵NA受損，干擾其程序性凋亡，致使細(xì)胞無(wú)限制生長(zhǎng)，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展［4］。以往的研究表明Bcl-2基因是細(xì)胞凋亡過(guò)程中線粒體途徑的主要調(diào)控因子，其表達(dá)與乳腺癌臨床生物學(xué)行為密切相關(guān)，可以作為判斷乳腺癌預(yù)后的指標(biāo)［5］。MCL1屬于Bcl-2家族蛋白，但是和Bcl-2不同的是，MCL1在細(xì)胞內(nèi)更容易被誘導(dǎo)［6］，且半衰期更短［7］。此外，MCL1 在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)更為廣泛，除了在線粒體膜上有表達(dá)，在細(xì)胞核和細(xì)胞漿中均有表達(dá)［8］。近年來(lái)人們逐漸關(guān)注MCL1蛋白在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，研究結(jié)果提示MCL1在多種實(shí)體瘤中均發(fā)揮著重要的作用。MCL1表達(dá)上調(diào)提示腫瘤的發(fā)生，超過(guò)85%的轉(zhuǎn)MCL1基因小鼠在2年內(nèi)發(fā)生了B細(xì)胞淋巴瘤［9］;MCL1高表達(dá)還與胃癌發(fā)生有關(guān)，可作為胃癌早期預(yù)警的重要指標(biāo)［10-11］。而且，MCL1表達(dá)下調(diào)能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，表明其可能成為一些惡性腫瘤的潛在治療靶標(biāo)。

表1 MCL1蛋白與乳腺癌臨床病理因素的關(guān)系

盡管目前已有較多研究顯示MCL1在很多腫瘤中呈高表達(dá)，但是在乳腺癌中的作用尚未見報(bào)道。本研究采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)78例乳腺癌及40例癌旁正常乳腺組織中MCL1蛋白的表達(dá)水平，探討MCL1蛋白與乳腺癌的臨床病理關(guān)系，發(fā)現(xiàn)MCL1蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中的表達(dá)高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，且與乳腺癌的分化程度有關(guān)，提示MCL1基因可作為乳腺癌治療的有效靶點(diǎn)。

綜上所述，MCL1蛋白的高表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，為研究乳腺癌的發(fā)病機(jī)制及治療手段提供了一個(gè)新思路。

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