HPLC法測定鹽酸頭孢他美酯顆粒的含量

馬 麗，李鐵健

鹽酸頭孢他美酯為半合成第三代口服頭孢菌素類抗生素，能夠有效抑制鏈球菌類等革蘭陽性菌和大腸桿菌等革蘭陰性菌，并對多種細菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定，具有較好的抗菌活性。臨床主要用于敏感菌所致的肺炎、急性支氣管炎、咽喉炎、扁桃體炎、尿路感染及婦產(chǎn)科、外科、耳鼻咽喉科和口腔科等感染［1-3］。根據(jù)中國藥典對藥品質(zhì)量控制的要求，本實驗對研制的新藥鹽酸頭孢他美酯顆粒的質(zhì)量標(biāo)準進行了研究，建立了HPLC法測定該制劑的含量，并進行了方法學(xué)考察［4-6］。

1 儀器與試藥

儀器:Agilent 1100高效液相色譜儀，包括紫外檢測器、四元泵、在線脫氣機、柱溫箱、自動進樣器、Chemstation色譜工作站。

對照品:鹽酸頭孢他美酯(中國藥品生物制品檢定所)，批號:130512-200201，含量:71.3%。頭孢他美酸:自制，純度＞99.9%。

試藥:鹽酸頭孢他美酯顆粒(自制)，批號:091101、091102、091103。乙腈、甲醇為色譜純(美國TEDIA公司)，水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 試驗溶液的制備

2.1.1 系統(tǒng)適用性溶液的制備 精密稱取頭孢他美酸10 mg置于100 mL量瓶中，乙腈(9→20)溶液溶解并定容。取此溶液5 mL、頭孢他美酯14 mg置10 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液制成含頭孢他美酸 0.05mg/mL、頭孢他美酯1.4 mg/mL的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。

圖1 鹽酸頭孢他美酯顆粒HPLC色譜圖注:A.輔料溶液，B.系統(tǒng)適用性溶液，C.對照溶液，D.樣品溶液。1.頭孢他美酸，2.頭孢他美酯

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取頭孢他美酯對照品28 mg(約相當(dāng)于頭孢他美20 mg)置于100 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液溶解并稀釋至刻度，得含頭孢他美為0.2 mg/mL的對照溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 取本品10袋，稱重，計算平均裝量，精密稱取本品細粉適量(約相當(dāng)于頭孢他美20 mg)，置100 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm濾膜過濾，即得。

2.1.4 輔料溶液(陰性對照)的制備 按照處方比例稱取輔料適量，置100 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液溶解并稀釋至刻度，即得。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性 色譜柱:Agela XBP-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈-甲醇-水-磷酸鹽緩沖液(取無水磷酸氫二鈉5.8 g與磷酸二氫鉀3.5 g，加水溶解并稀釋成1 000 mL)(360∶90∶500∶45)為流動相;檢測波長:263 nm;流速:1.0 mL/min;進樣量:20 μL。取系統(tǒng)適用性溶液，依法連續(xù)進樣6次，要求頭孢他美酯峰面積的RSD≤2%，理論塔板數(shù)按頭孢他美酯色譜峰計 ＞5 000，其與頭孢他美酸峰(tR=1.35 min)的分離度應(yīng)＞28.0，頭孢他美酯峰(tR=12.9 min)與其相對保留時間RRT約為0.9和1.1處雜質(zhì)峰的分離度均應(yīng)＞2.0。色譜圖見圖1。

2.3 線性曲線的繪制 精密稱取頭孢他美酯對照品(含量71.3%)28.85 mg置于50 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液溶解并稀釋至刻度，得含頭孢他美0.411 4 mg/mL對照儲備溶液，分別精密量取此溶液7.0、6.0、5.0、4.5、4.0、3.0 mL 到10 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液稀釋至刻度，搖勻。照含量測定項下的方法測定，以濃度C(μg/mL)對頭孢他美酯峰面積(A)進行線性回歸，得回歸方程:Y=18.65 X-40.791，r=0.999 7。結(jié)果表明，頭孢他美的濃度在123.42～287.98 μg/mL范圍內(nèi)線性良好。

2.4 精密度試驗 取對照品溶液，按測定的色譜條件，連續(xù)進樣6次，記錄頭孢他美酯的峰面積，計算RSD為0.77%(n=6)，表明精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗 取對照品溶液和樣品溶液，分別在 0、2、4、6、8、12 h 進樣分析，記錄頭孢他美酯峰面積，計算RSD分別為0.74%和0.68%(n=6)，表明在12 h內(nèi)對照溶液和樣品溶液基本穩(wěn)定。2.6 重復(fù)性實驗 精密稱取同一批次藥品細粉6份，按樣品溶液制備方法操作，分別進樣，記錄頭孢他美酯峰面積，計算含量，RSD為0.51%(n=6)，表明本方法重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗 根據(jù)鹽酸頭孢他美酯顆粒的配比，在412 mg輔料中分別加入頭孢他美酯對照品 22.4 mg(80%)、28 mg(100%)、33.6 mg(120%)各3份，置于100 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液溶解并稀釋至刻度，得回收率試驗溶液。以測得量與加入量的比值作為回收率。結(jié)果3個濃度下的平均回收率為100.3%，RSD=0.50%(n=9)，表明本方法回收率較高(見表1)。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(mg，n=9)

2.8 樣品測定 按上述“2.2”方法制備溶液，對3個批次(091101、091102、091103)鹽酸頭孢他美酯顆粒的含量進行測定，結(jié)果見表2。

表2 三批樣品含量測定結(jié)果(%，n=2)

3 討論

為了有效控制鹽酸頭孢他美酯顆粒的質(zhì)量，通過參考相關(guān)文獻［5-6］，本文決定采用HPLC法測定本品的含量。實驗表明，采用本方法測定鹽酸頭孢他美酯顆粒的含量具有較高的準確度和精密度，主成分在該條件下能與其他雜質(zhì)完全分離，可訂入標(biāo)準中，用于控制本品質(zhì)量。

［1］ 姜佳峰.鹽酸頭孢他美酯的合成［J］.齊魯藥事，2008，27(8):489-491.

［2］ 李華，黃莉.鹽酸頭孢他美酯膠囊溶出度方法的研究［J］.山東醫(yī)藥工業(yè)，2001，20(4):1-3.

［3］ 馬錦芳，鄭勁平，江梅.鹽酸頭孢他美酯膠囊單獨或序貫治療急性支氣管炎和肺炎的療效觀察［J］.實用醫(yī)學(xué)雜志，2009，25(12):2051-2053.

［4］ 于世林.高效液相色譜方法及應(yīng)用［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000:69.

［5］ 鮮楊，龍恩武，袁浩宇.反相高效液相色譜法測定鹽酸頭孢他美酯膠囊中頭孢他美含量［J］.中國藥業(yè)，2010，19(7):31-32.

［6］ 中國藥典.2010年版(二部).北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:667-669.