宮腔內(nèi)人工授精助孕患者精子制備方法的選擇策略

蔣麗 卓英梅

(沈陽市婦嬰醫(yī)院 沈陽 110014)

人工授精是通過非性交的方式將精子注入女性生殖道內(nèi)而使其獲得妊娠的助孕技術(shù),IUI是人工授精中成功率較高且最常用的方法。其原理是為了減少妨礙精子前進(jìn)的因素,如陰道的酸性環(huán)境和宮頸粘液的干擾,并通過濃縮的、活力高、形態(tài)正常的精子盡可能接近卵子,從而易于受孕。IUI應(yīng)用于臨床已有200多年的歷史,隨著體外受精-胚胎移植(IVF-ET)技術(shù)發(fā)展而來的各種精子制備方法帶來了IUI的復(fù)興。目前IUI已成為輸卵管通暢的不孕婦女助孕治療的首選方法。本研究主要通過比較不同精子處理方法對精子參數(shù)及妊娠率的影響,從而為自然周期IUI助孕患者選擇最佳精子處理方案。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對象為2006年至2010年4月于本生殖中心行自然周期IUI助孕治療的第一周期患者共200例,所有患者丈夫精液均正常[1]。采用區(qū)組隨機(jī)分組的方法分為4組,每組50例,按照精子制備方法分別為標(biāo)準(zhǔn)上游組,直接上游組,密度梯度離心組和密度梯度離心加直接上游組[2]。研究對象平均年齡為(26.4±3.7)(21～35)歲,平均不孕年限為(4.5±1.7)(2～14)年;病因分類,特發(fā)性不孕185例(92.5%),宮頸因素6例(3.0%),免疫性不孕6人(3.0%),其它因素3例(1.5%)。所有患者均通過測定血清或尿LH峰及超聲監(jiān)測卵泡的生長及破裂來確定IUI的時間,必要時需肌注hCG10000IU。

1.2 方法

精子的計數(shù)應(yīng)用Mak1er計數(shù)板。精子形態(tài)學(xué)分析應(yīng)用伊紅-蘇木精染色法[1],妊娠結(jié)果的判定:IUI 28d后行超聲監(jiān)測到胎囊及胎心。所用試劑為IVF培養(yǎng)液,SpermGrad-30及SpermRinse洗精液(均來自Vitro1ife,瑞典)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

結(jié)果采用SSPS 16.0軟件進(jìn)行分析,定量數(shù)據(jù)應(yīng)用單向方差分析,定性數(shù)據(jù)采用c2檢驗,P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

4組患者的一般情況,包括年齡、不孕年限及病因分類無差異。4組患者的妊娠率、活產(chǎn)率及流產(chǎn)率無差異。密度梯度離心組的精子處理時間最少(13.5分),標(biāo)準(zhǔn)上游組時間最長(56.4分)。密度梯度離組的a＋b級精子回收率最高(42.5±15.7)%,直接上游組最低(18.6±6.3)%。密度梯度離組a＋b級精子總回收數(shù)最高(55.3±25.7)百萬,直接上游組最低(27.9±12.6)百萬?；厥站踊吐拭芏忍荻入x心組(26.5±11.6)%和密度梯度離心加上游組(24.7±12.8)%低于標(biāo)準(zhǔn)上游組及組,具體統(tǒng)計數(shù)據(jù)見表1。

表1 各組患者妊娠率、活產(chǎn)率、流產(chǎn)率及精子參數(shù)的比較()

表1 各組患者妊娠率、活產(chǎn)率、流產(chǎn)率及精子參數(shù)的比較()

注:a:1例輸卵管妊娠于孕4周終止妊娠;b:1例因腹部意外受傷流產(chǎn);c:1例雙胎妊娠,妊娠數(shù)及活產(chǎn)數(shù)均按1計數(shù);*P＜0.05

分組 標(biāo)準(zhǔn)上游組 直接上游組 密度梯度離心組 密度梯度離心加直接上游組 P年齡(歲) 25.9±4.1 27.4±5.4 26.9±4.6 25.3±6.3 ＞0.05精子處理時間(分) 56.4±7.8 41.5±5.7 (13.5±2.3)* 31.3±6.4 ＜0.05妊娠數(shù)/妊娠率(%) 9/18.0 8/16.0 11/22.0 (10/20.0)c ＞0.05活產(chǎn)數(shù)/活產(chǎn)率(%) 8/16.0 (7/16.0)a (8/16.0)b (8/16.0)c ＞0.05流產(chǎn)數(shù)/流產(chǎn)率(%) 1/11.1 0/0 3/27.3 2/20.0 ＞0.05 a＋b級精子回收率(%) 23.5±7.1 18.6±6.3 (42.5±15.7)* (39.7±13.8)* ＜0.05 a＋b級精子總回收數(shù)(百萬) 32.7±13.8 27.9±12.6 (55.3±25.7)* (48.9±20.3)* ＜0.05回收精子畸型率(%) 47.3±21.8 44.7±20.1 (26.5±11.6)* (24.7±12.8)* ＜0.05

3 結(jié)語

對于丈夫精液正常行自然周期IUI助孕治療的第一周期年齡＜35歲的患者,精子制備方法首選直接上游法。

4 討論

影響IUI成功的因素主要包括不孕的病因;夫婦的年齡;不孕的年限;治療的周期數(shù)及精子的參數(shù)。女性年齡＞35歲,由于卵子質(zhì)量下降及子宮內(nèi)膜容受性降低,其生殖能力開始下降[3],這部分患者更傾向于IVF治療,因此被排除。丈夫精子輕度異常的患者也會由于IVF的高妊娠率而選擇后者治療,該部分患者也被排除。精子處理的過程實際上就是體外精子的優(yōu)選過程,目前應(yīng)用于臨床的精子處理方法有多種,如精子上游法、精子下游法、玻璃纖維濾過法、高速離心法及密度梯度離心法等,各有優(yōu)缺點[4]。由于本研究對象丈夫精子正常,因此,選擇了上游法和密度梯度離心法作為精子制備的方法。

精子的活力分級和正常形態(tài)精子的百分比是關(guān)于生殖預(yù)后的2個最重要的參數(shù)[5]。盡管密度梯度離心法在處理時間、精子回收率及回收精子畸型率均優(yōu)于上游法[6],對于正常精液患者,上游法還是能夠回收足夠正常的a＋b級精子來完成IUI助孕治療的。而且上游法在整個處理過程中除了培養(yǎng)液,不含其它化學(xué)物質(zhì)[7],這不僅節(jié)約了成本,而其會去除密度梯度液可能對精子的影響,這是上游法的最大優(yōu)點。直接上游法離心時間(200g,5分)低于標(biāo)準(zhǔn)上游法(300g,20分),處理方法也比標(biāo)準(zhǔn)上游法簡便,更適用于臨床操作。

任何一個行IUI助孕治療的夫婦最關(guān)心的不是精子處理時間、精子回收率和臨床妊娠率,而是活產(chǎn)率。本研究顯示直接上游法的流產(chǎn)率有低于密度梯度離心法的趨勢,盡管無統(tǒng)計學(xué)差異,這可能是因為病例較少造成的。密度梯度離心法的優(yōu)點是獲得活動精子數(shù)最多,其畸型精子比例降低,但該方法精子需承受較高的離心力(400～500g,10～15分),尤其是后者,會使活性氧急劇升高[8],導(dǎo)致精子細(xì)胞膜流動性降低或喪失,這可能會影響胚胎發(fā)育的潛能。

研究結(jié)果顯示,年齡＜35歲且丈夫精液正常的患者,直接上游法是行自然周期IUI第一周期助孕治療的首選方案。該方法不僅能提供足夠的正常的a＋b級精子,而且能去除密度梯度液及離心時對精子的影響,另外,該操作也是最簡單和成本最低的。

[1]谷翊群,陳振文,于和鳴,等.WHO人類精液及精子-宮頸粘液相互作用實驗室檢驗手冊[M].第4版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:5～64.

[2]莊廣倫.現(xiàn)代輔助生育技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:226～229.