高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方金銀花顆粒中綠原酸含量

(江蘇省宿遷市藥品檢驗(yàn)所，江蘇 宿遷 223800)

復(fù)方金銀花顆粒是臨床上常用的感冒、喉痹類非處方藥，由金銀花、連翹、黃芩3味藥制成，具清熱解毒、涼血消腫功效。綠原酸是金銀花的主要有效成分，具有廣譜抗菌、抗病毒、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫及解熱抗炎、利膽、保肝、降脂、抗生育、止血、抗?jié)兊榷喾N藥理作用[1]?，F(xiàn)行檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中只有金銀花主要成分綠原酸的化學(xué)鑒別方法[2]，不但專屬性差，且無(wú)法控制其含量，筆者采用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方金銀花顆粒中綠原酸的含量，以更好地控制藥物質(zhì)量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫);AUW 120 D型電子天平(日本島津);SK 8200 LH型超聲儀(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。復(fù)方金銀花顆粒(市售品);綠原酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110753－200413);乙腈為色譜醇，水為重蒸水，其他試劑為分析醇。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent TC－C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈－0.4%磷酸溶液(13∶87);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):327 nm;柱溫:25 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

稱取復(fù)方金銀花顆粒3 g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。精密稱取綠原酸對(duì)照品10 mg，置50 mL棕色量瓶中，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液(10℃以下保存);取對(duì)照品貯備液2 mL，用50%甲醇稀釋至10 mL，搖勻，作為對(duì)照品溶液。按處方量制備缺金銀花的陰性對(duì)照樣品，同供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1)。結(jié)果表明，陰性對(duì)照品溶液不干擾綠原酸的測(cè)定。

線性關(guān)系考察:精密量取對(duì)照品貯備液 1，2，3，4，5 mL，用 50%甲醇稀釋至 10 mL棕色量瓶中，搖勻。取上述溶液，分別進(jìn)樣10 μL。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=407.6 X+5.44，r=0.999 5(n=5)。結(jié)果表明，綠原酸進(jìn)樣量在 0.2 ～1.0 μg 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液，進(jìn)樣10 μL，重復(fù)5次，記錄對(duì)照品峰面積。結(jié)果的 RSD=0.9%(n=5)。

重復(fù)性試驗(yàn):精密稱取同一批樣品5份，按照供試品溶液制備方法制備溶液，注入液相色譜儀測(cè)定綠原酸含量。結(jié)果的 RSD=1.5%(n=5)。

加樣回收試驗(yàn):稱取已知含量的復(fù)方金銀花顆粒1.5 g，按供試品溶液制備方法處理，精密量取續(xù)濾液5 mL，分別置9個(gè)25 mL棕色量瓶中，每3份為1組，每組分別加對(duì)照品貯備液1.2，1.5，1.8 mL，加50%甲醇至刻度，搖勻，依法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 綠原酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測(cè)定

分別稱取3批樣品3 g，按供試品溶液制備方法制備溶液，取上述供試品溶液和對(duì)照品溶液，進(jìn)樣10 μL，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算綠原酸的百分含量。結(jié)果批號(hào)為090613，090415，090809的3批樣品中綠原酸含量分別為 46.8，40.5，35.9 mg/袋。

3 討論

綠原酸穩(wěn)定性較差，易分解，故貯備液一定要在10℃以下保存，且所用玻璃儀器應(yīng)為棕色以避光。3批樣品中綠原酸含量差異較大，說(shuō)明生產(chǎn)中沒(méi)有嚴(yán)格控制投料，或金銀花藥材中綠原酸含量差異較大。筆者所用高效液相色譜法測(cè)定綠原酸含量，方法準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好，可作為產(chǎn)品中綠原酸的含量測(cè)定方法。

[1]何顯忠，蘭榮德.金銀花的藥理作用與臨床應(yīng)用[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2004，15(12):865－867.

[2]WS3－B－1985－95，衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十七冊(cè))[S].