高效液相色譜法測定風濕痹康膠囊中士的寧含量

(吉林省食品藥品檢驗所，吉林 長春 130033)

風濕痹康膠囊是由土茯苓、青風藤、白屈菜、馬錢子粉、麻黃等16味藥組成，處方比較復雜、特殊，其中26.92%為土茯苓,13.4%為穿山龍，12.9%為馬錢子粉，10.7%為青風藤及白屈菜，8.1%為川牛膝，3.2%為當歸，1.1%為蜈蚣，其余藥味各占1.6%，土茯苓雖為本方君藥，但其基礎研究較差，暫無法建立含量測定。馬錢子粉為馬錢子的炮制品，馬錢子為馬錢科植物馬錢Strychnosnux-vomicaL.的干燥成熟種子，主要含生物堿:馬錢子堿(Brucine)、士的寧(Strychnine)、馬錢子新堿(Novacine)等。其有效與毒性成分均為士的寧，故應嚴格控制其含量，以控制該制劑內(nèi)在質(zhì)量，保證其安全、可靠。采用高效液相色譜法對方中士的寧含量進行測定，并以其為指標來控制本品的質(zhì)量。

1 實驗材料

Agilent 1100高效液相色譜儀；DAD二極管陣列檢測器。士的寧對照品(批號：171242-200404)(中國藥品生物制品檢定所)，風濕痹康膠囊(吉林方大藥業(yè)集團股份有限公司，批號20040901、20050103、20050701);乙腈為色譜純，甲醇為優(yōu)級純，水為超純水，其他試劑為化學純。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Apollo C18(5 μm，4.6 mm×250 mm)；以乙腈-0.01 mol/L庚烷磺酸鈉與0.02 mol/L磷酸二氫鉀等量混合溶液(用10%磷酸調(diào)節(jié)pH值2.8)(19∶81)為流動相；流速0.8 mL/min；檢測波長為260 nm；柱溫：40 ℃；進樣量：5 μL；分離度大于1.5；理論板數(shù)按士的寧峰計算應不得低于6 000。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取士的寧對照品15 mg于50 mL量瓶中，加三氯甲烷使溶解并稀釋至刻度；精密量取5 mL于50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項下的本品內(nèi)容物，混勻，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷25 mL與濃氨試液1 mL,密塞，輕輕振搖，稱定重量，回流提取1 h，放冷,再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL，蒸干，殘渣加三氯甲烷3 mL使溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 陰性對照溶液的制備 取本品處方不含馬錢子粉的陰性對照樣品，按2.3項下方法制備。

2.5 線性關系考察 精密稱取士的寧對照品適量，加甲醇制成每毫升含0.035 58 mg的溶液。分別精密吸取1、3、5、7、9 μL，注入液相色譜儀，測定，以對照品進樣量(μg)為橫坐標，以峰面積值為縱坐標繪制標準曲線，計算回歸方程，Y=2 492.6X-1.69(r=0.999 9)，結(jié)果表明士的寧在0.036～0.32 μg范圍內(nèi)，標準曲線線性關系良好，符合外標法定量測定的要求。

2.6 精密度試驗 精密吸取同一供試品溶液5 μL，注入液相色譜儀，重復6次，測定，士的寧峰面積均值424.632 7，RSD%為0.89。結(jié)果表明，所用儀器具良好的精密性。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，按上述色譜條件測定，士的寧峰面積均值435.073 7，RSD%為1.79。結(jié)果表明，供試品溶液在15 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 重復性試驗 取同一批樣品6分，按2.3項下方法制備，進行測定，結(jié)果士的寧均值1.678 mg/g，RSD%為2.08。結(jié)果表明，本法具良好重復性。

2.9 回收率試驗 精密稱取已知含量的同一批號樣品(士的寧1.678 mg/g)6分，分別精密加入對照品溶液0.355 8 mg，依法測定，計算回收率，測得士的寧平均回收率為99.61%；RSD%為1.36。結(jié)果表明，本法回收率較好，準確度較高。

2.10 樣品測定 依上述方法測定6批樣品，結(jié)果6批樣品中士的寧含量分別為0.502、0.507、0.368、0.457、0.453、0.450 mg/g。

3 結(jié)論

3.1 流動相的選擇 參照2005年版藥典的方法，采用乙腈-0.01 mol/L庚烷磺酸鈉與0.02 mol/L磷酸二氫鉀等量混合溶液(用10%磷酸調(diào)節(jié)pH值2.8)系統(tǒng)為本法流動相，通過試驗，將二者比例調(diào)至19∶81，在此條件下，供試品圖譜基線平穩(wěn)，供試品得到很好的分離，主峰前后無雜峰，保留時間比較適中。

3.2 提取方法的考察 取本品，混勻，作為供試品。1)取供試品0.5 g，精密稱定，置具塞錐型瓶中，精密加入三氯甲烷25 mL與濃氨試液1 mL，密塞，輕輕振搖，稱定重量，放置24 h，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL，蒸干，殘渣加三氯甲烷3 mL使溶解,轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。2)用超聲處理30 min代替放置24 h，其余照1)方法操作。3)加熱回流1 h代替放置24 h,其余照1)方法操作。按上述色譜條件進行測定,結(jié)果以方法3)測定含量略高,故選擇方法3)，即回流法。

[1]中華人民共和國藥典委員會.中國藥典一部[M].北京：化學工業(yè)出版社，2005:34.